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适于双向电泳分析的苹果叶片蛋白质提取方法 被引量：14
1
作者 曾广娟 李春敏 +2 位作者 张新忠 滕云龙 董文轩 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期484-488,共5页
为了探索适用于双向电泳（2-DE）分析的苹果叶片蛋白质提取方法,比较了三氯乙酸（TCA）/丙酮沉淀法、二硫苏糖醇（DTT）/丙酮法、Tris-HCl提取法和改良的Tris-HCl提取法等4种蛋白质提取方法。以7cm、pH3-10的线性固相pH梯度（immobilize... 为了探索适用于双向电泳（2-DE）分析的苹果叶片蛋白质提取方法,比较了三氯乙酸（TCA）/丙酮沉淀法、二硫苏糖醇（DTT）/丙酮法、Tris-HCl提取法和改良的Tris-HCl提取法等4种蛋白质提取方法。以7cm、pH3-10的线性固相pH梯度（immobilized pH gradient,IPG）胶条作为第一向电泳,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）（12.5%的分离胶）作为第二向电泳,对提取物进行2-DE分离,采用银染显色。结果表明,上述4种方法在2-DE图谱上分别得到140,215,181和616个蛋白质点。其中以改良的Tris-HCl提取法得到的蛋白质点数最多,且背景清晰、图谱上没有明显的横纵条纹。为了进一步验证改良的Tris-HCl提取法的有效性,用18cm、pH3-10的线性IPG胶条和12.5%的分离胶对提取的苹果叶片蛋白质进行2-DE分离,考马斯亮蓝R-250染色,共检测到455个蛋白质点,其相对分子质量主要分布在14000-66000范围内,图谱背景清晰,再次证明应用该方法制备的样品适用于双向电泳分析,可用于苹果叶片的蛋白质组学分析。 展开更多
关键词 双向电泳 蛋白质提取方法 苹果叶片 蛋白质组学分析
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柞蚕感染微孢子虫后血淋巴免疫应答蛋白质的分离与鉴定 被引量：6
2
作者 姜义仁 宋佳 +7 位作者 秦玉璘 王勇 臧敏 钟亮 杨瑞生 石生林 段玉玺 秦利 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1119-1131,共13页
为了解柞蚕Antheraea pernyi感染微孢子虫初期血淋巴内免疫系统及刺激应答相关蛋白质种类,本研究以柞蚕5龄雌幼虫的起蚕(结束4眠,刚完成蜕皮的幼虫)添食柞蚕微孢子虫Nosema pernyi为材料,对感染后血淋巴利用SDS-PAGE进行分离后,利用LC-M... 为了解柞蚕Antheraea pernyi感染微孢子虫初期血淋巴内免疫系统及刺激应答相关蛋白质种类,本研究以柞蚕5龄雌幼虫的起蚕(结束4眠,刚完成蜕皮的幼虫)添食柞蚕微孢子虫Nosema pernyi为材料,对感染后血淋巴利用SDS-PAGE进行分离后,利用LC-MS/MS质谱技术和蛋白质组学分析对差异蛋白质条带进行鉴定。结果显示:感染微孢子虫144h后,血淋巴中分子量约为44kD(AP44)和28kD(AP28)的蛋白质条带表达量增高。质谱分析AP28和AP44蛋白质条带样品,共鉴定117个不重复蛋白质,其中2个样品共有蛋白质12个,AP28独有蛋白质52个,AP44独有蛋白质53个。对质谱数据利用COG数据库进行搜寻鉴定,显示AP28和AP44的鉴定蛋白质中涉及柞蚕免疫系统及刺激应答生物过程的蛋白质共有29个,其中AP28中包括热激蛋白、泛素样蛋白、泛素结合酶E2、保幼激素环氧水解酶、微管结合蛋白、溶菌酶、ADP-核糖基化因子、防御蛋白、肽聚糖识别蛋白等15个,AP44中包括DRK、酚氧化酶原、类免疫球蛋白等10个;二者共有热激蛋白hsp21.4、酚氧化酶原、抗菌肽等4个。本研究结果可以为今后研究柞蚕对微孢子虫的免疫应答及防御机制提供参考。 展开更多
关键词 柞蚕 柞蚕微孢子虫 血淋巴 免疫应答 蛋白质 蛋白质组学分析
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一种热蛋白质组学分析数据的归一化方法
3
作者 甄雪妍 周宝津 +1 位作者 刘静雯 任艳 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2024年第12期40-46,共7页
