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检测牛乳κ-酪蛋白的间接竞争ELISA法与间接ELISA法比较 被引量：4
1
作者 宋宏新 韩波 +1 位作者 李珊 薛海燕 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第4期1114-1119,共6页
试验旨在建立一种快速简单检测牛乳κ-酪蛋白(κ-CN)含量的酶联免疫吸附(ELISA)方法,为解决牛乳蛋白掺假问题提供一定的技术支持。以牛乳κ-CN为包被抗原,以酶标抗体(HRP-IgG)为检测抗体分别建立间接竞争ELISA法和间接ELISA法,并对两种... 试验旨在建立一种快速简单检测牛乳κ-酪蛋白(κ-CN)含量的酶联免疫吸附(ELISA)方法,为解决牛乳蛋白掺假问题提供一定的技术支持。以牛乳κ-CN为包被抗原,以酶标抗体(HRP-IgG)为检测抗体分别建立间接竞争ELISA法和间接ELISA法,并对两种检测方法进行分析比较。结果表明:对于间接竞争ELISA法,κ-CN抗原包被浓度为2.5μg/mL,线性范围为62.5~1 000.0ng/mL,变异系数<2%,回收率在98.46%~101.68%;对于间接ELISA法,κ-CN抗原包被浓度为1.56μg/mL,线性范围为0.098~3.125μg/mL,变异系数<1%,回收率在99.10%~101.06%。比较两种检测方法,间接竞争ELISA法检测耗时较短,抗体应用量较少,而间接法不需要包被成本较高的目标标准蛋白,相关系数也较高,但其检测体系组成成分较多,且需包被待测样品,较难组成ELISA试剂盒体系,不宜用于现场检测。因此,大规模制备ELISA试剂盒体系用于快速检测蛋白含量时可采用间接竞争法,不仅抗体应用量少、节约成本且快速、简单,可更好地用于科研实践。 展开更多
关键词 牛乳κ-酪蛋白 间接竞争ELISA法 间接ELISA法
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两种牛乳κ-酪蛋白的间接ELISA定量检测研究 被引量：2
2
作者 薛海燕 秦婧 +2 位作者 宋宏新 韩芳 潘洁 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2014年第2期48-51,共4页
分别以免血清IgG与鸡卵黄抗体（IgY）为检测抗体,建立了两种牛乳κ-酪蛋白的间接ELISA定量方法.牛乳κ-酪蛋白分别免疫新西兰大白兔和临产母鸡,经亲和层析分离纯化后得到anti-κ-CN-IgG与anti-κ-CN-IgY两种抗体.两种抗体均与β-酪蛋白... 分别以免血清IgG与鸡卵黄抗体（IgY）为检测抗体,建立了两种牛乳κ-酪蛋白的间接ELISA定量方法.牛乳κ-酪蛋白分别免疫新西兰大白兔和临产母鸡,经亲和层析分离纯化后得到anti-κ-CN-IgG与anti-κ-CN-IgY两种抗体.两种抗体均与β-酪蛋白、α-乳白蛋白和乳清粉存在一定交叉反应,抗体与相应抗原进行免疫吸收后得到高特异性IgG与IgY.用吸收后的anti-κ-CN-IgG建立的间接ELISA法,当标准κ-CN质量浓度在0.098～3.125 mg/L时,A450 nm值与κ-CN的质量浓度具有线性关系,变异系数小于1％,回收率在99.10％～101.1％之间；用吸收后的anti-κ-CN-IgY检测κ-CN,在0.098～6.25 mg/L时,A450 nm值与κ-CN的质量浓度成良好的线性关系,变异系数小于2％,回收率在98％～100.8％之间.当三聚氰胺掺假量在0～20％时,两种抗体均能通过κ-CN的定量检测而实现乳品的掺假检验. 展开更多
关键词 牛乳κ-酪蛋白 卵黄抗体IgY 兔血清抗体IgG 间接ELISA
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牛乳κ-酪蛋白活性多肽及其改造肽的合成和生物活性 被引量：1
3
作者 王小青 赵红玲 +3 位作者 高杨 宫闻婧 尹志峰 王良友 《化学与生物工程》 CAS 2016年第1期30-32,42,共4页
为获得抗凝血活性更强的多肽,对牛乳κ-酪蛋白(κ-CN)的十一肽(f106-116)进行设计合成并改造,采用Fmoc固相合成策略,以Wang树脂为载体,Fmoc保护氨基酸为原料,HOBT/DIC为缩合剂,TFA/苯甲硫醚/EDT/苯甲醚裂解体系脱除保护基,经RP-HPLC纯... 为获得抗凝血活性更强的多肽,对牛乳κ-酪蛋白(κ-CN)的十一肽(f106-116)进行设计合成并改造,采用Fmoc固相合成策略,以Wang树脂为载体,Fmoc保护氨基酸为原料,HOBT/DIC为缩合剂,TFA/苯甲硫醚/EDT/苯甲醚裂解体系脱除保护基,经RP-HPLC纯化后得到了纯度>95%的9种多肽,经ESI-MS确证其结构。将所有的合成肽进行凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)以及凝血酶原时间(PT)活性测定,结果表明,各改造肽抗凝活性皆低于十一肽,增强牛乳κ-CN的十一肽片段的疏水性,其TT活性增强。 展开更多
关键词 牛乳κ-酪蛋白活性多肽 固相合成 抗凝活性
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