鸡脾脏T淋巴细胞增殖试验优化条件的筛选 被引量：11

1

作者 何玉琴 杨小燕 +2 位作者 林淑慧 黄其春 李焰 《动物医学进展》 CSCD 2008年第7期47-49,共3页

为了建立鸡脾脏T淋巴细胞转化试验的最佳培养条件,采用四甲基偶氮唑(MTT)比色法,对细胞浓度、小牛血清及刀豆蛋白A(ConA)的浓度,以及培养时间等4个参数进行研究。结果表明,采用5×106/mL细胞、100mL/L小牛血清、10μg/mL的ConA及48... 为了建立鸡脾脏T淋巴细胞转化试验的最佳培养条件,采用四甲基偶氮唑(MTT)比色法,对细胞浓度、小牛血清及刀豆蛋白A(ConA)的浓度,以及培养时间等4个参数进行研究。结果表明,采用5×106/mL细胞、100mL/L小牛血清、10μg/mL的ConA及48h培养时间可获得最大的OD570吸光值。 展开更多

关键词 淋巴细胞增殖试验 MTT法 鸡

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医用重组人源胶原蛋白功能敷料体外免疫原性评价

2

作者 王国伟 侯丽 +3 位作者 秦越 王焱 王鸾鸾 刘成虎 《食品与药品》 CAS 2024年第2期153-157,共5页

目的对一种医用重组人源胶原蛋白功能敷料的体外免疫原性进行评价。方法以细胞培养液为浸提介质,按0.2 g/ml的比例浸提制备试验液,进行体外淋巴细胞增殖试验、人细胞系激活试验(h-CLAT)、细胞炎症因子含量检测。结果体外淋巴细胞增殖试... 目的对一种医用重组人源胶原蛋白功能敷料的体外免疫原性进行评价。方法以细胞培养液为浸提介质,按0.2 g/ml的比例浸提制备试验液,进行体外淋巴细胞增殖试验、人细胞系激活试验(h-CLAT)、细胞炎症因子含量检测。结果体外淋巴细胞增殖试验中,100%,50%,25%3种浓度试验液的淋巴细胞增殖率分别为105%,111%,86.3%,与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。h-CLAT结果显示,试验组THP-1细胞表面分子CD54 RFI值<200,CD86 RFI值<150,判定为阴性结果。试验组细胞上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素8(IL-8)的含量与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论医用重组人源胶原蛋白功能敷料有良好的生物相容性。 展开更多

关键词 医用重组人源胶原蛋白 生物相容性 淋巴细胞增殖试验 免疫原性 人细胞系激活试验(h-CLAT)

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多发性硬化患者T淋巴细胞对不同浓度神经髓鞘及其成分的增殖反应性关系探讨 被引量：4

3

作者 董万利 包仕尧 +3 位作者 程庆璋 方琪 赵红茹 Trotter JL 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2003年第3期204-207,共4页

为比较不同浓度神经髓鞘组织、神经髓鞘蛋白及其合成多肽作为抗原对多发性硬化 (MS )和正常人的淋巴细胞诱发增殖反应的量效关系。用HLA DR15亚型MS和正常对照外周血单个核细胞 ,体外培养并检测对不同浓度的人神经髓鞘、脱脂神经髓鞘、... 为比较不同浓度神经髓鞘组织、神经髓鞘蛋白及其合成多肽作为抗原对多发性硬化 (MS )和正常人的淋巴细胞诱发增殖反应的量效关系。用HLA DR15亚型MS和正常对照外周血单个核细胞 ,体外培养并检测对不同浓度的人神经髓鞘、脱脂神经髓鞘、蛋白脂蛋白 (PLP )、碱性髓鞘蛋白 (MBP )、PLP178 191和MBP87 10 6多肽 6种抗原的T淋巴细胞增殖反应性。结果发现神经髓鞘或脱脂神经髓鞘作为抗原刺激T淋巴细胞增殖反应的最佳浓度为 5 0～ 15 0 μg/ml,PLP或MBP最佳浓度为 2 5～ 10 0 μg/ml,多肽最佳浓度为 2 0～ 5 0 μg/ml。神经髓鞘抗原刺激T淋巴细胞增殖反应大于单一蛋白分子 ,后者又大于多肽。MS的T细胞对神经髓鞘类抗原有特异性异常增殖反应。 展开更多

