牛源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测分析 被引量：13

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作者 杨艳丽 张星星 +4 位作者 黄新 吴桐忠 何延华 韩猛立 钟发刚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第8期2462-2469,共8页

为研究近年来新疆地区牛源大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的分布及其对喹诺酮类抗生素的耐药情况,本研究于2016-2018年从新疆石河子、沙湾、奎屯、玛纳斯和伊犁5个地区12个规模化奶牛场分离出116株牛源大肠杆菌,药敏试验检测... 为研究近年来新疆地区牛源大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的分布及其对喹诺酮类抗生素的耐药情况,本研究于2016-2018年从新疆石河子、沙湾、奎屯、玛纳斯和伊犁5个地区12个规模化奶牛场分离出116株牛源大肠杆菌,药敏试验检测其耐药性,同时利用PCR扩增PMQR耐药基因。药敏试验结果显示,62.93%的菌株对氨苄西林耐药,耐药率最高。对链霉素、四环素、卡那霉素和恩诺沙星的耐药率依次为56.90%、54.31%、43.10%和42.24%。对头孢他啶和头孢噻肟的耐药率较低,分别为7.76%和11.21%。分离菌主要携带qnrA、qnrS和aac(6′)-Ⅰb-cr 3种耐药基因;116株大肠杆菌中有31株携带PMQR的耐药基因,检出阳性率为26.72%,其中26株仅携带1种PMQR耐药基因,占所有菌株的22.41%,4株携带2种PMQR耐药基因,占所有菌株的3.45%,1株携带3种PMQR耐药基因,占所有菌株的0.86%。综上所述,新疆地区牛源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类药物基因主要为qnrA、qnrS和aac(6′)-Ⅰb-cr 3种,且对恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星均产生不同程度的耐药性。 展开更多

关键词 新疆 牛源大肠杆菌 喹诺酮类药物耐药基因 药敏试验

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新疆石河子市牛源大肠杆菌分离鉴定及对β-内酰胺类药物的耐药性分析 被引量：6

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作者 许淑芸 何白雪 +10 位作者 俞杰 马雪 胡晓彦 邹思颖 李劼 周霞 黄新 钟发刚 吴桐中 韩猛立 张星星 《中国动物检疫》 CAS 2022年第7期49-54,共6页

为调查石河子市牛源大肠杆菌对β-内酰胺类药物的耐药表型和耐药基因携带情况,采集健康牛群粪便,采用常规细菌分离鉴定方法并结合16S rRNA PCR检测方法进行分离鉴定;参考Clermont方法对分离菌株进行系统分子分群,采用PCR方法检测分离菌... 为调查石河子市牛源大肠杆菌对β-内酰胺类药物的耐药表型和耐药基因携带情况,采集健康牛群粪便,采用常规细菌分离鉴定方法并结合16S rRNA PCR检测方法进行分离鉴定;参考Clermont方法对分离菌株进行系统分子分群,采用PCR方法检测分离菌株的β-内酰胺类耐药基因bla_(CTX-M)、bla_(OXA)、bla_(SHV)和bla_(TEM)携带情况,通过K-B纸片法测定分离菌株耐药表型。结果显示:分离鉴定出100株牛肠道大肠杆菌分属于A、B1、C和F群;分离株对头孢唑林和阿莫西林的耐药率在50%以上,对氨苄西林、头孢氨苄与头孢吡肟的耐药率均在5%以下,所有分离株对头孢吡肟敏感;5株分离菌株检测到bla_(SHV)基因片段,1株检测到bla_(CTX-M)基因片段,所有菌株均未检测到bla_(OXA)和bla_(TEM)基因片段。结果表明,石河子市牛源正常大肠杆菌已少部分携带耐药基因,且对部分β内酰胺类药物产生了耐药性。结果提示,应加快减抗政策的实施。 展开更多

关键词 牛源大肠杆菌 Β-内酰胺类药物 分子分群 耐药基因 耐药表型

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牛源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药性分析 被引量：7

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作者 王丽娟 王宁宁 +4 位作者 王乐 李芬 刘晓强 王妍 李勤凡 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2021年第2期8-13,共6页