建立了一种小分子靶标蛋白的鉴定方法,即引入索引保留时间(Indexed retention time,iRT)肽段作为非标记热蛋白质组学(Thermal proteome profiling,TPP)分析定量归一化内标,实现对小分子靶标的准确挖掘.将iRT肽段加入到表征良好的模型药... 建立了一种小分子靶标蛋白的鉴定方法,即引入索引保留时间(Indexed retention time,iRT)肽段作为非标记热蛋白质组学(Thermal proteome profiling,TPP)分析定量归一化内标,实现对小分子靶标的准确挖掘.将iRT肽段加入到表征良好的模型药物甲氨蝶呤(Methotrexate,MTX)处理的293T细胞提取液中,在不同温度加热处理时它们稳定存在,因此可作为定量归一化的标准.实验结果表明,以iRT作为定量校正,不仅对总蛋白含量有良好的校正效果,同时对MTX的靶标蛋白二氢叶酸还原酶(Dihydrofolate reductase,DHFR)热熔解拟合曲线也有一定改善.该方法简单方便、经济高效,具有较强实用性和推广性,为非标记TPP技术的实施及定量准确性提供了重要的实验依据. 展开更多
关键词 非标记定量蛋白质组学 热蛋白质组学分析 索引保留时间 数据归一化
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基于蛋白质组学和代谢组学分析初步探讨苯并(k)荧蒽致小鼠生殖损伤的作用机制
4
作者 李雅文 王丹丹 +3 位作者 王芙蓉 周妮娅 王大朋 曹佳 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第13期1523-1534,共12页
目的通过蛋白质组学和代谢组学探究苯并(k)荧蒽[Benzo(k)fluoranthene,BkF]对雄性小鼠生殖损伤潜在的作用机制。方法选取20只健康清洁级6周龄雄性昆明小鼠[体质量(18±2)g],按完全随机分组分为对照组、低剂量BkF组(7.5 mg/kg)、中剂... 目的通过蛋白质组学和代谢组学探究苯并(k)荧蒽[Benzo(k)fluoranthene,BkF]对雄性小鼠生殖损伤潜在的作用机制。方法选取20只健康清洁级6周龄雄性昆明小鼠[体质量(18±2)g],按完全随机分组分为对照组、低剂量BkF组(7.5 mg/kg)、中剂量BkF组(15 mg/kg)、高剂量BkF组(30 mg/kg),每组5只。对照组灌胃给予玉米油,低、中、高剂量BkF组分别给予7.5、15.0、30.0 mg/(kg/d)剂量的BkF,按照10 mL/kg的体积,经口连续灌胃35 d生精周期。每周5 d进行灌胃,连续5周。建模完成后,轻断食10 h进行取材。采用计算机辅助精子分析(computer-assisted sperm analysis,CASA)软件检测分析精液参数;HE染色分析睾丸组织病理结构;采用生物信息学技术分析差异蛋白通路;采用火山图分析高剂量BkF组和对照组差异表达前10的蛋白质;液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)非靶向代谢组学技术,筛选出差异代谢物;通过KEGG及KEGG信号通路注释分析和GO富集分析差异代谢物。结果与对照组比较,BkF处理的小鼠精子数量和活力有下降趋势,差异具有统计学意义(P<0.05)。病理切片结果显示,与对照组比较,BkF处理的小鼠生精小管管腔扩张,生精细胞排列紊乱。蛋白质组学检测睾丸组织蛋白水平,发现Spata46、Rab5b等蛋白水平降低,Zscan21、Aifm2等蛋白水平升高(P<0.01)。蛋白质组学京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopeclia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析显示,其主要涉及吞噬体、蛋白质输出、核糖体等通路。基因本体(Gene Ontology,GO)富集分析显示其主要涉及雄性减数分裂Ⅰ、组蛋白乙酰化、p53信号通路的调控、细胞周期的正向调节、细胞死亡的正向调节等信号通路。代谢组学KEGG显示发现氨基糖和核苷酸糖代谢与其他代谢途径联系最为密切。结论蛋白质组学和代谢组学分析结果表明BkF暴露与精子生成、细胞凋亡和周期、DNA损伤、氨基糖和核苷酸糖代� 展开更多
关键词 苯并(k)荧蒽 雄性生殖损伤 精子生成 蛋白质组学分析 代谢组学分析
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Vero细胞传代过程中致瘤性的检测 被引量：4
5
作者 李爱灵 王红燕 +7 位作者 张月兰 赵玉秀 马可 张颖 张晋 梁宏阳 赵硕 王辉 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期456-461,共6页
目的为生物制品生产及研究用Vero细胞体系传代过程中的遗传安全性评价提供实验数据。方法对Vero细胞进行传代与冻存，并对不同代次Vero细胞进行体外与体内致瘤性检测，同时对不同代次Ver6细胞的蛋白质表达进行差异性分析。结果Vero细胞... 目的为生物制品生产及研究用Vero细胞体系传代过程中的遗传安全性评价提供实验数据。方法对Vero细胞进行传代与冻存，并对不同代次Vero细胞进行体外与体内致瘤性检测，同时对不同代次Ver6细胞的蛋白质表达进行差异性分析。结果Vero细胞传代至270代并建立了14个细胞冻存库；不同代次Vero细胞体外与体内致瘤性检测结果均为阴性；200代以上的Vero细胞蛋白质表达水平有所变化。结论Vero细胞传代过程中虽然体外与体内致瘤性检测结果为阴性，但蛋白质组学分析有差异性蛋白表达，这为Vero细胞传代过程中的遗传安全性评价提供了实验参考。 展开更多