关键词 多发性硬化 T淋巴细胞增殖试验 神经髓鞘 合成多肽

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人外周血淋巴细胞增殖试验的优化及其应用 被引量：5

4

作者 邵安良 穆钰峰 +2 位作者 屈树新 陈亮 徐丽明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1354-1361,共8页

目的:优化人外周血淋巴细胞增殖试验条件;考察动物源材料的Gal抗原含量与淋巴细胞增殖效应的相关性;并比较人外周血淋巴细胞与小鼠脾脏淋巴细胞增殖试验对动物源材料的敏感性差异。方法:从细胞接种量,阳性对照(刀豆球蛋白A,Con A)的工... 目的:优化人外周血淋巴细胞增殖试验条件;考察动物源材料的Gal抗原含量与淋巴细胞增殖效应的相关性;并比较人外周血淋巴细胞与小鼠脾脏淋巴细胞增殖试验对动物源材料的敏感性差异。方法:从细胞接种量,阳性对照(刀豆球蛋白A,Con A)的工作浓度与细胞培养时间,优化人外周血淋巴细胞增殖试验的最佳条件;利用优化的试验方法,通过人外周血淋巴细胞与动物源性材料的(牛跟腱或由牛跟腱纯化的胶原蛋白海绵)匀浆液或浸提液共培养,考察材料的不同前处理方式对人外周血淋巴细胞增殖的影响;参考标准YY/T 1561-2017,检测材料匀浆液或浸提液的Gal抗原含量,分析其抗原含量与淋巴细胞增殖效应的相关性;同时参考标准YY/T 1465.1-2016,考察材料匀浆液与浸提液对小鼠脾脏淋巴细胞增殖效应的影响,并对比分析对动物源材料的敏感性差异。结果:人外周血淋巴细胞增殖试验最佳反应条件经优化确定为:细胞接种量为1×10^5,阳性对照(Con A)的终浓度选择5~10μg·mL^-1,培养时间为4 d。人外周血淋巴细胞与胶原蛋白海绵(匀浆组与浸提液组)共培养后,样品组与正常细胞对照组相比不存在明显差异;与牛跟腱匀浆液共培养后,与正常细胞对照组相比不存在显著性差异。胶原蛋白海绵(匀浆组与浸提液组)对小鼠脾脏淋巴细胞均无明显增殖效应。牛跟腱匀浆液在5倍稀释与50倍稀释后,对小鼠脾脏淋巴细胞均有明显增殖效应(增殖率为143.20%和128.71%)。牛跟腱匀浆液的Gal抗原含量为(3.98±1.06)×10^13个·mg^-1、胶原蛋白海绵匀浆液为(2.24±0.60)×10^13个·mg^-1、胶原蛋白海绵浸提液为(1.89±0.64)×10^13个·mg^-1。结论:淋巴细胞增殖效应与动物源性生物材料中残留Gal抗原含量的正向相关性不强。与小鼠脾脏淋巴细胞增殖试验相比,采用人外周血淋巴细胞增殖试验评价含Gal抗原的动物源性生物材料细� 展开更多

关键词 淋巴细胞增殖试验 人外周血淋巴细胞 小鼠脾脏淋巴细胞 牛跟腱 胶原蛋白海绵 Gal抗原

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动物源性生物材料体外淋巴细胞增殖试验方法的建立 被引量：5

5

作者 陈亮 穆钰峰 +3 位作者 邵安良 魏丽娜 屈树新 徐丽明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1337-1346,共10页

