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棉铃虫激活增强子结合蛋白AP-4基因的原核表达、多克隆抗体制备、表达谱分析及功能鉴定 被引量:1
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作者 王婷婷 索倩 +4 位作者 孙晓燕 马跃敏 刘凯于 彭建新 彭蓉 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1028-1037,共10页
【目的】激活增强子结合蛋白4(activating enhancer binding protein 4, AP-4)是近年来备受关注的一类功能广泛的转录因子,参与Wnt/β-catenin信号通路的调控。本研究旨在研究棉铃虫Helicoverpa armigera HaAP-4基因的原核表达并制备多... 【目的】激活增强子结合蛋白4(activating enhancer binding protein 4, AP-4)是近年来备受关注的一类功能广泛的转录因子,参与Wnt/β-catenin信号通路的调控。本研究旨在研究棉铃虫Helicoverpa armigera HaAP-4基因的原核表达并制备多克隆抗体,明确HaAP-4基因的时空表达谱,初步探究HaAP-4对棉铃虫胆固醇载体蛋白2(sterol carrier protein-2, SCP-2)基因(HaSCP-2)表达的调控作用。【方法】通过PCR扩增棉铃虫HaAP-4基因片段,将其克隆至pET-28a原核表达载体,转化至大肠杆菌Escherichia coli BL21,经IPTG诱导表达,采用镍柱纯化重组蛋白,免疫新西兰兔制备多克隆抗体。运用RT-qPCR检测HaAP-4基因在棉铃虫不同发育阶段(卵、幼虫、预蛹、蛹和成虫)以及5龄幼虫和预蛹不同组织(中肠、脂肪体、头和表皮)中的表达水平。设计并合成HaAP-4 siRNA,转染棉铃虫Ha细胞,通过RT-qPCR检测和分析使用HaAP-4 siRNA进行RNA干扰后Ha细胞中HaAP-4和HaSCP-2基因mRNA的表达情况。【结果】成功构建pET-28a-HaAP-4重组表达质粒,在大肠杆菌细胞中获得高效表达的可溶性蛋白,目的蛋白大小约为55 kD,经纯化获得了纯度较高的重组蛋白,免疫新西兰兔成功制备了多克隆抗体,通过Western blotting检测显示抗体具有较好的特异性,ELISA分析表明抗体效价较高。发育阶段特异性表达结果显示,HaAP-4基因在棉铃虫不同发育阶段均有表达,其中在卵期、5龄幼虫期和预蛹期的表达量较高。组织表达结果表明,HaAP-4基因在5龄幼虫和预蛹不同组织中均有表达,且在中肠和头部具有高表达,而在表皮和脂肪体中表达量较低。RNA干扰实验发现,HaAP-4基因的敲降对HaSCP-2基因转录有显著影响,HaSCP-2基因mRNA表达水平下降了约55%。【结论】利用pET-28a原核表达系统能有效地在体外表达可溶性的HaAP-4,并制备了较好的多克隆抗体。RNAi实验结果提示,在中肠内高表达的HaAP-4基因能促进H 展开更多
关键词 棉铃虫 激活增强子结合蛋白 原核表达 多克隆抗体 表达谱 RNA干扰
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四君子汤对胃癌肿瘤干细胞标志物活性及TFAP4蛋白的作用机制
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作者 冯金华 刘亚江 +1 位作者 颜慧玲 王姿雅 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2024年第7期1739-1744,共6页
目的 探讨四君子汤对胃癌肿瘤干细胞标志物活性及转录因子激活增强子结合蛋白(TFAP)4蛋白的作用机制。方法 SGC-7901干细胞分为A组(SGC-7901干细胞)、B组(SGC-7901干细胞在75μl 2.5%大鼠四君子汤含药血清中培养)、C组(SGC-7901干细胞... 目的 探讨四君子汤对胃癌肿瘤干细胞标志物活性及转录因子激活增强子结合蛋白(TFAP)4蛋白的作用机制。方法 SGC-7901干细胞分为A组(SGC-7901干细胞)、B组(SGC-7901干细胞在75μl 2.5%大鼠四君子汤含药血清中培养)、C组(SGC-7901干细胞在75μl 5%大鼠四君子汤含药血清中培养)、D组(SGC-7901干细胞在75μl 7.5%大鼠四君子汤含药血清中培养)及E组(SGC-7901干细胞+含有1 mg/ml的5-氟尿嘧啶培养基中培养)。