关键词 疫苗细胞基质 VERO细胞 传代安全性 致瘤性检测 蛋白质组学分析
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基于数据非依赖性采集定量蛋白质组学分析的原发性干燥综合征潜在唾液生物标志物研究
6
作者 田艺超 郭春岚 +7 位作者 李珍 尤欣 刘晓燕 苏金梅 赵斯佳 穆月 孙伟 李倩 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 2024年第1期19-28,I0003,共11页
目的唾液腺是原发性干燥综合征(pSS)的主要靶器官,因此唾液被认为是腺体病理生理学和疾病状态的镜子。本研究旨在说明pSS患者的唾液蛋白质组学特征,并鉴定可能辅助诊断的潜在生物标志物。方法发现集包含49个样本[24个来自pSS,25个来自... 目的唾液腺是原发性干燥综合征(pSS)的主要靶器官,因此唾液被认为是腺体病理生理学和疾病状态的镜子。本研究旨在说明pSS患者的唾液蛋白质组学特征,并鉴定可能辅助诊断的潜在生物标志物。方法发现集包含49个样本[24个来自pSS,25个来自年龄和性别匹配的健康对照(HCs)],验证集包括25个样本(12个来自pSS,13个来自HCs)。36例pSS患者和38例健康对照者以2:1的比例集中随机分配至Discovery组或验证组。在2D LC-HRMS/MS平台上使用数据非依赖性采集(DIA)策略分析来自pSS患者和健康对照组的未刺激性全唾液样本,以揭示差异蛋白。根据基因本体(GO)分析和国际药学文摘(IPA)分析的蛋白质注释,使用DIA分析验证了关键蛋白质。随机森林用于建立SS的预测模型。结果共发现1,963个蛋白,其中136个蛋白在pSS患者中表现出差异性。生物信息学研究表明这些蛋白质主要与免疫功能、新陈代谢和炎症有关。一组19个蛋白质生物标志物通过基于P值和随机森林的排序顺序进行鉴定,并验证为具有特殊曲线下面积(AUC)值(发现集:0.817;验证集:0.882)的潜在生物标志物,可用于鉴别pSS患者和健康对照人群。结论新发现的候选蛋白组合可能有助于pSS的诊断。唾液蛋白质组学分析是一种很有前途的无创方法,可用于对pSS患者进行预后评估以及早期和精确治疗。DIA具备最佳的时间效率和数据可靠性,可望成为未来唾液蛋白质组研究的合适选择。 展开更多
关键词 原发性干燥综合征 唾液 蛋白质组学分析 质谱 诊断
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螨虫诱导变应性鼻炎患者血浆细胞外囊泡的蛋白质组学研究
7
作者 杨育儒 卓明英 +2 位作者 杨峰 江采晔 张志荣 《国际耳鼻咽喉头颈外科杂志》 2024年第2期63-70,共8页
目的探究螨虫诱导的变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)患者血浆细胞外囊泡(extracellular vesicle,EV)蛋白质组学的差异,寻找并鉴定AR潜在的生物标志物。方法分别收集螨虫诱导的AR患者(AR组)和健康志愿者(HC组)的血液样本,每组各20例。... 目的探究螨虫诱导的变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)患者血浆细胞外囊泡(extracellular vesicle,EV)蛋白质组学的差异,寻找并鉴定AR潜在的生物标志物。方法分别收集螨虫诱导的AR患者(AR组)和健康志愿者(HC组)的血液样本,每组各20例。使用超速离心法对AR组与HC组的血浆EV进行分离,并使用透射电子显微镜和纳米流式细胞术对EV进行鉴定和表征。使用液相色谱-串联质谱技术对分离出的EV进行蛋白质组学分析,寻找并鉴定差异表达蛋白质(differentially expression proteins,DEPs)。随后,对DEPs进行基因本体(gene ontology,GO)、京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析和蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络分析。结果AR组和HC组的血浆EV大小在30~150 nm之间,两组之间无显著性差异。在两组之间共筛选出664种蛋白质,并鉴定出89种表达水平具有显著性差异的蛋白质(P<0.05)。与HC组相比,AR组中有44种蛋白质表达显著上调,45种蛋白质表达显著下调。通过进行GO分析,发现这89种DEPs可能与免疫调节有关。此外,KEGG富集分析和PPI分析显示,这89种DEPs还与补体和凝血级联反应、雌激素和脂肪细胞因子信号通路等多种途径密切相关。结论本研究通过蛋白质组学技术成功筛选出与螨虫诱导AR相关的89种差异表达蛋白质。这些DEPs主要参与调节个体的免疫反应,其中脂联素、补体C1q亚基A和溶质载体家族2等蛋白质可能成为诊断AR的潜在生物标志物。 展开更多