目的:建立可用于评价动物源性生物材料细胞免疫的体外淋巴细胞增殖试验方法。方法:采用C57小鼠脾脏淋巴细胞,通过淋巴细胞数量、阳性对照剂(刀豆蛋白A,Con A)浓度和培养时间等条件筛选,用CCK8试剂检测细胞增殖率,初步优化体外淋巴细胞... 目的:建立可用于评价动物源性生物材料细胞免疫的体外淋巴细胞增殖试验方法。方法:采用C57小鼠脾脏淋巴细胞,通过淋巴细胞数量、阳性对照剂(刀豆蛋白A,Con A)浓度和培养时间等条件筛选,用CCK8试剂检测细胞增殖率,初步优化体外淋巴细胞增殖试验方法。采用牛心包组织(原材料)的浸提液和匀浆液,作为抗原特异性的阳性对照组考察样品前处理方式对试验体系的影响,并用流式细胞仪分析增殖后的淋巴细胞亚型百分比,考察样品制备方式对淋巴细胞亚型增殖影响的差异。结果:本试验中小鼠脾淋巴细胞体外增殖试验条件确定为每孔接种6×105个淋巴细胞,阳性对照孔Con A浓度为2.5μg·mL-1,培养时间为3 d。牛心包浸提液和匀浆液的淋巴细胞增殖率均约为细胞对照组的2倍,两者的淋巴细胞亚型百分比变化不同于Con A组,未出现T细胞、CD4 T细胞、CD8 T细胞百分比的增加。浸提液组与匀浆液组的活化NK细胞和NKT细胞百分比与对照组相比均明显升高,但浸提液组的升高幅度数倍高于匀浆液组,且仅浸提液组NK细胞百分比与对照相比出现了明显倍增。结论:本研究建立了以动物组织(原材料)为抗原特异性阳性对照的体外淋巴细胞增殖试验方法。动物组织(原材料)浸提和匀浆样品均可以产生淋巴细胞增殖阳性结果,其促进淋巴细胞增殖的机理(亚型分类)不同于Con A等有丝分裂原,提示使用作为动物组织(原材料)阳性对照更能反映试验体系的敏感性。 展开更多

关键词 动物组织(原材料) 动物源性生物材料 淋巴细胞增殖试验 抗原特异性 流式细胞术

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不同种属小鼠用于淋巴细胞增殖试验的比较研究 被引量：4

6

作者 陈亮 穆钰峰 +3 位作者 邵安良 魏丽娜 屈树新 徐丽明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1347-1353,共7页

目的:对使用不同种属小鼠进行脾淋巴细胞增殖试验的适宜性和可比性进行研究。方法:分别获取BALB/c小鼠、野生型C57BL/6(简称C57)小鼠、Gal抗原缺失(C57背景,GGTA1基因被敲除)小鼠的脾淋巴细胞,在确定脾淋巴细胞数量与CCK8吸收度的线性... 目的:对使用不同种属小鼠进行脾淋巴细胞增殖试验的适宜性和可比性进行研究。方法:分别获取BALB/c小鼠、野生型C57BL/6(简称C57)小鼠、Gal抗原缺失(C57背景,GGTA1基因被敲除)小鼠的脾淋巴细胞,在确定脾淋巴细胞数量与CCK8吸收度的线性范围后,设立阳性对照组(刀豆蛋白A,Con A)、不同稀释度的动物原材料匀浆液和脱细胞生物材料匀浆液等试验组,使用CCK8检测淋巴细胞增殖,流式细胞术测定淋巴细胞亚型百分比,以确定BALB/c小鼠、野生型C57小鼠和Gal抗原缺失小鼠在体外淋巴细胞增殖试验的适宜性和可比性。结果:C57小鼠脾淋巴细胞数量和CCK8的吸收度的线性范围要明显大于BALB/c小鼠,而BALB/c小鼠线性曲线的斜率明显大于C57小鼠。从CCK8检测的淋巴细胞增殖结果看,BALB/c小鼠与C57小鼠相比,2.5μg·mL-1的Con A对2种小鼠脾淋巴细胞增殖均出现明显刺激作用;牛跟腱(含低水平的Gal抗原)匀浆液对2种小鼠脾淋巴细胞增殖均显示刺激作用,并显示出量效关系;不同稀释度的胶原海绵(牛跟腱来源)匀浆液对2种小鼠脾淋巴细胞增殖均未显示刺激作用,表现了一致的结果,说明没有淋巴细胞促增殖作用。另外,来源于Gal抗原缺失小鼠与野生型C57小鼠的脾脏淋巴细胞对Con A、牛心包(含有高水平的Gal抗原)匀浆液均表现出强的增殖反应和相似的反应强度。流式细胞术检测结果显示牛心包匀浆原液组在Gal抗原缺失小鼠仅显示活化B细胞百分比与对照组相比有统计学显著性差异,而在野生型C57小鼠组其活化B细胞、活化T细胞、活化NK细胞、NKT细胞、CD4 T细胞百分比与对照组相比均有统计学显著性差异。结论:CCK8检测的各试验组淋巴细胞增殖率结果在C57小鼠与BALB/c小鼠、Gal抗原缺失小鼠与野生型C57小鼠间具有可比性,表明这些种属的小鼠均可用于体外淋巴细胞增殖试验。 展开更多