采用倒置显微镜观察SGC-7901干细胞形态;比较SGC-7901细胞及SGC-7901干细胞及集落形成能力;CCK-8检测各组细胞活性;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;Western印迹检测各组干细胞标志物CD44及CD133蛋白,B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、Bcl-2及TFAP4蛋白。结果 SGC-7901干细胞随着生长周期的延长,球体逐渐增大,3 d时体积较小结构松散,4 d时细胞呈现椭圆形生长,5 d时细胞结构更致密,形态更加接近球形,且一个球体所包含细胞数目可达到数十个;SGC-7901及SGC-7901干细胞的细胞集落数组间比较存在显著差异(P<0.001);与A组相比,B、C、D及E组24、48、72及96 h时SGC-7901干细胞活性均显著降低(P均<0.05),与B组相比,C、D、E组上述时间细胞活性显著降低(P<0.05),与C组相比,D、E组上述时间细胞活性显著降低(P<0.05),组间比较存在统计学差异(F=112.900,P<0.001);与A组比较,B组、C组、D组及E组干细胞凋亡率、Bax显著增加,CD44、CD133、Bcl-2及TFAP4显著降低(P<0.05)。与B组相比,C、D、E组干细胞凋亡率、Bax显著增加,CD44、CD133、Bcl-2及TFAP4降低(P<0.05),与C组相比D、E组有显著意义(P<0.05)。D组与E组上述指标无统计学意义(P>0.05)。结论 四君子汤含药血清可以显著抑制胃癌肿瘤干细胞标志物活性,通过抑制Bcl-2表达激活Bax加快胃癌干细胞凋亡,研究机制可能与抑制TFAP4活性相关。 展开更多
关键词 胃癌 四君子汤 肿瘤干细胞 转录因子激活增强子结合蛋白4
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转录因子AP4研究进展 被引量:4
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作者 赵文铖 王兆松 许世磊 《生命的化学》 CAS CSCD 2016年第3期341-346,共6页
激活增强子结合蛋白4(activating enhancer binding protein 4,AP4)是近年来发现的一个重要转录因子。AP4是c-MYC的重要下游因子,广泛调控细胞增殖与分化、细胞周期、细胞凋亡、免疫应答等进程。AP4可促进正常细胞恶性转化,独立地诱导... 激活增强子结合蛋白4(activating enhancer binding protein 4,AP4)是近年来发现的一个重要转录因子。AP4是c-MYC的重要下游因子,广泛调控细胞增殖与分化、细胞周期、细胞凋亡、免疫应答等进程。AP4可促进正常细胞恶性转化,独立地诱导肿瘤细胞发生上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),增强肿瘤细胞的迁移侵袭能力,促进肿瘤转移,在临床上与多种肿瘤密切相关。本文综述了AP4的分子特征与作用机制,并介绍了AP4的调控网络和在肿瘤发生发展中的研究进展。对AP4的深入研究将有助于了解生命活动的基本原理,并为肿瘤诊治提供新的思路和方法。 展开更多
关键词 激活增强子结合蛋白4 C-MYC 上皮间充质转化 肿瘤
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AP4在人脑胶质瘤组织中的表达及其对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响
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作者 王忠海 李铁柱 +1 位作者 周金鑫 杨培培 《蚌埠医学院学报》 CAS 2023年第5期610-613,共4页
目的:探讨激活增强子结合蛋白4(activating enhancer binding protein 4,AP4)在人脑胶质瘤组织中的表达及其对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:收集29例神经胶质瘤组织和癌旁组织,采用免疫组织化学技术、RT-qPCR技术、Western b... 目的:探讨激活增强子结合蛋白4(activating enhancer binding protein 4,AP4)在人脑胶质瘤组织中的表达及其对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:收集29例神经胶质瘤组织和癌旁组织,采用免疫组织化学技术、RT-qPCR技术、Western blotting检测AP4在胶质瘤组织和癌旁组织中的表达。