关键词 鼻炎 变应性 常年性 血浆 螨虫 细胞外囊泡 蛋白质组学分析
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玉米杂交种先玉335及其亲本种子萌发过程中胚芽蛋白质组学分析 被引量：4
8
作者 进茜宁 付志远 +3 位作者 丁冬 刘宗华 李卫华 汤继华 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1689-1694,共6页
以培养84h种子的胚芽(包括胚芽鞘)为试验材料,对优良玉米杂交种先玉335与其亲本自交系的蛋白质组学差异进行了分析。结果表明,在杂交种先玉335中共检测到560个蛋白点,在亲本PH6WC和PH4CV分别检测到507个和508个蛋白点,而且先玉335胚芽... 以培养84h种子的胚芽(包括胚芽鞘)为试验材料,对优良玉米杂交种先玉335与其亲本自交系的蛋白质组学差异进行了分析。结果表明,在杂交种先玉335中共检测到560个蛋白点,在亲本PH6WC和PH4CV分别检测到507个和508个蛋白点,而且先玉335胚芽及胚芽鞘中81%的蛋白点表现非加性累积模式,其中288个蛋白点表现为超高亲的上调表达,仅15个蛋白点表现超低亲的下调表达,因此推测非加性蛋白的累积可能是杂交种先玉335胚芽萌发过程中胚芽及胚芽鞘杂种优势产生的主要原因。用于质谱分析的13个差异极显著蛋白主要涉及代谢途径、蛋白折叠、胁迫响应、细胞骨架和细胞解毒5种类型。 展开更多
关键词 玉米 胚芽(胚芽鞘) 杂种优势 蛋白质组学分析
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利用定量蛋白质组学分析鉴定醛固酮腺瘤中新型生物标志物和通路
9
作者 陈亮 向婉 +2 位作者 代喆 余方 孟哲 《临床泌尿外科杂志》 CAS 2024年第5期388-395,共8页
目的本研究旨在通过对接受肾上腺切除术的患者采集的醛固酮腺瘤(aldosterone-producing adenoma,APA)组织进行无标记定量蛋白质组学分析,筛选APA组织和正常肾上腺组织之间差异表达的蛋白。方法利用无标记定量蛋白质组学技术对APA及正常... 目的本研究旨在通过对接受肾上腺切除术的患者采集的醛固酮腺瘤(aldosterone-producing adenoma,APA)组织进行无标记定量蛋白质组学分析,筛选APA组织和正常肾上腺组织之间差异表达的蛋白。方法利用无标记定量蛋白质组学技术对APA及正常肾上腺组织进行分析,筛选APA组织和正常肾上腺组织之间差异表达的蛋白。采用免疫组化染色对APA病人组织样本染色,验证差异表达蛋白的表达。结果共鉴定了6282种蛋白质。使用P<0.05和|fold change|≥2的显著性截断值,鉴定出356种差异表达蛋白(differentially expressed proteins,DEPs)。此外,通过整合蛋白质组和转录组数据,鉴定出一个新的生物标志物嗜铬蛋白B(chromogranin B,CHGB),在APA中显著表达下调,并进一步通过免疫组化染色得到了进一步验证。受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析显示,CHGB在区分正常组织和APA方面具有较高的特异性(AUC=0.856),显示其在APA发展中的潜在重要性。重要的是,CHGB和CYP11B2的联合提高了诊断APA的预测效能。结论我们的研究确定了参与APA发生的关键蛋白质和通路,并发现了一种新的蛋白质生物标志物来区分APA,可能成为预测APA的潜在生物标记物。这些发现为未来APA的分子诊断研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 原发性高醛固酮症 醛固酮腺瘤 蛋白质组学分析 嗜铬蛋白B PPAR信号通路
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热蛋白质组学分析:一种全面评估蛋白质状态的技术 被引量：3
10
作者 邱燕华 翟斌涛 +2 位作者 白玉彬 陈树林 张继瑜 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期3628-3637,共10页
