幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位基因工程菌的发酵 被引量：4

1

作者 王缚鲲 张卫军 +3 位作者 邹全明 郭学青 于长青 曾浩 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2001年第2期84-86,共3页

目的 研究幽门螺杆菌热休克蛋白Ａ亚单位（ＨｓｐＡ）基因工程菌的发酵工艺。方法 通过不同培 养基、不同葡萄糖浓度、不同溶氧条件、补料与非补料对幽门螺杆菌热休克蛋白Ａ亚单位基因工程菌的菌体生长与 外源蛋白表达量的影响的比较，... 目的 研究幽门螺杆菌热休克蛋白Ａ亚单位（ＨｓｐＡ）基因工程菌的发酵工艺。方法 通过不同培 养基、不同葡萄糖浓度、不同溶氧条件、补料与非补料对幽门螺杆菌热休克蛋白Ａ亚单位基因工程菌的菌体生长与 外源蛋白表达量的影响的比较，确定其较为合适的培养条件。结果 多批实验证明，菌体单产可达４２ｇ／Ｌ，目的蛋 白的表达率为３８．５％。结论 此发酵工艺可以提高ＨｓｐＡ基因工程菌菌体的得率和目的蛋白的表达。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 热休克蛋白A亚单位 大肠杆菌 发酵工艺

下载PDF 职称材料

重组幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位在大肠杆菌中的表达及免疫学分析 被引量：4

2

作者 郭学青 邹全明 张卫军 《中华微生物学和免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2000年第3期199-201,共3页

关键词 幽门螺杆菌 热休克蛋白A亚单位 克隆 序列分析

原文传递

人幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位的基因克隆及序列分析 被引量：4

3

作者 郭学青 邹全明 张卫军 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期52-53,共2页

关键词 幽门螺杆菌 热休克蛋白A亚单位 基因克隆 序列分析

原文传递

幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位编码基因的克隆与序列分析 被引量：2

4

作者 代丽萍 段广才 +1 位作者 郗园林 范清堂 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2004年第6期569-571,共3页

目的 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)热休克蛋白A亚单位的编码基因(hspA)克隆和序列分析,为H.pylori基因工程疫苗的研究奠定基础。方法 应用PCR方法获得国内分离H.pylori菌株MEL-HP27和国际标准参考株H.pylori的hspA基因,通过定向克... 目的 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)热休克蛋白A亚单位的编码基因(hspA)克隆和序列分析,为H.pylori基因工程疫苗的研究奠定基础。方法 应用PCR方法获得国内分离H.pylori菌株MEL-HP27和国际标准参考株H.pylori的hspA基因,通过定向克隆的方法分别插入克隆载体pNEB193中,用质粒酶切电泳和特异PCR方法鉴定重组质粒。克隆基因经测序后进行核苷酸和氨基酸的同源性比较。结果 重组质粒经双酶切后得到0.35kb的hspA基因片段,特异PCR可扩增出hspA基因片段,证实H.pylorihspA基因的重组克隆质粒构建成功。经测序,国内分离HpMEL-HP27的hspA基因全长357bp(Genbank收录号:AY295084),编码由118个氨基酸残基组成的肽链,hspA基因序列与GenBank公布的H.pylori相应基因同源性高达95.20％-97.48％,氨基酸序列同源性在95.76％-97.46％之间。结论 克隆了H.pylori菌株MEL-HP27的hspA基因,其核酸序列与国际参考株NCTC11637同源性为97.48％。 展开更多

