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大肠杆菌来源的喹啉酸磷酸核糖转移酶和烟酸磷酸核糖转移酶的表达纯化及酶活性的初步检测 被引量：2
1
作者 陈永升 周强 赵圣印 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期55-61,共7页
【目的】在原核表达体系中实现大肠杆菌来源的喹啉酸磷酸核糖转移酶(Quinolinic acid phosphoribosyl transferase,QPRT)和烟酸磷酸核糖转移酶(Nicotinic acidphosphoribosyl transferase,NaPPT)的表达与纯化,并利用酶的生物催化作用实... 【目的】在原核表达体系中实现大肠杆菌来源的喹啉酸磷酸核糖转移酶(Quinolinic acid phosphoribosyl transferase,QPRT)和烟酸磷酸核糖转移酶(Nicotinic acidphosphoribosyl transferase,NaPPT)的表达与纯化,并利用酶的生物催化作用实现2,3-二羧酸喹啉的2位选择性脱羧得到烟酸【。方法】通过PCR扩增分别得到编码QPRT和NaPPT的基因片段,构建成原核表达质粒pET28a-NadC和pRSETB-PncB,在Escherichia coli(E.coli)中对其进行表达,在体外对目标蛋白进行纯化并利用高效液相色谱法(HPLC)检测酶催化反应的发生。【结果】成功表达纯化得到QPRT和NaPPT,检测结果表明在这两个酶的生物催化作用下可实现喹啉酸的2位选择性脱羧。 展开更多
关键词 生物催化 喹啉酸磷酸核糖转移酶 烟酸磷酸核糖转移酶 蛋白纯化 选择性脱羧 烟酸
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烟酰胺腺嘌呤二核苷酸合成相关酶有助于1,4-丁二醇转化为4-羟基丁酸 被引量：1
2
作者 张鑫 陈国强 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1749-1754,共6页
4-羟基丁酸(4-HB)不仅具有医学应用价值,而且是合成生物材料P3HB4HB的重要前体。在烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)参与情况下,大肠杆菌Escherichia coli S17-1(pZL-dhaT-aldD)可以把1,4-丁二醇(1,4-BD)转化为4HB。为提高4HB产率,通过过表达... 4-羟基丁酸(4-HB)不仅具有医学应用价值,而且是合成生物材料P3HB4HB的重要前体。在烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)参与情况下,大肠杆菌Escherichia coli S17-1(pZL-dhaT-aldD)可以把1,4-丁二醇(1,4-BD)转化为4HB。为提高4HB产率,通过过表达烟酸磷酸核糖转移酶(PncB)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸合成酶(NadE)增加胞内NAD含量,从而加速1,4-BD转化反应的进行。结果表明,PncB-NadE的表达使1,4-BD转化率比对照组增加13.03%,由10 g/L的1,4-BD得到4.87 g/L的4HB,单位细胞的4HB产量由1.32 g/g提高40.91%至1.86 g/g。因此PncB和NadE可用于促进1,4-BD转化为4HB。 展开更多
关键词 4-羟基丁酸 1 4-丁二醇 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD) 烟酸磷酸核糖转移酶 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸合成酶
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丹瓜方调控糖尿病大鼠miR-34a/Nampt轴研究
3
作者 衡先培 王志塔 +5 位作者 李亮 杨柳清 黄苏萍 王训立 谢金东 陈敏灵 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期184-192,共9页
目的研究丹瓜方对糖脂代谢调控轴微小RNA(miR)-34a/烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)的影响。方法高脂高糖饲养大鼠4周后,以链脲佐菌素(STZ)腹腔注射制备糖尿病模型。根据血糖水平选出糖尿病成模大鼠28只,继续喂养高脂高糖饲料,并按体重分... 目的研究丹瓜方对糖脂代谢调控轴微小RNA(miR)-34a/烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)的影响。方法高脂高糖饲养大鼠4周后,以链脲佐菌素(STZ)腹腔注射制备糖尿病模型。根据血糖水平选出糖尿病成模大鼠28只,继续喂养高脂高糖饲料,并按体重分层、血糖随机,分为模型组、丹瓜组[丹瓜方灌胃,20.5 g/(kg·d)]、抑制组(Nampt阻滞剂GEN-617腹腔注射1.25 mg/kg,每周1次)、丹抑组(同时用丹瓜方和GEN-617),每组7只。正常组8只鼠继续用常规饲料。干预10周。观测口服葡萄糖耐量试验(OGTT)、胰岛素释放曲线下面积、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血浆游离脂肪酸(FFAs)。Elisa法检测肝组织Nampt蛋白、血浆胰岛素(Ins)浓度;实时荧光定量PCR检测Nampt-mRNA和miR-34a-mRNA表达;并做肝组织HE、Masson、油红O染色。结果与正常组比较,模型组空腹血糖(FBG)、OGTT 2小时血糖(PBG)、HbA1c、胰岛素释放曲线下面积、HOMA-IR、肝组织Nampt蛋白及miR-34a-mRNA表达升高(P<0.01)。与模型组比较,丹瓜组FBG、HbA1c、HOMA-IR、肝miR-34a-mRNA表达降低,FFA、肝Nampt-mRNA、血miR-34a-mRNA及肝Nampt蛋白升高(P<0.05,P<0.01)。与丹瓜方组比较,丹抑组FBG、FFA、HbA1c升高(P<0.01,P<0.05),肝Nampt-mRNA表达降低(P<0.05);抑制组FBG、HbA1c升高(P<0.01,P<0.05),肝Nampt蛋白水平降低(P<0.05)。组织染色显示模型组有明确病理形态学改变及纤维化和脂肪变,并有炎性细胞浸润。丹瓜组病变轻微,抑制组病变较模型组更明显,丹抑组介于丹瓜组与抑制组之间。结论调控miR-34a/Nampt轴是丹瓜方有效干预糖脂代谢病的机制之一。 展开更多
关键词 丹瓜方 糖尿病 微小RNA-34a 烟酸氨磷酸核糖转移酶 中药
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