热蛋白质组学分析(thermal proteome profiling,TPP)是细胞热漂移测定(cellular thermal shift assay,CETSA)与定量质谱(quantitative mass spectrometry,MS)的结合,所以也称为MS-CETSA。热蛋白质组学分析通过测量不同加热温度下细胞或... 热蛋白质组学分析(thermal proteome profiling,TPP)是细胞热漂移测定(cellular thermal shift assay,CETSA)与定量质谱(quantitative mass spectrometry,MS)的结合,所以也称为MS-CETSA。热蛋白质组学分析通过测量不同加热温度下细胞或细胞裂解物中可溶蛋白的含量来确定整个蛋白质组的稳定性。蛋白质可以在与药物或代谢物等小分子、核酸或其他蛋白质相互作用或在翻译后修饰时改变其热稳定性,而热蛋白质组学分析可以根据有无配体结合蛋白质的热稳定性差异来确定靶蛋白。目前热蛋白质组学分析已成功应用于识别药物的靶点和脱靶点,探究蛋白质-代谢物和蛋白质-蛋白质的相互作用。总体上,国内对这个技术的了解仍然欠缺,对此,文中对热蛋白质组学分析的原理、方法、应用以及优势与局限性进行了综述。 展开更多
关键词 热蛋白质组学分析 蛋白质 药物靶点 配体
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双向凝胶电泳分析诊断肺癌性胸腔积液的临床意义 被引量：3
11
作者 吴广平 侯伟健 +3 位作者 周海涛 阎影 王红 贾兰玲 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2006年第4期318-319,共2页
关键词 肺肿瘤/诊断 胸腔积液/诊断 电泳 凝胶 双向 蛋白质组/分析
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脑性瘫痪儿童脑脊液内外泌体的蛋白质组学分析 被引量：2
12
作者 张厚君 邓博文 +4 位作者 蒋昇源 赵毅 任敬佩 徐林 穆晓红 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第6期903-908,共6页
背景:脑性瘫痪(简称脑瘫)是一种广泛的神经损伤性疾病,其病因在很大程度上仍不明确,用于该病分类或监测的分子指标也尚未见报道。目的:分离培养儿童脑瘫患者脑脊液来源的外泌体,使用无标记定量质谱蛋白质组学方法分析其外泌体的蛋白质... 背景:脑性瘫痪(简称脑瘫)是一种广泛的神经损伤性疾病,其病因在很大程度上仍不明确,用于该病分类或监测的分子指标也尚未见报道。目的:分离培养儿童脑瘫患者脑脊液来源的外泌体,使用无标记定量质谱蛋白质组学方法分析其外泌体的蛋白质组表达谱特征,为儿童脑瘫群体的分型、诊断和预后评估等提供分子生物学依据。方法:选择在北京中医药大学东直门医院进行选择性脊神经后根切断术的脑瘫患者,其中痉挛型脑瘫患者4例,混合型脑瘫患者3例,每位患者抽取3 mL脑脊液,通过超速离心法分离儿童脑瘫患者脑脊液中的外泌体,并使用纳米颗粒跟踪分析、透射电镜和蛋白质质谱分析对外泌体进行表征。结果与结论:①透射电镜观察显示,儿童脑瘫患者脑脊液内存在外泌体形态的囊泡。Western blot检测到外泌体标志蛋白Syntenin-1和Flotillin-1的表达;②纳米颗粒跟踪分析显示囊泡的大小和浓度符合外泌体的异质性特征。对痉挛性脑瘫、混合性脑瘫的脑脊液外泌体进行蛋白质谱分析,共鉴定出551个蛋白;③生物信息学分析显示,鉴定出的脑脊液外泌体蛋白与负责外泌体功能和神经发育过程的分子信号机制相关,这些蛋白主要富集于额叶皮质、运动皮质等脑部区域,与脑瘫病理密切相关。研究结果提示儿童脑瘫患者脑脊液内存在外泌体,外泌体蛋白可能与脑瘫分子病理机制相关。 展开更多
关键词 脑瘫 脑脊液 外泌体 蛋白质组学分析
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碰撞诱导解离和高能碰撞解离方式进行蛋白质组学分析的比较 被引量：3
13
作者 王曌 孙伟 《质谱学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第2期140-146,共7页
为了比较碰撞诱导解离(collision induced dissociation,CID)和高能碰撞解离(high energy collision dissociation,HCD)两种离子裂解模式在蛋白质组学分析方面的差异,分别应用这两种模式对牛血清白蛋白和细胞裂解物进行分析。通过比较... 为了比较碰撞诱导解离(collision induced dissociation,CID)和高能碰撞解离(high energy collision dissociation,HCD)两种离子裂解模式在蛋白质组学分析方面的差异,分别应用这两种模式对牛血清白蛋白和细胞裂解物进行分析。通过比较所鉴定到的多肽和蛋白数目,发现在牛血清白蛋白中,HCD碎裂方法所得的谱图匹配率和多肽Mascot得分均较高,表明其质谱图质量较好。在复杂样品细胞裂解物分析中,CID碎裂方法鉴定到的谱图数、多肽数和蛋白数目均较多,表明该模式的灵敏度较高;HCD碎裂方法所得的谱图匹配率和Mascot得分均较高,表明其质谱图质量较好。因此,这两种模式均可用于大规模蛋白质组学分析,CID模式可提供更高的灵敏度,而HCD模式则可获得更高质量的质谱谱图。 展开更多