关键词 热休克蛋白A亚单位 幽门螺杆菌 编码基因 克隆基因 HP 重组质粒 基因片段 酶切 核酸序列 序列分析

下载PDF 职称材料

幽门螺杆菌热休克蛋白B亚单位的克隆和序列分析 被引量：2

5

作者 董勇前 陈翠萍 +2 位作者 谢贵林 王秉瑞 马清钧 《微生物学免疫学进展》 2002年第2期26-28,共3页

幽门螺杆菌是消化道疾病的主要致病菌。其有效抗原成份热休克蛋白B亚单位 (HspB)可刺激机体产生保护性的免疫反应。用高保真PCR扩增系统扩增出HspB基因片段 ,将其克隆至质粒PUC19中 ,对其全序列进行了测定。克隆的HSpB基因序列与报道的... 幽门螺杆菌是消化道疾病的主要致病菌。其有效抗原成份热休克蛋白B亚单位 (HspB)可刺激机体产生保护性的免疫反应。用高保真PCR扩增系统扩增出HspB基因片段 ,将其克隆至质粒PUC19中 ,对其全序列进行了测定。克隆的HSpB基因序列与报道的序列完全一致。这一研究获得了序列正确的HspB基因 。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 热休克蛋白b亚单位 克隆 序列分析

下载PDF 职称材料

基因重组幽门螺杆菌HspA—Zot融合蛋白质口服疫苗的研制 被引量：1

6

作者 李明峰 程军 +2 位作者 何志勇 熊伟民 吴祥甫 《中华腹部疾病杂志》 2003年第8期547-551,562,共6页

目的制备幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位(HspA)和霍乱弧菌封闭小带毒素(Zot)的重组融合蛋白质HspA—Zot(HZ)；观察融合蛋白HZ经口服免疫后在小鼠小肠内的吸收情况；观察HZ经口服免疫后诱发小鼠产生的特异性免疫应答反应。方法①用PCR方法... 目的制备幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位(HspA)和霍乱弧菌封闭小带毒素(Zot)的重组融合蛋白质HspA—Zot(HZ)；观察融合蛋白HZ经口服免疫后在小鼠小肠内的吸收情况；观察HZ经口服免疫后诱发小鼠产生的特异性免疫应答反应。方法①用PCR方法扩增HspA和Zot两个目的基因片段，将它们分别克隆至pSK(+)质粒上，然后插入含T7启动子pET一28a(+)的表达载体中，构建含双基因的表达质粒pET—hz，转化E，coli BL21(DE3)，经IPTG诱导表达高效的融合蛋白HZ；②融合蛋白经镍离子柱纯化、复性后，与HspA重组蛋白质共同标记同位素^125I，经小鼠灌胃实验观察其在小鼠小肠内的吸收情况。结果①经测序，hspA-zot(hz)融合基因片段由1 575bp组成，为编码515个氨基酸残基的多肽。经SDS—PAGE检测发现，融合基因表达的蛋白质相对分子质量(M)r约为65×10^3。②标记同位素^125I的HZ和HspA，经小鼠灌胃实验观察不同时间段的吸收，情况，结果发现在5～10min时间段，HZ组出现吸收峰值，约为对照组的8．65倍(P<0．001)，且吸收峰值时问明显提前。结论融合蛋白质HZ经口服后可以在小鼠小肠内迅速被大量吸收，经口服免疫后可以刺激机体产生较高滴度特异性抗体。HZ可以作为预防和治疗幽门螺杆菌感染的候选口服疫苗株。 展开更多

关键词 基因重组 幽门螺杆菌 热休克蛋白A亚单位 霍乱弧菌封闭小带毒素 融合蛋白质 口服疫苗 免疫应答

下载PDF 职称材料

重组幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位的高效表达及其初步纯化 被引量：1

7

作者 冉向阳 邹全明 +2 位作者 毛旭虎 田文标 王缚鲲 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期539-542,共4页