关键词 淋巴细胞增殖试验 BALB/C小鼠 C57BL/6小鼠 Gal抗原缺失小鼠 GGTA1基因敲除 动物源性生物材料

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基于CFSE染色的猪淋巴细胞增殖试验方法的建立 被引量：1

7

作者 赵和平 孙元 +1 位作者 袁远 仇华吉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期159-163,共5页

目的:建立一种方便可靠的评价猪只细胞免疫水平的试验方法。方法:用终浓度分别为3、6、9和12μg/ml的刀豆素A(ConA)刺激经羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色的猪外周血单个核细胞(PBMC)3、5和7天,然后用荧光标记的单克隆抗体对C... 目的:建立一种方便可靠的评价猪只细胞免疫水平的试验方法。方法:用终浓度分别为3、6、9和12μg/ml的刀豆素A(ConA)刺激经羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色的猪外周血单个核细胞(PBMC)3、5和7天,然后用荧光标记的单克隆抗体对CD4+和CD8+细胞进行标记,最后利用流式细胞术分析。结果:不同浓度ConA刺激后,猪PBMC增殖能力不同,ConA浓度为6μg/ml时CD4+和CD8+细胞的细胞分裂指数最大,用MTT试验也获得相似结果。对PBMC刺激5天后进行分析相对较好。结论:建立了一种基于活细胞染料CFSE染色的猪淋巴细胞增殖试验方法,该方法可以在单个细胞水平上有效地分析刺激后CD4+和CD8+细胞亚群的增殖水平,进而评价细胞免疫水平。 展开更多

关键词 猪淋巴细胞 细胞免疫 CFSE染色 淋巴细胞增殖试验

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鱼源无乳链球菌GD201008-001中无超抗原的确定 被引量：2

8

作者 高婷婷 刘广锦 姚火春 《畜牧与兽医》 北大核心 2018年第12期68-72,共5页

罗非鱼源无乳链球菌GD201008-001对小鼠的致死率极高,极低数量的细菌(10 CFU/只)攻毒12 h后小鼠即表现出临床症状,24 h内全部死亡。这一现象与人类感染链球菌后产生的中毒性休克综合征(STSS)症状相似,STSS是由链球菌超抗原引起,故推测GD... 罗非鱼源无乳链球菌GD201008-001对小鼠的致死率极高,极低数量的细菌(10 CFU/只)攻毒12 h后小鼠即表现出临床症状,24 h内全部死亡。这一现象与人类感染链球菌后产生的中毒性休克综合征(STSS)症状相似,STSS是由链球菌超抗原引起,故推测GD201008-001在感染小鼠的过程中可能会分泌某种超抗原(superantigen,SAg)。通过对该菌基因组进行超抗原的生物信息学分析,并采用体外淋巴细胞增殖试验(MTS法)来检测是否存在超抗原物质。结果表明,在GD201008-001基因组中不含已知的超抗原或超抗原样蛋白基因,同时无乳链球菌在体外培养环境下和体内小鼠感染过程中,均未释放可使淋巴细胞明显增殖的超抗原物质,该强毒株对小鼠高致死率的致病机理仍需我们进一步的探索。 展开更多

