基于溶血曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,M.haemolytica)单拷贝基因sodA,通过优化反应条件和体系,建立了溶血曼氏杆菌ddPCR(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)定量检测方法。结果显示,所建立的溶血曼氏杆菌ddPCR方法...基于溶血曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,M.haemolytica)单拷贝基因sodA,通过优化反应条件和体系,建立了溶血曼氏杆菌ddPCR(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)定量检测方法。结果显示,所建立的溶血曼氏杆菌ddPCR方法特异性好;检出限(limit of detection,LOD)和定量值(limit of quantification,LOQ)均为170 CFU/m L,3个平行检测的变异系数均小于25%,重复性良好。针对系列稀释的溶血曼氏杆菌纯菌液,ddPCR法能够实现对溶血曼氏杆菌的准确定量,与平板计数结果偏差小于4%。运用所建立的ddPCR方法对15份牛鼻拭子样品进行检测,结果在10份样品中检出溶血曼氏杆菌,含量在3.07×10^(2)~9.52×10^(4)CFU/mL之间。本研究所建立的ddPCR方法适用于临床鼻拭子样品中溶血曼氏杆菌的精准定量分析,可为牛群中溶血曼氏杆菌的监测和治疗提供有效的技术支持。展开更多
文摘基于溶血曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,M.haemolytica)单拷贝基因sodA,通过优化反应条件和体系,建立了溶血曼氏杆菌ddPCR(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)定量检测方法。结果显示,所建立的溶血曼氏杆菌ddPCR方法特异性好;检出限(limit of detection,LOD)和定量值(limit of quantification,LOQ)均为170 CFU/m L,3个平行检测的变异系数均小于25%,重复性良好。针对系列稀释的溶血曼氏杆菌纯菌液,ddPCR法能够实现对溶血曼氏杆菌的准确定量,与平板计数结果偏差小于4%。运用所建立的ddPCR方法对15份牛鼻拭子样品进行检测,结果在10份样品中检出溶血曼氏杆菌,含量在3.07×10^(2)~9.52×10^(4)CFU/mL之间。本研究所建立的ddPCR方法适用于临床鼻拭子样品中溶血曼氏杆菌的精准定量分析,可为牛群中溶血曼氏杆菌的监测和治疗提供有效的技术支持。
