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MAR提高重组CHO细胞中转基因表达的分子特性分析
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作者 孙秋丽 张俊河 +2 位作者 赵春澎 王小引 王天云 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期64-68,共5页
分析核基质结合区（matrix attachment region,MAR）调控转基因表达的分子序列特征,鉴定能有效提高CHO细胞转基因表达的MAR特征性元件。将人β-珠蛋白MAR片段从5＇到3＇端分为6个分段（1-540,421-1 020,901-1 500,1 381-1 980,1 861-2 4... 分析核基质结合区（matrix attachment region,MAR）调控转基因表达的分子序列特征,鉴定能有效提高CHO细胞转基因表达的MAR特征性元件。将人β-珠蛋白MAR片段从5＇到3＇端分为6个分段（1-540,421-1 020,901-1 500,1 381-1 980,1 861-2 460,2 341-2 999位置）,分别采用PCR进行克隆,经测序证实正确后,分别连接到含有氯霉素乙酰转移酶（chloramphenicol acetyltransferase,CAT）报告基因的表达载体SV40启动子及上游,构建β-珠蛋白MAR渐次片段介导的表达载体,转染CHO细胞,G418筛选出稳定表达细胞株,ELISA分析CAT报告基因的表达水平,生物信息学分析MAR序列特征。结果表明,β-珠蛋白MAR全长能显著提高转基因的表达,6个渐次片段相比较,421-1 020位的第2个分段和901-1 500位的第3个分段提高转基因表达作用显著。生物信息学分析结果显示,MAR-like motif有助于转基因表达提高。 展开更多
关键词 核基质结合区 CHO细胞 渐次克隆 转基因表达
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