关键词 无乳链球菌 超抗原 淋巴细胞 淋巴细胞增殖试验

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重组胸腺肽α1在大肠杆菌中的表达与免疫活性检测 被引量：2

9

作者 马凤龙 崔雪志 +3 位作者 刘焕珍 刘焕奇 姜丽丽 任庆娜 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1448-1451,共4页

根据大肠杆菌密码子偏嗜性修改、合成胸腺肽alpha 1(Tα1)基因并连接到pET32α(+)中构建融合表达载体pET32α-Tα1,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导,经15%SDS-PAGE检测,Tα1获得可溶性表达。将诱导表达菌高压均质破碎后进行亲和层析纯化... 根据大肠杆菌密码子偏嗜性修改、合成胸腺肽alpha 1(Tα1)基因并连接到pET32α(+)中构建融合表达载体pET32α-Tα1,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导,经15%SDS-PAGE检测,Tα1获得可溶性表达。将诱导表达菌高压均质破碎后进行亲和层析纯化,洗脱蛋白峰经脱盐处理后进行免疫活性测定。通过脾淋巴细胞转化试验测定纯化重组Tα1和人用Tα1的活性,结果显示,重组表达的Tα1具有明显的促进淋巴细胞增殖的活性;脱E受体法E玫瑰花环试验测定结果显示,制备的重组Tα1的E玫瑰花结百分率高于空白对照组14.3%以上(胸腺肽溶液的质量标准为提高10%),能够明显增强T细胞的活性。 展开更多

关键词 胸腺肽Α1 原核表达 可溶性表达 亲和层析 淋巴细胞增殖试验 E玫瑰花环试验

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猪白细胞介素-2在BHK-21细胞中表达及其活性分析 被引量：1

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作者 王大伟 乔军 +3 位作者 张辉 胡圣伟 丁波 陈创夫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期378-382,共5页

为鉴定BHK-21细胞中稳定表达猪白细胞介素-2(PoIL-2)的活性,本研究利用RT-PCR技术从猪的淋巴细胞中克隆PoIL-2基因,将其连接于pcDNA3.1载体中,并转染BHK-21细胞。经过G418筛选及RT-PCR鉴定,获得稳定表达PoIL-2基因的BHK-21细胞系。采用... 为鉴定BHK-21细胞中稳定表达猪白细胞介素-2(PoIL-2)的活性,本研究利用RT-PCR技术从猪的淋巴细胞中克隆PoIL-2基因,将其连接于pcDNA3.1载体中,并转染BHK-21细胞。经过G418筛选及RT-PCR鉴定,获得稳定表达PoIL-2基因的BHK-21细胞系。采用实时定量PCR及ELISA测定PoIL-2在BHK-21细胞内的表达,同时以淋巴细胞增殖试验(MTT)检测PoIL-2蛋白活性。试验结果表明稳定整合PoIL-2基因的BHK-21细胞系其PoIL-2mRNA的转录效率是阴性对照组1.43倍,蛋白表达量是阴性对照组1.29倍。MTT试验表明真核表达的PoIL-2促淋巴细胞增殖活性与阴性对照组相比差异极显著(p<0.01),表明BHK-21细胞表达的PoIL-2具有良好的生物学活性。本研究为开发新型基因工程疫苗佐剂和抗病毒制剂奠定了基础。 展开更多