【目的】了解牛源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药特征,为临床合理用药提供理论依据。【方法】从不同牛场采集腹泻犊牛粪样分离鉴定大肠杆菌,采用微量肉汤稀释法测定大肠杆菌对环丙沙星、恩诺沙星和诺氟沙星3种氟喹诺酮类药物的最小抑... 【目的】了解牛源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药特征,为临床合理用药提供理论依据。【方法】从不同牛场采集腹泻犊牛粪样分离鉴定大肠杆菌,采用微量肉汤稀释法测定大肠杆菌对环丙沙星、恩诺沙星和诺氟沙星3种氟喹诺酮类药物的最小抑菌浓度(MIC),PCR检测质粒介导的喹诺酮类耐药(PMQR)基因(qnrA、qnrB、qnrD、qnrS、aac(6′)-Ib和qepA基因)及喹诺酮耐药决定区(QRDR)突变(gyrA和parC基因),并选择2株携带PMQR基因的大肠杆菌经恩诺沙星诱导后检测QRDR的gyrA和parC基因突变。【结果】分离鉴定得到75株大肠杆菌,其中60.00%的菌株对至少2种FQs耐药,40.00%的菌株对环丙沙星、恩诺沙星和诺氟沙星均耐药,且对恩诺沙星的耐药程度较为严重。75株大肠杆菌均未检测到qnrA、qnrD和qepA基因,但检测出qnrS、aac(6′)-Ib亚型aac(6′)-Ib-cr和qnrB基因,61.33%的菌株至少携带1个PMQR基因,其中以qnrS和aac(6′)-Ib-cr最为常见。58.67%的大肠杆菌发生了QRDR突变,主要突变方式为GyrA:(Ser 83 Leu+Asp 87 Asn)+ParC:Ser 80 Ile,发生突变且携带PMQR基因的大肠杆菌对环丙沙星、恩诺沙星和诺氟沙星均耐药。恩诺沙星诱导后,PMQR阳性菌的gyrA基因发生5处碱基突变,PMQR阴性菌无碱基突变。【结论】大肠杆菌耐氟喹诺酮类药物主要与QRDR突变密切相关,因此兽医临床上应合理使用氟喹诺酮类药物来减缓大肠杆菌的耐药性。 展开更多

关键词 牛源大肠杆菌 氟喹诺酮类药物 PMQR基因 QRDR突变 耐药性

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牛源大肠杆菌CTX-M型基因耐药性与流行性分析 被引量：5

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作者 路宁宁 王玮玮 +3 位作者 吴灵玉 魏小娟 李冰 张继瑜 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期244-252,共9页

为了解不同养殖模式下牛源大肠杆菌对抗菌药物的耐药性及CTX-M型基因流行分布特征,本研究从甘肃和新疆采集肉牛、奶牛和牦牛粪便样品,经分离鉴定得到220株大肠杆菌,采用纸片扩散法(K-B法)对分离株进行药物敏感性测定,通过PCR法检测CTX-... 为了解不同养殖模式下牛源大肠杆菌对抗菌药物的耐药性及CTX-M型基因流行分布特征,本研究从甘肃和新疆采集肉牛、奶牛和牦牛粪便样品,经分离鉴定得到220株大肠杆菌,采用纸片扩散法(K-B法)对分离株进行药物敏感性测定,通过PCR法检测CTX-M型基因和整合子基因型,利用多重PCR法对CTX-M阳性菌株进行种族进化关系分析。结果显示,肉牛源分离株主要对4类抗菌药物产生耐药,耐药率为17.98%;奶牛源分离株主要对5类抗菌药物产生耐药,耐药率为22.39%;牦牛源分离株主要对3类抗菌药物产生耐药,耐药率为14.06%。肉牛源、奶牛源和牦牛源分离株中均检测到了CTX-M-1G和CTX-M-9G基因,其亚型以CTX-M-55、CTX-M-79和CTX-M-14为主;91株CTX-M阳性大肠杆菌中有85株菌株均仅携带Ⅰ类整合子整合酶基因Int1,携带率为93.41%;种族进化关系分析显示,CTX-M阳性菌株主要分布在B1群(75.82%),其次分别为A群(9.89%)、C群(8.79%)、E群(3.30%)和D群(1.10%)。研究结果提示,奶牛源大肠杆菌不仅多重耐药最严重,而且以CTX-M-55+CTX-M-79优势基因型流行最广。不同养殖模式下牛源大肠杆菌耐药性及CTX-M基因流行性差异与长期滥用或不合理使用抗菌药物产生的选择压力有关。 展开更多

