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蔗糖浓度对渗透休克法提取细胞周质重组蛋白的影响 被引量：2
1
作者 郭建华 《安徽农业科学》 CAS 2017年第4期147-148,共2页
[目的]研究不同蔗糖浓度的高渗液对渗透休克法(Osmotic Shock)提取细胞周质蛋白的影响。[方法]将已经构建好的含Fbp A基因的表达质粒转化到EC感受态细胞中,分别在20%、30%、40%和50%的蔗糖高渗液条件下用Osmotic Shock纯化蛋白,SDS-PAG... [目的]研究不同蔗糖浓度的高渗液对渗透休克法(Osmotic Shock)提取细胞周质蛋白的影响。[方法]将已经构建好的含Fbp A基因的表达质粒转化到EC感受态细胞中,分别在20%、30%、40%和50%的蔗糖高渗液条件下用Osmotic Shock纯化蛋白,SDS-PAGE电泳检测蛋白。[结果]30%和40%的蔗糖高渗液能得到浓度更高的重组蛋白,而用20%和50%的蔗糖高渗液提取蛋白产量较低。[结论]30%和40%的蔗糖高渗液能提高Osmotic Shock法提取细胞周质重组蛋白产量。 展开更多
关键词 蔗糖 渗透休克 细胞周质 重组蛋白
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渗透休克法提取重组青霉素G酰化酶及酶学性质研究 被引量：1
2
作者 蒋咏梅 章文贤 魏东芝 《福建师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期72-76,共5页
为简化后期提取工艺,采用渗透休克法提取基因工程菌重组青霉素G酰化酶,回收率92.4%的酶蛋白释放到胞外,纯度达80%,比酶活26.4 U/m g.酶学性质研究表明,K cPGA的最适作用pH和温度分别为pH 7~9和50℃,在pH 5.0~8.0和低于40℃的范围较稳定.
关键词 青霉素G酰化酶 渗透休克 酶学性质
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医药其它
3
《生物技术通报》 CAS CSCD 1990年第5期78-82,共5页
关键词 编码人 细胞培养物 层析纯化 白细胞介素 转化株 短暂转染 重组蛋白 渗透休克 启动子 分子克隆
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核酸及蛋白质合成、提取、纯化
4
《生物技术通报》 CAS CSCD 1993年第5期26-27,共2页
关键词 蛋白质合成 DNA 闭合环状 细胞团 正丁醇提取 渗透休克 原生质球 酶解制备 超螺旋质粒 定序
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核酸及蛋白质合成、提取、纯化
5
《生物技术通报》 CAS CSCD 1993年第12期22-24,共3页
933940从完整酵母细胞中快速小规模分离 mRNA[英]/Faulkner,J.D.B.…∥BioTechniques-1993,14(5).-718,720[译自 DBA,1993,12(13).93-07325]甩含有共价连于其表面的多聚-dT^+
关键词 蛋白质合成 酿酒酵母 酵母细胞 超顺磁 酵母人工染色体 DNA 渗透休克 革兰氏阴性细菌 肝素亲和层析 琼脂糖凝胶
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贵阳地区孕期夫妇β-地中海贫血血液学筛查及基因突变分析的研究 被引量：20
6
作者 单可人 张宏秀 +6 位作者 惠春林 何燕 窦友莲 谢渊 曾金琳 修瑾 任锡麟 《中国实用妇科与产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期543-544,共2页
目的　为丰富人类基因组多样性研究和疾病分析研究的内容 ,对贵阳地区进行大样本孕期夫妇 β -地中海贫血筛查及基因突变的分析。方法　采用红细胞渗透休克试验和血红蛋白F(HbF)及血红蛋白A2 (HbA2 )定量测定 ,对孕期夫妇进行 β -地中... 目的　为丰富人类基因组多样性研究和疾病分析研究的内容 ,对贵阳地区进行大样本孕期夫妇 β -地中海贫血筛查及基因突变的分析。方法　采用红细胞渗透休克试验和血红蛋白F(HbF)及血红蛋白A2 (HbA2 )定量测定 ,对孕期夫妇进行 β -地中海贫血血液学筛查 ,阳性者采用PCR -RDB法进行基因突变分析。结果　在受检的 10 5 4例中 ,共检出 β-地中海贫血携带者 2 8例 ,发生率为 2 6 6 %。 结论　通过对贵阳地区孕期夫妇进行的β-地中海贫血调查 ,基因分析 ,为今后对该地区人群进行生育指导 ,产前基因诊断 ,提高人口素质具有重要意义。 展开更多
关键词 孕期夫妇 Β-地中海贫血 基因突变 遗传筛查 基因分析 贵阳市 红细胞渗透休克试验 血红蛋白F 血红蛋白A2
原文传递
嗜酸氧化亚铁硫杆菌ATCC23270周质蛋白的选择性提取及差异表达 被引量：3
7
作者 夏金兰 王晶 +4 位作者 张倩 张瑞永 张成桂 欧阳叙东 邱冠周 《中南大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第4期845-850,共6页