关键词 猪白细胞介素2 真核表达 实时定量PCR 淋巴细胞增殖试验

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流感病毒受体结合表位真核载体的构建及表达 被引量：1

11

作者 罗俊 王欢 +9 位作者 戴军 左斌 裴德翠 丰峰 李婉宜 邝玉 王保宁 蒋忠华 李虹 李明远 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2011年第1期8-11,F0002,共5页

目的构建甲型流感病毒血凝素(HA)信号肽(SP)与HA唾液酸受体结合部位(RB)所含T、B表位的基因片段(RBT、RBB)真核表达质粒,研究其在真核细胞中的表达与免疫特性。方法通过重叠延伸PCR法(overlap-PCR)将HA的SP分别与RB、RBT、RBB通过一段... 目的构建甲型流感病毒血凝素(HA)信号肽(SP)与HA唾液酸受体结合部位(RB)所含T、B表位的基因片段(RBT、RBB)真核表达质粒,研究其在真核细胞中的表达与免疫特性。方法通过重叠延伸PCR法(overlap-PCR)将HA的SP分别与RB、RBT、RBB通过一段多肽接头Gly4Ser融合为SP-RB、SP-RBT和SP-RBT,将其分别插入pcD-NA3.1(+)载体,构建质粒,鉴定正确后转染MDCK细胞,RT-PCR、免疫荧光、MTT检测该质粒的表达和分泌。结果融合基因真核表达质粒构建成功,在MDCK细胞中成功表达,转染细胞培养上清能刺激淋巴细胞增殖。结论SP-RB、SP-RBT、SP-RBB真核表达载体成功构建,表达产物能刺激淋巴细胞增值,为流感病毒唾液酸受体结合部位的T、B细胞表位免苗研究提供初步依据,也为流感核酸疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 流感病毒 T细胞表位 B细胞表位 免疫荧光技术 淋巴细胞增殖试验

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158例恶性肿瘤患者免疫功能的检测分析

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作者 王典瑞 那爱华 +4 位作者 南景一 梁兆祥 宁学才 高梅 何玲 《空军医高专学报》 1994年第1期38-40,共3页

本文对158例恶性肿瘤患者及正常人外周血T淋巴细胞亚群、淋巴细胞总数、淋巴细胞增殖试验及IL-2活性进行了检测。检测结果表明,恶性肿瘤患者各项检测指标明显低于正常人,提示肿瘤患者机体处于免疫平衡失调状态。

关键词 恶性肿瘤 淋巴细胞亚群 淋巴细胞数 淋巴细胞增殖试验 IL-2

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四甲基偶氮唑蓝法测定肠毒素C活性初步研究

13

作者 关心 《辽宁医药》 2005年第3期24-26,共3页

目的：探讨四甲基偶氮唑蓝（MTT）法替代升白实验测定肠毒素C（SEC）活性。方法：采用小鼠脾T淋巴细胞增殖试验，用MTT法对20批样品进行脾T淋巴细胞增殖活性测定，在酶联免疫仪上检测吸光度，与空白组比值作为生物活性标准指数。结论：... 目的：探讨四甲基偶氮唑蓝（MTT）法替代升白实验测定肠毒素C（SEC）活性。方法：采用小鼠脾T淋巴细胞增殖试验，用MTT法对20批样品进行脾T淋巴细胞增殖活性测定，在酶联免疫仪上检测吸光度，与空白组比值作为生物活性标准指数。结论：MTT法可靠性、重复性好，易操作，适合替代升白实验作为高聚生的生物活性检测方法。 展开更多

关键词 肠毒素C T淋巴细胞 高聚生 四甲基偶氮唑蓝法 活性测定 肠毒素 T淋巴细胞增殖试验 步研究 生物活性检测 MTT法

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口腔病理学

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《国外科技资料目录（医药卫生）》 1998年第10期182-183,共2页

关键词 口腔粘膜下纤维变性 口腔病理学 口腔上皮 免疫组织化学 视黄酸受体 脱落细胞学 灼口综合征 评价方法 不典型增生 淋巴细胞增殖试验

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中枢神经髓鞘脂质对T细胞增殖能力的影响

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作者 董万利 包仕尧 +3 位作者 许丽珍 程庆璋 方琪 赵红茹 《神经疾病与精神卫生》 2002年第5期268-269,共2页