采用小干扰RNA(siRNA)构建AP4敲除的U251和U87细胞系,采用CCK-8实验、细胞划痕实验、Transwell实验检测胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的改变。结果:AP4蛋白在胶质瘤组织中阳性表达率为72.41%(21/29),明显高于癌旁组织中的31.03%(9/29)(P<0.01)。Ⅰ+Ⅱ级、Ⅲ+Ⅳ级胶质瘤组织中AP4 mRNA和蛋白表达水平均明显高于相应癌旁组织(P<0.01),且Ⅲ+Ⅳ级胶质瘤组织中AP4 mRNA和蛋白表达均高于Ⅰ+Ⅱ级(P<0.05)。AP4敲除后,U251和U87细胞增殖能力均明显下降(P<0.01),迁移和侵袭能力亦均明显降低(P<0.01)。结论:AP4在神经胶质瘤组织和细胞中高表达,且与胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力密切相关,可能成为神经胶质瘤不良预后的重要参考指标。 展开更多
关键词 胶质瘤 激活增强子结合蛋白4 增殖 迁移 侵袭
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人转录因子AP4的生物信息学分析 被引量:3
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作者 赵文铖 王兆松 +2 位作者 周蒙 魏梅 许世磊 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期58-63,102,共7页
[目的]预测分析人转录因子激活增强子结合蛋白4(activating enhancer binding protein 4,AP4)的性质、结构和功能。[方法]采用生物信息学方法对人AP4蛋白的理化性质、物种间同源性、信号肽与跨膜区、亲水性、蛋白亚细胞定位、蛋白质二/... [目的]预测分析人转录因子激活增强子结合蛋白4(activating enhancer binding protein 4,AP4)的性质、结构和功能。[方法]采用生物信息学方法对人AP4蛋白的理化性质、物种间同源性、信号肽与跨膜区、亲水性、蛋白亚细胞定位、蛋白质二/三级结构、三级结构可靠性、蛋白质相互作用等方面进行预测和分析。[结果]人AP4蛋白全长338个氨基酸,理论等电点5.63,相对分子质量38.73 kDa。AP4在进化上较为保守,不含信号肽与跨膜区,属于亲水性蛋白质,94.1%可信度定位于细胞核。二级结构含10个α螺旋区,占全部氨基酸的54.14%,5个β折叠区,占7.99%,其余37.87%的氨基酸处于无规卷曲状态。三维建模结果可靠。预测到10个与AP4存在相互作用的蛋白。[结论]系统预测分析了人AP4蛋白的性质、结构和功能。 展开更多
关键词 激活增强子结合蛋白4 蛋白 生物信息学
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非小细胞肺癌组织TFAP4表达及其对A549增殖和侵袭影响 被引量:3
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作者 黄琰菁 王琳 +3 位作者 李赛 盛莉 王海霞 杨生辉 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2019年第11期778-783,共6页
目的转移和复发是导致非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)治疗失败的主要因素'明确影响转移和复发的相关机制对提高治疗效果及改善患者预后具有重要意义。本研究旨在检测转录因子激活增强子结合蛋白4(transcription fa... 目的转移和复发是导致非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)治疗失败的主要因素'明确影响转移和复发的相关机制对提高治疗效果及改善患者预后具有重要意义。本研究旨在检测转录因子激活增强子结合蛋白4(transcription factor activating enhancer-binding protein 4 ,TFAP4)在 NSCLC 组织中表达,并探讨下调该基因对 A549 增殖和侵袭的影响。方法选取2015-03-06-2018-03-04海南省人民医院行手术治疗的NSCLC标本及对应的癌旁组织(距肿瘤边缘≥5cm)78例,采用免疫组化法检测NSCLC和癌旁组织中TFAP4蛋白表达。