目的　在大肠杆菌中高效表达幽门螺杆菌的热休克蛋白A基因 (hspA) ,并对其初步纯化。 方法　用巢式PCR扩增hspA基因。经测序证实后 ,克隆于表达载体 pIM 1中 ,转化大肠杆菌。以SDS PAGE和免疫印迹分析目的蛋白的表达 ,并测定N 端氨基酸... 目的　在大肠杆菌中高效表达幽门螺杆菌的热休克蛋白A基因 (hspA) ,并对其初步纯化。 方法　用巢式PCR扩增hspA基因。经测序证实后 ,克隆于表达载体 pIM 1中 ,转化大肠杆菌。以SDS PAGE和免疫印迹分析目的蛋白的表达 ,并测定N 端氨基酸的序列。采用固相镍离子亲和层析 ,对重组hspA进行初步纯化。结果　扩增的hspA基因为 35 7bp ,并在大肠杆菌中得到高效可溶性表达。重组蛋白的表达量最高可达细菌总蛋白的 6 0 .5 %。免疫印迹及氨基酸测序结果证实 ,表达产物为幽门螺杆菌hspA亚单位。固相镍离子亲和层析初步纯化的重组HspA的纯度为 87.8%。结论　hspA亚单位的高效表达与初步纯化 。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 热休克蛋白A亚单位 重组表达 纯化 SDS-PAGE 免疫印迹

下载PDF 职称材料

幽门螺杆菌热休克蛋白B亚单位的克隆和表达

8

作者 董勇前 石乐琴 等 《生物制品年刊》 1999年第1期1-4,共4页

幽门螺杆菌是消化道疾病的主要致病菌，其有效抗原成份热休克蛋白B亚单位（HspB)可刺激机体产生保护性的免疫反应，用高保真PCR扩增系统扩增出HspB基因片段，将其插入原核表达质粒pET22b(+)中，在大肠杆菌BL21（DE3）中表达。经测序，... 幽门螺杆菌是消化道疾病的主要致病菌，其有效抗原成份热休克蛋白B亚单位（HspB)可刺激机体产生保护性的免疫反应，用高保真PCR扩增系统扩增出HspB基因片段，将其插入原核表达质粒pET22b(+)中，在大肠杆菌BL21（DE3）中表达。经测序，克隆的HspB基因序列与报道的序列完全一致。SDS－PAGE凝胶电泳和Western Blotting免疫印迹分析检测发现，HspB基因表达的蛋白质分子量约为60kD,并证实该重组蛋白质可与兔抗幽门螺杆菌抗体血清发生反应，这一研究获得了序列正确的HspB基因，为将来以HspB分子为抗原的疫苗研制工作打下了良好的基础。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 热休克蛋白b亚单位 克隆 表达

下载PDF 职称材料

幽门螺杆菌HspA-CtxB口服疫苗的研制及免疫原性研究 被引量：9

9

作者 李明峰 刘新梅 +4 位作者 凌贞 何志勇 沈旭东 孙建新 吴祥甫 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期398-402,共5页

目的　观察幽门螺杆菌融合蛋白质热休克蛋白A 霍乱毒素B(HspA CtxB ,HCT)经口服免疫在小鼠小肠内的吸收情况及免疫后机体产生的免疫应答。方法　用PCR方法扩增hspA和ctxB 2个目的基因片段 ,将它们分别克隆至pSK(+)质粒上 ,然后插入含T7... 目的　观察幽门螺杆菌融合蛋白质热休克蛋白A 霍乱毒素B(HspA CtxB ,HCT)经口服免疫在小鼠小肠内的吸收情况及免疫后机体产生的免疫应答。方法　用PCR方法扩增hspA和ctxB 2个目的基因片段 ,将它们分别克隆至pSK(+)质粒上 ,然后插入含T7启动子pET 2 2b(+)的表达载体中 ,构建含双基因的表达质粒pET hct,转化E .coliBL2 1(DE3) ,经IPTG诱导表达融合蛋白质HCT ;融合蛋白质经镍离子柱纯化、复性后 ,与HspA重组蛋白质共同标记同位素1 2 5I,经小鼠灌胃实验观察其在小鼠小肠内的吸收情况 ;HCT和HspA分别给小鼠灌胃进行免疫 ,每周灌胃 2次 ,共 8次 ,末次免疫后 3d起收集小鼠粪便 ,次日眶后静脉采集静脉血 ,分别对标本进行IgG和IgA检测。结果　经测序 ,HspA CtxB(HCT)融合基因片段由 72 6bp组成 ,为编码 2 42个氨基酸残基的多肽。经SDS PAGE和免疫印迹分析检测发现 ,融合基因表达的蛋白质相对分子质量 (M) r 约为 30× 10 3 。标记同位素1 2 5I的HCT和HspA ,经小鼠灌胃实验观察不同时间段的吸收情况 ,结果发现在 10～ 15min时间段 ,HCT组出现吸收峰值 ,约为对照组的 8倍以上 (P <0 .0 0 1) ,且吸收峰值时间明显提前 ;将HCT口服免疫小鼠 ,检测小鼠血清和粪便中的特异性抗体水平。结果HCT组 (A40 5) ,血清IgA ,2 . 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 热休克蛋白A亚单位 霍乱毒素b亚单位 融合蛋白质 口服疫苗 免疫应答

