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牙龈卟啉单胞菌W83 PG0352基因突变株构建及鉴定研究 被引量：3
1
作者 李琛 何晓宁 +1 位作者 潘亚萍 郭艳 《中国实用口腔科杂志》 CAS 2012年第11期671-675,共5页
目的探讨牙龈卟啉单胞菌W83PG0352基因突变株的构建和鉴定。方法本实验于2011年7—12月在中国医科大学口腔医学院中心实验室完成。建立PG0352突变质粒,在T载体上插入PG0352上游基因、红霉素抗性基因和PG0352下游基因,用电转化的方法将... 目的探讨牙龈卟啉单胞菌W83PG0352基因突变株的构建和鉴定。方法本实验于2011年7—12月在中国医科大学口腔医学院中心实验室完成。建立PG0352突变质粒,在T载体上插入PG0352上游基因、红霉素抗性基因和PG0352下游基因,用电转化的方法将质粒转入牙龈卟啉单胞菌菌细胞中,用含有红霉素的TSB培养基筛选PG0352突变株,并通过PCR、RT-PCR和酶活性检测方法对突变株进行鉴定。结果在含有红霉素的TSB培养基中可见牙龈卟啉单胞菌的菌落,用PCR方法证实在这些菌落中PG0352基因被红霉素抗性基因所替代,且唾液酸酶活性丧失。结论通过电转化的方法可成功获得PG0352基因突变株,为研究PG0352基因的功能奠定基础。 展开更多
关键词 牙龈卟啉单胞菌w83 PG0352 突变株 PCR 酶活性检测
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牙龈卟啉单胞菌唾液酸酶基因缺失影响其感染上皮细胞后炎症相关microRNA的表达
2
作者 李琛 杨雪 +3 位作者 潘亚萍 徐晓宇 佟彤 郭艳 《口腔医学研究》 CAS 北大核心 2017年第2期132-134,共3页
目的:检测牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)唾液酸酶基因(PG0352)缺失是否影响其感染上皮细胞后对上皮细胞炎症相关小RNA的调控。方法:厌氧培养P.gingivalis W83及其唾液酸酶基因突变株(△PG0352),以MOI为100∶1... 目的:检测牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)唾液酸酶基因(PG0352)缺失是否影响其感染上皮细胞后对上皮细胞炎症相关小RNA的调控。方法:厌氧培养P.gingivalis W83及其唾液酸酶基因突变株(△PG0352),以MOI为100∶1的比例分别与永生化牙龈上皮细胞epi4进行共培养,PCR array的方法检测88个与炎症相关的小RNA的表达。结果:△PG0352组epi4的hsa-miR-9、hsa-miR-23a、hsa-miR-23b和hsa-miR-410的表达分别是P.gingivalis W83组的4.3387、3.3978、4.7930和4.3137倍。结论:与P.gingivalis W83野生株相比,唾液酸酶基因缺陷株对牙龈上皮细胞炎症相关小RNA的表达有不同的调控作用。 展开更多
关键词 牙龈卟啉单胞菌w83 PG0352 牙龈上皮细胞 小RNA
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牙龈卟啉单胞菌唾液酸酶基因突变株黏附与侵入KB细胞能力研究
3
作者 李琛 杨雪 +4 位作者 林莉 潘亚萍 徐晓宇 佟彤 郭艳 《中国实用口腔科杂志》 CAS 2015年第7期405-409,共5页
目的研究PG0352基因缺失对牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)黏附和侵入人口腔上皮癌KB细胞能力的影响。方法本研究于2014年7—12月在中国医科大学口腔医学院中心实验室完成。实验组:将P.gingivalis W83菌株(W83菌株组)和PG0352基因突变株(P... 目的研究PG0352基因缺失对牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)黏附和侵入人口腔上皮癌KB细胞能力的影响。方法本研究于2014年7—12月在中国医科大学口腔医学院中心实验室完成。实验组:将P.gingivalis W83菌株(W83菌株组)和PG0352基因突变株(PG0352突变株组)分别以100∶1的比例与KB细胞共培养2 h,制备P.gingivalis与KB细胞的黏附和侵入模型;对照组:单纯KB细胞培养。透射电镜观察KB细胞表面及细胞内是否有P.gingivalis存在;用PBS清除未黏附于KB细胞的细菌,裂解细胞后涂板检测P.gingivalis黏附和侵入KB细胞情况,抗生素保护法检测P.gingivalis侵入KB细胞情况。结果透射电镜结果发现,W83菌株组和PG0352突变株组KB细胞内均有细菌侵入;通过涂板后菌落计数发现P.gingivalis W83菌株和PG0352基因突变株对KB细胞的黏附率分别为(15.559±2.020)%和(9.309±1.750)%,侵入率分别为(0.651±0.287)%和(1.517±0.233)%,两者差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 P.gingivalis W83菌株和PG0352基因突变株均能够黏附和侵入KB细胞;与W83菌株相比,PG0352基因突变株黏附上皮细胞的能力较弱而侵入能力较强。 展开更多
关键词 牙龈卟啉单胞菌w83 PG0352 突变株 KB细胞 透射电镜
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