关键词 牛源大肠杆菌 CTX-M基因 耐药性 流行特征

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牛源大肠杆菌O157∶H7分离与鉴定及其毒力基因检测 被引量：5

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作者 张桃 苏战强 +7 位作者 夏利宁 王雨朦 周银萍 刘媛媛 买占海 张彩云 姚刚 况玲 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1136-1141,共6页

目的研究新疆肉牛主产区健康牛群中该菌的携带情况及致病的可能性。方法对采自新疆伊犁昭苏县某牛场健康牛的85份新鲜牛粪样本,增菌后用SMAC平板和MUG实验进行筛选,再用PCR技术和生化试验鉴定;对分离到的E.coli O157∶H7用PCR法检测其S... 目的研究新疆肉牛主产区健康牛群中该菌的携带情况及致病的可能性。方法对采自新疆伊犁昭苏县某牛场健康牛的85份新鲜牛粪样本,增菌后用SMAC平板和MUG实验进行筛选,再用PCR技术和生化试验鉴定;对分离到的E.coli O157∶H7用PCR法检测其Stx1、Stx2、eaeA、tccp和Hly等基因携带情况;用腹腔注射EC肉汤增菌原液的方法进行动物攻毒实验,确定分离菌株的致病性。结果 85份粪样中只鉴定出1株E.coli O157∶H7,检出率为1.176%;而这株菌同时携带被检测的5种毒力基因;攻毒实验所有的小白鼠于24h内全部死亡。结论新疆伊犁地区牛群携带有E.coli O157∶H7,从所分离到菌株所携带的毒力基因情况和对小白鼠攻毒实验结果发现,这株菌对人有很强的潜在致病性。 展开更多

关键词 牛源大肠杆菌 E.COLI O157∶H7 分离鉴定 毒力基因 动物毒性试验

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牛源大肠杆菌对小鼠的致病性

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作者 李红丽 闫巍文 +4 位作者 闫益波 刘一飞 乔国峰 孟冬霞 王志宇 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1845-1850,共6页

对本实验室所分离的20株大肠杆菌进行小鼠致病性试验,将132只小鼠随机分为22组,每组6只,设2个对照组,对照1组不灌服任何东西,对照2组灌服0.2 mL生理盐水,20组试验组小鼠则每只灌服浓度为5×108 CFU/mL的对应大肠杆菌菌液0.2mL。称... 对本实验室所分离的20株大肠杆菌进行小鼠致病性试验,将132只小鼠随机分为22组,每组6只,设2个对照组,对照1组不灌服任何东西,对照2组灌服0.2 mL生理盐水,20组试验组小鼠则每只灌服浓度为5×108 CFU/mL的对应大肠杆菌菌液0.2mL。称量并记录攻毒前后小鼠体质量,用酶联免疫分析试剂盒检测小鼠血清中C反应蛋白、白介素8、肿瘤坏死因子-α的浓度,进行组间差异分析,进而分析分离菌株的致病性关键因子。结果表明,携带有2种类型毒力基因的大肠杆菌可导致小鼠产生炎症反应,而仅携带一种类型毒力基因的大肠杆菌不能引起小鼠炎症反应,并通过数据分析建立了一种大肠杆菌致病性评估体系。本研究为探究牛源大肠杆菌致病性关键因素和牛大肠杆菌病的科学防控提供理论基础。 展开更多

关键词 牛源大肠杆菌 致病性 毒力基因

原文传递

氧氟沙星联合多西环素对牛源大肠杆菌突变选择窗的研究 被引量：1

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作者 李彦庆 张震 +2 位作者 孙冬冬 孙思超 刘云 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第12期38-40,共3页

研究氧氟沙星与多西环素联用对牛源大肠杆菌耐药突变选择窗(MSW)及防突变浓度(MPC)的影响。该试验通过琼脂二倍稀释法分别测量了氧氟沙星(OFL)及多西环素(DOX)两药单用及联合用药时牛源大肠杆菌临床分离株E.coliⅠ、E.coliⅡ。试验结果... 研究氧氟沙星与多西环素联用对牛源大肠杆菌耐药突变选择窗(MSW)及防突变浓度(MPC)的影响。该试验通过琼脂二倍稀释法分别测量了氧氟沙星(OFL)及多西环素(DOX)两药单用及联合用药时牛源大肠杆菌临床分离株E.coliⅠ、E.coliⅡ。试验结果测得E.coliⅠ、E.coliⅡOFL单独用药时MSW为2.95、9.74,DOX单独用药时MSW为48.43、53.64,OFL及DOX联合应用时对OFL其MPC分别缩小了4倍、6倍,与8MIC浓度DOX联用时分离株E.coliⅡMSW完全关闭。研究表明,OFL和DOX联用,可以缩小各自单独用药对牛源大肠杆菌的MSW,降低其MPC,减少耐药突变菌株产生。 展开更多