原文传递

幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位融合蛋白表达的研究 被引量：1

10

作者 冉向阳 邹全明 +1 位作者 毛旭虎 王缚鲲 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期41-45,共5页

目的　获得大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)与幽门螺杆菌保护性抗原热休克蛋白A亚单位 (HspA)的融合蛋白。方法　PCR扩增ltB和hspA基因 ,依次构建至表达载体pIM 1,转化大肠杆菌 ,SDS PAGE、免疫印迹分析目的蛋白表达情况。采用GM1 EL... 目的　获得大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)与幽门螺杆菌保护性抗原热休克蛋白A亚单位 (HspA)的融合蛋白。方法　PCR扩增ltB和hspA基因 ,依次构建至表达载体pIM 1,转化大肠杆菌 ,SDS PAGE、免疫印迹分析目的蛋白表达情况。采用GM1 ELISA和D(+) 半乳糖亲和层析方法检测重组LTB HspA融合蛋白LTB组分与GM1 神经节苷脂结合活性。结果　重组LTB HspA融合蛋白表达量最高可达细菌总蛋白的 2 5 %。免疫印迹检测结果证实为重组LTB HspA融合蛋白。GM1ELISA和D(+) 半乳糖亲和层析方法检测结果证实重组LTB HspA融合蛋白具有与GM1 神经节苷脂结合的活性。结论　LTB HspA融合蛋白的表达研究 。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 热休克蛋白A亚单位 大肠杆菌不耐热毒素b亚单位 融合蛋白 重组表达

下载PDF 职称材料

应用纯化抗原检测唾液 尿液和血清抗幽门螺杆菌抗体的比较 被引量：1

11

作者 安黎云 白云 李玮 《河北医药》 CAS 2005年第4期274-275,共2页

目的寻求敏感性高、特异性强的幽门螺杆菌(helicobacterpylori,H.pylori)抗原和简便、可靠的检测H.pylori抗体的方法,用于诊断H.pylori感染。方法以多株H.pylori超声上清、重组H.pylori热休克蛋白A亚单位(rHspA)纯品和重组H.pylori热休... 目的寻求敏感性高、特异性强的幽门螺杆菌(helicobacterpylori,H.pylori)抗原和简便、可靠的检测H.pylori抗体的方法,用于诊断H.pylori感染。方法以多株H.pylori超声上清、重组H.pylori热休克蛋白A亚单位(rHspA)纯品和重组H.pylori热休克蛋白尿素酶B亚单位(rUreB)纯品混合物为抗原,采用ELISA方法对96例患者的唾液、尿液和血清同时进行检测。结果使用rHspA和rUreB混合纯品进行检测,特异性和敏感性明显优于H.pylori超声上清。诊断H.pylori感染的优劣顺序为:血清IgG、尿液IgG、唾液IgG、血清IgA、唾液IgA。结论混合基因工程纯化抗原进行H.pylori感染的检测,具有良好的临床应用前景。 展开更多

关键词 血清抗幽门螺杆菌抗体 H.pylori感染 唾液 尿液 抗原检测 热休克蛋白A亚单位 pylori) 尿素酶b亚单位 临床应用前景 rUreb 血清IgG EUSA 同时进行 纯化抗原 基因工程 敏感性 特异性 混合物 纯品 IGA IGA 诊断 上清 超声

下载PDF 职称材料