细胞实验包括培养NSCLC细胞株,随机分为siRNA-TFAP4组(转染TFAP4基因干扰序列)、对照序列组(转染阴性对照序列)和对照组(不作任何处理),通过实时荧光定量聚合酶链反应法(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)及蛋白质印迹法检测沉默的效率。四甲基偶氮唑盐(methyl thiazoly tetrazolim, MTT)比色法和Transwell小室分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法检测细胞中Snail、E-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果 NSCLC组织中TFAP4蛋白阳性表达率为79.49%,高于癌旁组织的 30.77%,χ^2=37.419,P<0.001;TNM 分期Ⅲ~Ⅳ期(χ^2=6.395,P<0.05)、低分化(χ^2=4.577,P<0.05)和发生淋巴结转移的NSCLC组织中TFAP4(χ^2=7.386 ,P<0.05)蛋白阳性表达率升高;siRNA-TFAP4组细胞中TFAP4 mRNA相对表达量为0.31±0.07,低于对照序列组(0.98±0.13)和对照组(1.00±0.03),F=120.840, P<0.001;siRNA-TFAP4组迁移细胞数为 104.04±3.70,低于对照序列组(133.94±8.20)和对照组(130.98±7.26),F=6.555,P<0.001;siRNA-TFAP4组侵袭细胞数为96.12±4.36,低于对照序列组(120.31±4.67)和对照组(122.63±5.23),F=56.880,P<0.001;与对照序列组和对照组比较,24、48、72和96h siRNA-TFAP4组细胞的增殖能力降低,F值分别为9.924、16.429、18.156和16.970,均P<0.05;siRNA-TFAP4 组细胞中 TFAP4、 Snail和Vimentin 蛋白相对表达量低于对照序列组和 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 转录因子激活增强子结合蛋白4 细胞增殖 细胞侵袭
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TFAP4低表达对胃癌细胞恶性生物学行为的影响及机制 被引量:2
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作者 吴琦 王洪伟 +5 位作者 郭素芬 于建渤 王红艳 于微 于泽宇 郑慧哲 《山东医药》 CAS 2021年第28期33-37,共5页
目的探讨TFAP4低表达对胃癌细胞恶性生物学行为的影响及机制。方法用RT-PCR、Westernblot⁃ting法检测细胞中TFAP4表达,选取TFAP4 mRNA和蛋白表达最高的MGC-803细胞作为实验细胞。将MGC-803细胞随机分为空白对照组(Control组)、阴性对照... 目的探讨TFAP4低表达对胃癌细胞恶性生物学行为的影响及机制。方法用RT-PCR、Westernblot⁃ting法检测细胞中TFAP4表达,选取TFAP4 mRNA和蛋白表达最高的MGC-803细胞作为实验细胞。将MGC-803细胞随机分为空白对照组(Control组)、阴性对照组(NC组)、TFAP沉默组(siTFAP组)、TFAP沉默+空载转染组(siT⁃FAP4+Vector组)、TFAP沉默+HMGB1过表达组(siTFAP4+HMGB1组)并进行转染。用RT-PCR技术检测各组细胞中TFAP4 mRNA表达,确认转染效率。用RT-PCR技术检测细胞中HMGB1 mRNA表达,用Westernblotting法检测细胞中TFAP4、HMGB1蛋白表达及胞质、胞核YAP蛋白表达,用划痕实验检测细胞迁移能力,用Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,用体外血管生成实验检测内皮细胞成管能力,用双荧光素酶报告基因实验验证TFAP4对HMGB1的转录调控作用。结果与NC组比较,siTFAP4组细胞迁移率低,细胞侵袭数目和管腔形成数目少,TFAP4、HMGB1及胞核YAP表达低,胞质YAP表达高(P均<0.05)。与siTFAP4+Vector组比较,siTFAP4+HMGB1组细胞迁移率高,细胞侵袭数目和管腔形成数目多,HMGB1、胞核YAP表达高,胞质YAP表达低(P均<0.05)。双荧光素酶实验结果显示,与pGL3-Basic+TFAP4+pRL-TKVector转染细胞比较,pGL3-Basic-Promoter+TFAP4+pRL-TKVector转染细胞荧光素酶相对活性高(P<0.05)。结论TFAP4低表达可抑制胃癌细胞侵袭、迁移,促进内皮成管,其机制可能与TFAP转录调控HMGB1激活YAP信号有关。 展开更多