关键词 防耐药突变浓度 突变选择窗 牛源大肠杆菌 氧氟沙星 多西环素

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牛、羊源大肠杆菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性及其耐药基因检测

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作者 白崇生 刘万华 +3 位作者 王功帅 陈占莉 高艳 白永平 《中国草食动物科学》 CAS 北大核心 2024年第3期17-22,共6页

为研究陕西榆林地区牛、羊源大肠杆菌的流行特点及其对氨基糖苷类抗生素的耐药情况,采集746份牛、羊粪便样本进行细菌分离纯化和大肠杆菌特异性引物phoA PCR鉴定,并对鉴定得到的大肠杆菌进行氨基糖苷类抗生素耐药性试验,对5种钝化酶基因... 为研究陕西榆林地区牛、羊源大肠杆菌的流行特点及其对氨基糖苷类抗生素的耐药情况,采集746份牛、羊粪便样本进行细菌分离纯化和大肠杆菌特异性引物phoA PCR鉴定,并对鉴定得到的大肠杆菌进行氨基糖苷类抗生素耐药性试验,对5种钝化酶基因AadA1、AbdB、Aph(3′)-Ⅰ、Aac(6′)-Ⅰb、Aac(3′)-Ⅱ进行PCR检测和同源性序列分析。结果显示,榆林地区大肠杆菌总检出率为42.49%;牛、羊源大肠杆菌对6种氨基糖苷类药物的耐药率从高到低依次为链霉素(70.7%)、卡那霉素(64.3%)、阿米卡星(47.9%)、庆大霉素(45.1%)、新霉素(39.4%)和妥布霉素(30.3%);多重耐药率(耐3种及3种以上药物)为67.0%;耐药基因AadA1和Aph(3′)-Ⅰ的检出率分别为79.5%和83.0%。综上表明,榆林地区检出的牛、羊大肠杆菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性比较强,耐药基因以AadA1、Aph(3′)-Ⅰ为主。 展开更多

关键词 牛、羊源大肠杆菌 氨基糖苷类抗生素 药敏试验 耐药基因

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牛源性大肠杆菌对小白鼠和鸡的人工感染试验

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作者 李宏胜 郁杰 +4 位作者 罗金印 李新圃 徐继英 张礼华 郭福存 《动物科学与动物医学》 2001年第6期42-43,共2页

用从临床型奶牛乳房炎病乳分离的 10株大肠杆菌对小白鼠和鸡进行了人工感染发病试验 ,结果表明 ,牛源性大肠杆菌对小鼠和鸡均有一定的致病性 ,但小白鼠比鸡更敏感 ,随着攻菌量的加大发病及死亡率亦增加。

关键词 大肠杆菌 鸡 小白鼠 牛源性大肠杆菌 人工感染

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内蒙古呼和浩特地区牛源致病性大肠杆菌的血清型、毒力基因检测及耐药性分析 被引量：31

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作者 杨斯琴 敖日格乐 +1 位作者 王纯洁 周婷 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期761-764,共4页

为鉴定内蒙古呼和浩特地区奶牛肠道致病性大肠杆菌(E.coli)分离株的血清型、毒力基因和耐药性,本研究分别采用接种小鼠试验、玻片凝集试验、PCR方法及药敏纸片法测定E.coli分离株的致病性、血清型分布、8种毒力基因及对20种抗生素的敏... 为鉴定内蒙古呼和浩特地区奶牛肠道致病性大肠杆菌(E.coli)分离株的血清型、毒力基因和耐药性,本研究分别采用接种小鼠试验、玻片凝集试验、PCR方法及药敏纸片法测定E.coli分离株的致病性、血清型分布、8种毒力基因及对20种抗生素的敏感性。结果表明,从内蒙古奶牛场采集的100份粪便样品中鉴定出50株致病性E.coli(50%)。定型的24株致病性E.coli的血清型共10种,以O18、O146和O152为优势血清型,共14株,占定型菌株的58.3%。50株致病性E.coli中,毒力基因irp2、eae A、stx1、stx2和hly A的检出率分别为100%、50%、14%、10%和8%。另外,所有血清型菌株对受试的抗菌药物呈多重耐药性,并且均耐受青霉素、四环素、多西环素、利福平、复方新诺明和阿莫西林6种抗生素,而且全部含有毒力基因irp2。本研究结果为牛源致病性E.coli病的防控和临床用药提供了实验依据。 展开更多