关键词 质谱 碰撞诱导解离(CID) 高能碰撞解离(HCD) 蛋白质组学分析
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肿瘤坏死因子诱导B16细胞凋亡的核蛋白质组分析(英文) 被引量：2
14
作者 乔海晅 王清明 +2 位作者 陈吉中 范国才 陈惠鹏 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期454-458,共5页
为深入了解细胞凋亡的机制,研究了细胞凋亡过程中细胞核蛋白的变化.通过分离肿瘤坏死因子TNFα诱导的小鼠黑色素瘤B16细胞的细胞核并进行二维电泳分析,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱.图像分析比较对照细胞和凋亡细胞的核蛋白... 为深入了解细胞凋亡的机制,研究了细胞凋亡过程中细胞核蛋白的变化.通过分离肿瘤坏死因子TNFα诱导的小鼠黑色素瘤B16细胞的细胞核并进行二维电泳分析,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱.图像分析比较对照细胞和凋亡细胞的核蛋白发现,在凋亡细胞中有11个蛋白发生了明显的变化,6个蛋白下调,5个蛋白上调,对这11个差异蛋白质点分别进行肽质指纹分析.经数据库查询,初步鉴定出这些蛋白.其中4个含量增加的蛋白(HSP84,calreticulin,vimentin,GAPDH)均直接或间接地参与诱导细胞凋亡,另外1个含量增加的蛋白(plasminogen)尚未见其与细胞凋亡有关的报道.而6个含量降低的蛋白分别属于信号转导相关蛋白(guaninenucleotidebindingprotein,lamininreceptor1)、转录调控蛋白、mRNA转运蛋白(heterochromatinprotein1alpha,heterogeneousnuclearribonucleoproteinA3,heterogeneousnuclearribonucleoproteinA2B1)和未知功能蛋白(nucleolarproteinNO38).细胞凋亡过程中这些变化的核蛋白质的发现将有助于深入认识细胞凋亡的分子机制. 展开更多
关键词 凋亡 肿瘤坏死因子(TNF-α) 促凋亡蛋白 蛋白质组学分析
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小鼠脂肪来源间充质干细胞细胞因子蛋白质组学分析 被引量：2
15
作者 杨清建 毕波 +7 位作者 陈亮 曾继平 杨平 周轶群 郭妤 朱晶品 朱宁文 刘天一 《中国美容整形外科杂志》 CAS 2016年第2期79-81,共3页
目的比较ADSCs和皮肤成纤维细胞（FBs）分泌细胞因子的差异。方法体外培养小鼠ADSCs和皮肤FBs，提取ADSCs和FBs的胞浆蛋白，利用蛋白质组学方法测定细胞因子表达量，通过数据分析软件分析两者之间表达差异有统计学意义的主要细胞因子。... 目的比较ADSCs和皮肤成纤维细胞（FBs）分泌细胞因子的差异。方法体外培养小鼠ADSCs和皮肤FBs，提取ADSCs和FBs的胞浆蛋白，利用蛋白质组学方法测定细胞因子表达量，通过数据分析软件分析两者之间表达差异有统计学意义的主要细胞因子。结果共有31种细胞因子仅ADSCs分泌，FBs不分泌；ADSCs分泌占优势的细胞因子共20种。VEGF、FGF-21等在ADSCs裂解液中含量明显多于在FBs裂解液中含量（P〈0．05），HGF、PDGF-C等仅在ADSCs裂解液中检测到。结论ADSCs与FB分泌的细胞因子之间有明显差异。与FBs相比，ADSCs能够分泌更多种类的细胞因子。 展开更多
关键词 脂肪来源间充质干细胞 成纤维细胞 细胞因子 蛋白质组学分析 小鼠
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长期定位施肥条件下夏玉米籽粒清蛋白的比较蛋白质组学分析 被引量：2
16
作者 吴倩 许莹莹 +2 位作者 刘树堂 裴玉贺 宋希云 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期858-866,共9页