关键词 胃癌 转录因子激活增强子结合蛋白4 细胞侵袭 细胞迁移 血管生成 高迁移率族蛋白B1
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激活增强子结合蛋白4在胃癌中的表达及其临床意义 被引量:1
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作者 聂家艳 陶文惠 《现代肿瘤医学》 CAS 2018年第23期3783-3787,共5页
目的:探讨激活增强子结合蛋白4(activating enhancer binding protein 4,AP4)在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用RT-PCR和Western blot检测胃癌细胞株BGC823和正常胃上皮细胞中AP4 mRNA和蛋白的表达;应用RT-PCR及... 目的:探讨激活增强子结合蛋白4(activating enhancer binding protein 4,AP4)在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用RT-PCR和Western blot检测胃癌细胞株BGC823和正常胃上皮细胞中AP4 mRNA和蛋白的表达;应用RT-PCR及免疫组化法检测90例胃癌组织中AP4 mRNA和蛋白的表达;进一步采用Log-rank检验和Cox回归模型对结直肠癌患者的预后因素进行分析,并用Kaplan-Meier计算不同AP4表达情况患者的生存率曲线。结果:与正常胃上皮细胞相比,胃癌细胞株BGC823中AP4 mRNA和蛋白的表达水平均显著升高(均P <0. 05);在胃癌组织中,AP4 mRNA的表达水平也明显高于配对的癌旁组织(3. 848±0. 426 vs 1. 411±0. 405,P <0. 05);在蛋白水平,胃癌组织也显著高于配对的癌旁组织,且AP4蛋白表达与胃癌的脉管浸润(P <0. 05)、浸润深度(P <0. 05)及TNM分期(P <0. 05)相关,而与患者的性别、年龄、分化程度、肿瘤位置、淋巴结转移和远处转移无关(均P> 0. 05); Kaplan-Meier单因素回归分析显示,AP4蛋白是影响胃癌患者预后的重要因素(P <0. 05),进一步Cox多因素回归分析显示AP4蛋白是胃癌患者的独立预后因素(P <0. 05)。结论:AP4高表达与胃癌的发生、发展、转移及预后关系密切,可能成为协助胃癌诊断和治疗的新的生物标志物。 展开更多
关键词 胃癌 激活增强子结合蛋白4 免疫组化 预后
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头颈部横纹肌肉瘤P-cadherin和AP2β的表达与FOXO1基因分离的研究
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作者 张小龙 岳常丽 刘红刚 《诊断病理学杂志》 2019年第11期723-727,719,共6页
目的以荧光原位杂交(FISH)技术检测FOXO1基因分离阳性的横纹肌肉瘤(RMS)为金标准,探讨免疫组化标志物胎盘钙黏蛋白(P-cadherin)和激活增强子结合蛋白2β(AP2β)的表达与FOXO1基因分离的相关性及两者替代检测FOXO1基因分离的可行性。方... 目的以荧光原位杂交(FISH)技术检测FOXO1基因分离阳性的横纹肌肉瘤(RMS)为金标准,探讨免疫组化标志物胎盘钙黏蛋白(P-cadherin)和激活增强子结合蛋白2β(AP2β)的表达与FOXO1基因分离的相关性及两者替代检测FOXO1基因分离的可行性。方法收集2002-01-2016-03间首都医科大学附属北京同仁医院的46例RMS的临床病理资料。蜡块连续切片4张,分别用于HE染色、免疫组化标记物P-cadherin和AP2β染色及FOXO1基因分离的FISH技术检测。结果男性24例,女性22例。0.5~60岁,平均20岁。P-cadherin染色结果为阳性22例,阴性24例。AP-2β染色结果为阳性为46例,阴性0例。FOXO1基因分离阳性21例,阴性25例。结论 P-cadherin诊断FOXO1基因分离的敏感性和特异性高,其有可能代替FISH检测FOXO1基因分离结果。AP2β不能用于鉴别FOXO1基因分离需进一步讨论。 展开更多
关键词 横纹肌肉瘤 胎盘钙黏蛋白 激活增强子结合蛋白 FOXO1基因
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