通过考察萃取时间、高渗液与低渗液的摩尔比以及总的渗透液体积对细胞质苹果酸脱氢酶的比活性(相对于细胞蛋白质总量)的影响,建立选择性提取Acidithiobacillus ferrooxidans ATCC23270周质蛋白的渗透休克实验方法;结合透射电镜和双向电... 通过考察萃取时间、高渗液与低渗液的摩尔比以及总的渗透液体积对细胞质苹果酸脱氢酶的比活性(相对于细胞蛋白质总量)的影响,建立选择性提取Acidithiobacillus ferrooxidans ATCC23270周质蛋白的渗透休克实验方法;结合透射电镜和双向电泳实验方法,分析渗透处理前后细胞的形态和不同生长期的细胞周质空间蛋白表达差异。研究结果表明,合适的渗透休克实验条件为:细胞质量为0.1g(湿重),渗透液的总体积为10mL,渗透液的作用时间为15min,高渗液与低渗液的摩尔比为1:1;在高渗环境下,细胞收缩,周质空间变小;在低渗液环境下,细胞周质空间膨胀,外膜被胀破,周质空间内蛋白释放出来;双向电泳显示周质蛋白总体上以小相对分子质量蛋白为主,在不同的生长时期内的周质蛋白表达存在差异。 展开更多
关键词 ACIDITHIOBACILLUS ferrooxidans 周质蛋白 双向电泳 苹果酸脱氢酶活性 渗透休克法
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渗透休克法从大肠杆菌中提取GST-Tα1-TP5融合蛋白 被引量：2
8
作者 谢琦 刘永明 《华夏医学》 CAS 2016年第4期9-12,共4页
目的:从大肠杆菌中选择性抽提GST-Tα1-TP5融合蛋白。方法:采用渗透休克法从大肠杆菌中提取GST-Tα1-TP5融合蛋白,优化操作条件,并与超声破碎法进行比较。结果:优化后的渗透休克法从大肠杆菌提取GST-Tα1-TP5融合蛋白可使杂蛋白量含量... 目的:从大肠杆菌中选择性抽提GST-Tα1-TP5融合蛋白。方法:采用渗透休克法从大肠杆菌中提取GST-Tα1-TP5融合蛋白,优化操作条件,并与超声破碎法进行比较。结果:优化后的渗透休克法从大肠杆菌提取GST-Tα1-TP5融合蛋白可使杂蛋白量含量相对超声破碎法降低一个数量级。结论:渗透休克法可高效提取大肠杆菌表达的GST-Tα1-TP5融合蛋白。 展开更多
关键词 渗透休克法 大肠杆菌 谷胱甘肽硫转移酶 重组胸腺肽Tα1-TP5
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细菌蛋白的运输与分泌
9
作者 Anthony P.Pugsley Maxime Schwertz 《氨基酸和生物资源》 CAS 1986年第4期58-64,44,共8页
一系列形态学上各别的细菌运输与分泌出多种多样的蛋白质。这些蛋白质运输过程在大肠杆菌中已广泛地得到鉴定,有关形成运输机器基因的鉴定已取得了最新的进展。革兰氏阳性和革兰阴性细菌将蛋白质分泌至培养基中。革兰氏阴性细菌为了克... 一系列形态学上各别的细菌运输与分泌出多种多样的蛋白质。这些蛋白质运输过程在大肠杆菌中已广泛地得到鉴定,有关形成运输机器基因的鉴定已取得了最新的进展。革兰氏阳性和革兰阴性细菌将蛋白质分泌至培养基中。革兰氏阴性细菌为了克服外膜附加的渗透性采取了种种的方法。 展开更多
关键词 革兰氏阴性细菌 切割位点 细菌蛋白 原生质膜 原核生物 革兰阴性细菌 真核生物 信号肚 周质 渗透休克法
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重组脯氨酰内肽酶提取方法改进及活性研究
10
作者 毛建平 肖斌 +2 位作者 宋晓彤 余蓉 郑永祥 《药物生物技术》 CAS 2019年第2期100-104,共5页
脯氨酰内肽酶具有水解多肽中脯氨酰残基的能力,具有治疗乳糜泻的潜力,构建高表达量的重组脯氨酰内肽酶、建立保持其高活性的提取方法对于脯氨酰内肽酶的药物开发至关重要。该研究经密码子优化、基因合成,构建了重组鞘氨醇单胞菌脯氨酰... 脯氨酰内肽酶具有水解多肽中脯氨酰残基的能力,具有治疗乳糜泻的潜力,构建高表达量的重组脯氨酰内肽酶、建立保持其高活性的提取方法对于脯氨酰内肽酶的药物开发至关重要。该研究经密码子优化、基因合成,构建了重组鞘氨醇单胞菌脯氨酰内肽酶(SCPEP)的大肠杆菌BL21(DE3)工程菌。探索建立改进型渗透休克法提取SCPEP,经Ni-NTA纯化、超滤浓缩得到产物。采用分光光度法基于底物Suc-Ala-Pro-pNA评价SCPEP的活性,同时与高压均质法提取的产物进行对比研究。结果显示,在pH 6. 0和pH 7. 0的反应体系中,采用改进型渗透休克法提取的SCPEP水解Suc-Ala-Pro-pNA的kcat/KM分别为(56. 58±12. 00)(mmol/L)-1·s-1和(55. 82±15. 33)(mmol/L)-1·s-1,而高压均质法提取的SCPEP水解Suc-Ala-Pro-pNA的kcat/KM分别为(24. 78±10. 63)(mmol/L)-1·s-1和(48. 69±13. 79)(mmol/L)-1·s-1,改进型渗透休克法提取的SCPEP在pH6. 0和pH 7. 0下的活性比高压均质法提取的SCPEP高2. 30和1. 15倍,故改进型渗透休克法有利于提取的SCPEP保持更高的活性。 展开更多
关键词 鞘氨醇单胞菌属 脯氨酰内肽酶 提取方法 渗透休克法 高压均质法 催化活性
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