基于33年的长期定位施肥试验,利用蛋白质组学的方法研究了长期定位施用高低氮肥对夏玉米(Zea mays)籽粒清蛋白的影响。试验共设3个处理:高氮组(年施用量为276kg·hm-2)、低氮组(年施用量为138kg·hm-2)以及对照组(不施氮肥)。... 基于33年的长期定位施肥试验,利用蛋白质组学的方法研究了长期定位施用高低氮肥对夏玉米(Zea mays)籽粒清蛋白的影响。试验共设3个处理:高氮组(年施用量为276kg·hm-2)、低氮组(年施用量为138kg·hm-2)以及对照组(不施氮肥)。以玉米品种‘鲁玉16’为材料,人工授粉后,在玉米成熟期取其穗中部籽粒,利用蛋白质双向电泳和质谱技术对籽粒清蛋白进行差异分析和鉴定。结果表明:与不施氮肥相比,长期高、低氮处理均导致清蛋白的含量降低,且在低氮条件下达显著水平。双向电泳结果表明长期低氮处理与不施氮肥相比共有7个差异蛋白点, 1个上调, 6个下调;长期高氮处理与不施氮肥相比共有6个差异蛋白点, 1个上调, 5个下调。差异蛋白的基因表达分析与双向电泳结果相一致。通过质谱鉴定并对其进行功能分类,共分为4类,分别为:蛋白质及氨基酸代谢相关蛋白、能量代谢相关蛋白、表达调控及防御抗逆相关的蛋白和功能未知蛋白。 展开更多
关键词 长期定位施肥 氮肥 夏玉米 清蛋白 蛋白质组学分析
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中枢神经系统血管母细胞瘤的蛋白质组学分析 被引量：2
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作者 谢嵘 朱剑虹 +6 位作者 刘杭 樊惠芝 吴惺 姚鋆 陈露萍 沈亦雯 杨芃原 《中国神经肿瘤杂志》 2006年第3期192-199,共8页
背景与目的:中枢神经系统血管母细胞(centralnervoussystemhemangioblastoma,CNSHB)的治疗较难,至今病因不明。本研究应用蛋白质组学方法分析HB与正常脑组织的蛋白质表达谱的差异,分离鉴定与HB发病的蛋白质,为研究HB的组织学起源与发病... 背景与目的:中枢神经系统血管母细胞(centralnervoussystemhemangioblastoma,CNSHB)的治疗较难,至今病因不明。本研究应用蛋白质组学方法分析HB与正常脑组织的蛋白质表达谱的差异,分离鉴定与HB发病的蛋白质,为研究HB的组织学起源与发病机制提供依据。方法:收集5例血管母细胞瘤与5例正常脑组织标本。提取标本的总蛋白质。通过双向凝胶电泳(2-DE)分离蛋白,确定血管母细胞瘤与正常脑组织的差异表达蛋白质点。应用基质辅助激光解离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定并对鉴定蛋白质进行生物信息学分析。结果:通过双向凝胶电泳,建立了约含600个蛋白质点的血管母细胞瘤及正常脑组织的高分辨率蛋白质表达图谱。两者相比具有较高的同源性。应用ImageMaster2D图像分析软件共发现115个差异蛋白质点。经MALDI-TOF-MS分析后成功鉴定了87个蛋白质点共计47种蛋白质。其中HB组较正常对照组表达上调46个蛋白质点,下调41个蛋白质点。鉴定蛋白质的功能涉及转运、蛋白质折叠与代谢、三羧酸循环、细胞分化、干细胞相关蛋白质等数个方面。对鉴定所得蛋白质Vimentin、14-3-3蛋白进行免疫组化染色可重复本研究的结果。结论:中枢神经系统血管母细胞瘤可能是一种起源于间叶脑组织的肿瘤。其发生是一个多因子参与、多步骤的复杂过程。多种蛋白质如Vimentin及14-3-3蛋白参与了血管母细胞瘤的发病并起到重要的作用。 展开更多
关键词 血管母细胞瘤 蛋白质组学分析 双向凝胶电泳 MALDI—TOF-MS
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耐辐射Belnapia菌株的分离和辐射后蛋白质组学分析 被引量：2
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作者 白明艳 宣慧娟 +3 位作者 李利 孙云峰 万平 杨志伟 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期169-176,共8页
从西藏土样中分离得到一株具有较强辐射抗性的革兰氏阴性菌株F-4,其16S rDNA序列与Belnapia属菌株具有很高的相似性。结合表型特点,初步将其鉴定为别尔纳普氏属(Belnapia)菌株。在UV和γ-射线辐照后,菌株F-4的D10分别为300J·m-2和4... 从西藏土样中分离得到一株具有较强辐射抗性的革兰氏阴性菌株F-4,其16S rDNA序列与Belnapia属菌株具有很高的相似性。结合表型特点,初步将其鉴定为别尔纳普氏属(Belnapia)菌株。在UV和γ-射线辐照后,菌株F-4的D10分别为300J·m-2和4000Gy,远高于辐射敏感的E.coli K12。为研究菌株F-4在蛋白质组水平对辐射的响应机制,将对数早期的F-4细胞置于1000Gyγ-射线辐照下,并在5h复苏培养后,对其可溶性蛋白进行了提取、双向电泳分析和MALDI-TOF/TOF质谱鉴定。结果表明,辐射后32个蛋白质的表达出现3倍以上的变化,其中24个蛋白质上调,8个蛋白质下调,涉及蛋白质折叠加工、能量代谢、氨基酸代谢、辅酶代谢和一些功能未知途径。本试验为研究细菌辐射抗性机制提供了一些启示。 展开更多
