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热球菌HJ21高温α-淀粉酶基因克隆、表达及性质研究
被引量：
3
1
作者
王淑军
吕明生
+5 位作者
秦松
陆兆新
房耀维
邓祥元
林谦
刘红飞
《海洋学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第3期158-164,共7页
通过简并引物扩增热球菌(Thermococcus siculi)HJ21高温α-淀粉酶保守区域之间的序列,再利用Site-finding技术获得两端未知序列。构建了在N端添加了His6标签的表达载体pEt-28a-His6-THJA后转化E.coli,在IPTG诱导下表达。进一步纯化后SDS...
通过简并引物扩增热球菌(Thermococcus siculi)HJ21高温α-淀粉酶保守区域之间的序列,再利用Site-finding技术获得两端未知序列。构建了在N端添加了His6标签的表达载体pEt-28a-His6-THJA后转化E.coli,在IPTG诱导下表达。进一步纯化后SDS-PAGE电泳检测达到电泳纯,重组酶分子量为50 KDa。重组酶最适作用温度和pH值分别为90℃,pH5.0。重组酶在pH为5.5时最稳定;K+,Sr2+,Mg2+,Na+对α-淀粉酶活力的促进作用不显著,Cu2+,Pb2+,Hg2+,Zn2+,N-溴代丁酰亚胺和三氯乙酸对该酶有显著抑制作用。
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关键词
深海
古菌
高温酸性α-淀粉酶
基因克隆
表达
酶学性质
下载PDF
职称材料
题名
热球菌HJ21高温α-淀粉酶基因克隆、表达及性质研究
被引量：
3
1
作者
王淑军
吕明生
秦松
陆兆新
房耀维
邓祥元
林谦
刘红飞
机构
淮海工学院海洋学院
江苏省海洋资源开发研究院
中国科学院海岸带研究所
南京农业大学食品科技学院
出处
《海洋学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第3期158-164,共7页
基金
国家自然科学基金项目(40746030)
江苏省科技支撑计划(BE2008340)
江苏省高校自然科学研究重大项目(09KJA170001)
文摘
通过简并引物扩增热球菌(Thermococcus siculi)HJ21高温α-淀粉酶保守区域之间的序列,再利用Site-finding技术获得两端未知序列。构建了在N端添加了His6标签的表达载体pEt-28a-His6-THJA后转化E.coli,在IPTG诱导下表达。进一步纯化后SDS-PAGE电泳检测达到电泳纯,重组酶分子量为50 KDa。重组酶最适作用温度和pH值分别为90℃,pH5.0。重组酶在pH为5.5时最稳定;K+,Sr2+,Mg2+,Na+对α-淀粉酶活力的促进作用不显著,Cu2+,Pb2+,Hg2+,Zn2+,N-溴代丁酰亚胺和三氯乙酸对该酶有显著抑制作用。
关键词
深海
古菌
高温酸性α-淀粉酶
基因克隆
表达
酶学性质
Keywords
archaeon in deep sea
thermostable and acid-stable α-amylase
gene cloning
expression
characterization
分类号
Q939.5 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
热球菌HJ21高温α-淀粉酶基因克隆、表达及性质研究
王淑军
吕明生
秦松
陆兆新
房耀维
邓祥元
林谦
刘红飞
《海洋学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
3
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