关键词 牛源致病性大肠杆菌 血清型 毒力基因 药敏试验

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牛源致脑炎大肠杆菌FimD、PilN蛋白的生物信息学分析和优势B细胞表位预测

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作者 海永慧 钦倩 +4 位作者 李蓓蓓 任静静 马勋 蒋建军 王鹏雁 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2022年第3期9-14,F0003,F0002,共8页

为了筛选出牛源致脑炎大肠杆菌S9922 FimD、PilN蛋白的优势B细胞表位,本试验采用生物信息学分析工具ProtParam、TMHMM、NetPhos、DNASTAR软件、SOPMA、SWISS-MODEL、BepiPred、Immunomedicine Group等对FimD、PilN蛋白进行理化性质、跨... 为了筛选出牛源致脑炎大肠杆菌S9922 FimD、PilN蛋白的优势B细胞表位,本试验采用生物信息学分析工具ProtParam、TMHMM、NetPhos、DNASTAR软件、SOPMA、SWISS-MODEL、BepiPred、Immunomedicine Group等对FimD、PilN蛋白进行理化性质、跨膜区、信号肽、糖基化位点、磷酸化位点、二级结构、三级结构和B细胞表位预测,并进行综合分析,最终得出优势B细胞表位。结果显示,FimD、PilN蛋白都为亲水、稳定蛋白,无规则卷曲在二级结构中所占比例最高;FimD蛋白共有48个磷酸化位点,不存在跨膜区和信号肽;PilN蛋白共有85个磷酸化位点,PilN蛋白在1~50位氨基酸上可能出现跨膜区,26~27位氨基酸上出现信号肽;多种参数综合分析最终得到潜在的优势B细胞表位,FimD蛋白:7~18、144~152、307~315、365~373;PilN蛋白:77~86、138~149、516~524。通过对FimD、PilN蛋白进行综合分析,最终得出潜在的优势B细胞表位,为牛源致脑炎大肠杆菌多表位疫苗的进一步研究提供参考依据。 展开更多

关键词 牛源致脑炎大肠杆菌 FimD蛋白 PilN蛋白 生物信息学分析 B细胞抗原表位

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牛源致脑炎大肠杆菌多表位抗原的制备及免疫效果的初步评价

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作者 海永慧 钦倩 +4 位作者 李蓓蓓 任静静 马勋 王鹏雁 蒋建军 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2022年第2期193-197,共5页

目的 为了初步评价基于FimD、PilN和PilV蛋白优势表位设计的重组蛋白免疫保护效果。方法 将FimD、PilN和PilV蛋白的优势B细胞表位串联,构建原核表达载体,然后在BL21(DE3)大肠杆菌中进行原核表达及纯化;用弗氏佐剂与重组蛋白充分混匀后... 目的 为了初步评价基于FimD、PilN和PilV蛋白优势表位设计的重组蛋白免疫保护效果。方法 将FimD、PilN和PilV蛋白的优势B细胞表位串联,构建原核表达载体,然后在BL21(DE3)大肠杆菌中进行原核表达及纯化;用弗氏佐剂与重组蛋白充分混匀后免疫小鼠,收集血清,利用间接ELISA方法检测抗体效价,并进行抗原性的检测;三免后进行攻毒保护实验并对小鼠肝脏、脑和脾脏载菌量进行测定。结果 重组蛋白主要以包涵体形式表达。Western-blot结果显示出现一条特异性条带,与预期的重组蛋白大小相符,表明成功制备出多表位抗原。重组蛋白免疫小鼠后血清特异性抗体效价高达1:204 800。试验组小鼠攻毒后存活率为66%,对照组小鼠肝脏、脑和脾脏载菌量均显著高于试验组。结论 重组蛋白具有良好的抗原性和一定的免疫保护作用,具有研发牛源致脑炎大肠杆菌多表位疫苗的潜在价值。 展开更多

关键词 牛源致脑炎大肠杆菌 B细胞表位 原核表达 免疫保护效果

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