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牛肠道病毒2型的分离与鉴定 被引量：20
1
作者 彭小薇 董浩 +3 位作者 吴丹 张鹤晓 吴清民 吕艳丽 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期823-828,共6页
本研究从北京某牛场发生严重腹泻的泌乳奶牛采集直肠拭子,接种MDBK细胞,分离获得1株病毒,命名为BJ001。理化特性鉴定结果表明,该病毒大小约30nm,为无囊膜的RNA病毒;用随机PCR方法对氯化铯梯度离心后的各区带扩增,扩增产物凝胶电泳后,回... 本研究从北京某牛场发生严重腹泻的泌乳奶牛采集直肠拭子,接种MDBK细胞,分离获得1株病毒,命名为BJ001。理化特性鉴定结果表明,该病毒大小约30nm,为无囊膜的RNA病毒;用随机PCR方法对氯化铯梯度离心后的各区带扩增,扩增产物凝胶电泳后,回收"呈彗尾样拖带现象"最明显的区带2的500～1 500bp的片段进行序列测定与分析,结果显示,扩增片段与GenBank中已知的牛肠道病毒2型相似性较高;用BEV2型特异性引物对病毒进行RT-PCR扩增,并将扩增产物进行序列测定与分析,结果表明,其与BEV2相似性最高可达93%。故该病毒被确定为牛肠道病毒2型。将该病毒接种2头成年健康奶牛,均未出现肉眼可见的临床症状,但病毒可在接种奶牛体内持续存在,并产生较高滴度抗体。 展开更多
关键词 牛肠道病毒2型 分离与鉴定 理化特性 随机PCR
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牛肠道病毒2型VP1^+表达和间接ELISA方法的建立与应用 被引量：10
2
作者 郭金玉 高志强 +2 位作者 张鹤晓 张乐萃 吴丹 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第11期40-43,共4页
根据2005年从北京某牛场分离得到的一株牛肠道病毒2型(BEV-2)毒株序列,设计特异性引物,采用RT-PCR方法扩增BEV-2包含VP1(840 bp)蛋白基因片段的VP1+(1 275 bp)序列,扩增产物克隆到p MD-T19,进行测序验证。验证该序列为目的片段后,将其... 根据2005年从北京某牛场分离得到的一株牛肠道病毒2型(BEV-2)毒株序列,设计特异性引物,采用RT-PCR方法扩增BEV-2包含VP1(840 bp)蛋白基因片段的VP1+(1 275 bp)序列,扩增产物克隆到p MD-T19,进行测序验证。验证该序列为目的片段后,将其克隆到表达载体p ET-32a。重组质粒转化至Rosetta,经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示重组蛋白在大肠杆菌中高效表达。将重组蛋白作检测抗原包被酶标板,成功建立了检测牛肠道病毒2型抗体的间接ELISA方法。上述工作,为下一步BEV-2单克隆抗体的制备打下了基础。 展开更多
关键词 牛肠道病毒2型 重组表达 间接ELISA
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牛肠道病毒2型单克隆抗体的制备及其应用研究 被引量：2
3
作者 郭金玉 张鹤晓 +3 位作者 吴丹 高志强 张冉 张乐萃 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期2025-2031,共7页
旨在制备牛肠道病毒2型(BEV-2)单克隆抗体,建立检测BEV-2抗原的ELISA方法。将纯化的BEV-2VP1+重组蛋白质接种BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0用PEG4000进行融合,对杂交瘤培养上清进行筛选,获得2株稳定分泌抗BEV-2VP1+蛋白... 旨在制备牛肠道病毒2型(BEV-2)单克隆抗体,建立检测BEV-2抗原的ELISA方法。将纯化的BEV-2VP1+重组蛋白质接种BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0用PEG4000进行融合,对杂交瘤培养上清进行筛选,获得2株稳定分泌抗BEV-2VP1+蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1G1、5G6)。用制备的单克隆抗体包被酶标板,通过一系列的优化,建立了BEV-2双抗夹心ELISA检测方法。建立的ELISA方法检测BEV-2病毒量的最低限为100TCID50·0.1mL-1,与BVDV、IBRV、BLV等病毒无交叉反应。本研究首次制备了牛肠道病毒2型单克隆抗体,建立了检测BEV-2抗原的双抗体夹心ELISA方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,为进一步研究和开发快速诊断牛肠道病毒试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 牛肠道病毒2型 单克隆抗体 夹心ELISA
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