关键词 辐射抗性 别尔纳普氏菌 耐辐射奇异球菌 蛋白质组学分析
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先天性白内障患者和正常人晶状体蛋白质组的差异分析 被引量：2
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作者 邵珺 朱靖 +4 位作者 储兆东 禹倩倩 陶永辉 黄玉政 姚勇 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第4期327-330,共4页
目的鉴定并分析先天性白内障患者和正常人晶状体之间蛋白质表达的差异。方法取10例(20眼)先天性白内障晶状体及8例(8眼)正常透明晶状体,提取晶状体核中的水溶性蛋白行二维电泳及考马斯亮蓝凝胶染色后,用ImageMaster2D Platinum5.0软件... 目的鉴定并分析先天性白内障患者和正常人晶状体之间蛋白质表达的差异。方法取10例(20眼)先天性白内障晶状体及8例(8眼)正常透明晶状体,提取晶状体核中的水溶性蛋白行二维电泳及考马斯亮蓝凝胶染色后,用ImageMaster2D Platinum5.0软件对获得的蛋白图谱进行分析,再利用MALDI-TOF-MS分析及数据库搜索对差异表达的蛋白质点进行鉴定。ELISA法检测差异蛋白的含量。结果二维电泳结果显示,先天性白内障和正常晶状体蛋白均分布在相对分子质量为14400～97400、pI5～9区域内;高丰度蛋白质斑点分布在相对分子质量20000～31000、pI6～8区域内。正常透明晶状体核水溶性蛋白二维电泳图识别出34个蛋白质斑点,先天性白内障蛋白二维电泳图识别出31个蛋白质斑点,而表达相差3倍以上的点有4个。对选取的蛋白质差异斑点进行MALDI-TOF-MS分析,经数据库检索后鉴定出4种蛋白质,分别为βA3晶状体蛋白、βB1晶状体蛋白、截断的βB1晶状体蛋白和αB晶状体蛋白。ELISA结果显示,正常晶状体βA3、αB和βB1晶状体蛋白质量浓度分别为(2.20±0.15)g·L-1、(0.85±0.08)g·L-1、(0.72±0.05)g·L-1,而先天性白内障βA3、αB和βB1晶状体蛋白质量浓度为(1.60±0.09)g·L-1、(1.02±0.09)g·L-1、(0.59±0.07)g·L-1。先天性白内障αB晶状体蛋白较正常对照含量上调,βA3和βB1晶状体蛋白含量下调。结论αB晶状体蛋白上调、βA3和βB1晶状体蛋白含量下调可能与先天性白内障的发病相关。 展开更多
关键词 晶状体 先天性白内障 蛋白质组学分析
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枯草芽胞杆菌168不对称转化产生磷霉素的蛋白质组学分析 被引量：1
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作者 解复红 钞亚鹏 +3 位作者 石家骥 张国青 杨敬 钱世钧 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期735-750,共16页
旨在用蛋白质组学方法揭示枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis 168将顺丙烯磷酸转化成磷霉素的机理。B.subtilis 168能够将顺丙烯磷酸不对称转化成磷霉素。气相色谱分析发现在转化培养基发酵液中的磷霉素的含量达816.6μg/mL,转化率为36.05... 旨在用蛋白质组学方法揭示枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis 168将顺丙烯磷酸转化成磷霉素的机理。B.subtilis 168能够将顺丙烯磷酸不对称转化成磷霉素。气相色谱分析发现在转化培养基发酵液中的磷霉素的含量达816.6μg/mL,转化率为36.05%。将分别培养在含有底物和不含底物的培养基中的B.subtilis 168的胞质蛋白进行双向凝胶电泳。对两种条件下的电泳图谱进行比较,发现有98个差异表达蛋白。其中在有底物存在时,表达量下调的点有20个,表达量上调的点52个,底物特异性表达的点有26个。对差异表达蛋白进行质谱鉴定,共鉴定到80个蛋白点,其中下调的点17个,上调的点45个,底物特异性表达的点18个。这些蛋白分别参与胁迫反应、氧化还原反应、物质转运、核苷酸代谢、糖代谢、氨基酸和蛋白质代谢等。根据上述对B.subtilis 168蛋白质组学分析结果,推测菌株是通过两步将顺丙烯磷酸转化成磷霉素的。第一步是水化反应,第二步是脱氢反应。 展开更多
关键词 枯草芽胞杆菌 顺丙烯磷酸 磷霉素 转化 蛋白质组学分析
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