目的 揭示脂质体对T淋巴细胞增殖的直接作用以及脱脂神经髓鞘为抗原,比较加入脂质体和无脂质体作用增殖反应的差别。方法 用富集粘附细胞作为抗原提呈细胞,经体外细胞培养后,测T淋巴细胞增殖试验。结果 实验Ⅰ:J细胞增殖反应10μg/ml半... 目的 揭示脂质体对T淋巴细胞增殖的直接作用以及脱脂神经髓鞘为抗原,比较加入脂质体和无脂质体作用增殖反应的差别。方法 用富集粘附细胞作为抗原提呈细胞,经体外细胞培养后,测T淋巴细胞增殖试验。结果 实验Ⅰ:J细胞增殖反应10μg/ml半乳糖脑苷脂为(1729±906)Bq(P<0.001);实验Ⅱ:半乳糖脑苷脂2μg/ml为(1135±164)Bq(P<0.05),10μpg/ml为(2492±724)(P<0.001)。而两种浓度的神经鞘氨醇在两组实验中均使细胞全部死亡。结论 半乳糖脑苷脂使T细胞增殖反应增强,并与浓度相关。而两种浓度的神经鞘氨醇均使细胞全部死亡。提示正常神经髓鞘的脂质可能与维持正常免疫稳定性有关。 展开更多

关键词 脂质体 T淋巴细胞增殖试验 多发性硬化 神经髓鞘

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诱导T细胞免疫反应的日本血吸虫抗原表位的重组表达与免疫原性鉴定

16

作者 李健 殷旭仁 +5 位作者 余传信 许永良 华万全 何伟 梁幼生 高琪 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2007年第4期241-246,共6页

目的对预测的日本血吸虫T细胞免疫反应表位进行合成与融合表达,并对其免疫原性进行分析。方法根据3个表位(P7、P17、P18)的基因序列,人工合成正、负链寡核苷酸序列,使正链的5′端带有NcoI酶切位点,负链的3′端带有XhoI酶切位点。将每条... 目的对预测的日本血吸虫T细胞免疫反应表位进行合成与融合表达,并对其免疫原性进行分析。方法根据3个表位(P7、P17、P18)的基因序列,人工合成正、负链寡核苷酸序列,使正链的5′端带有NcoI酶切位点,负链的3′端带有XhoI酶切位点。将每条表位肽的正、负寡核苷酸链退火形成双链DNA后,定向克隆入表达载体pET32c(+),电转化至E.coliDH5α,经PCR、酶切及DNA序列分析鉴定出分别含有P7、P17、P18序列的重组质粒。提取重组质粒电转化至E.coliBL21(DE3)中,用异丙基硫代-β-D半乳糖苷对表位肽融合蛋白进行诱导表达,经12%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳对表达产物进行分析。表位肽融合蛋白用Ni2+螯合亲和层析胶纯化。同时根据P7、P17及P18的氨基酸序列人工合成这3个表位肽段。用纯化的表位融合蛋白、人工合成的表位肽体外刺激紫外线致弱尾蚴免疫C57BL/6J小鼠脾细胞,3H-TdR掺入法检测其刺激淋巴细胞的增殖效果。结果P7、P17、P183个表位肽基因序列被成功克隆到pET32c(+)中并获得重组质粒,重组质粒均能表达大小约20kDa的融合蛋白。表达产物用Ni2+亲和层析胶纯化后获得纯化的肽融合蛋白。表位P7、P17重组蛋白或合成肽均能有效刺激小鼠淋巴细胞增殖。结论P7、P17肽段是日本血吸虫的T细胞抗原表位。 展开更多

关键词 日本血吸虫 抗原表位 重组表达 淋巴细胞增殖试验

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粉尘螨3类变应原的T细胞表位预测及鉴定 被引量：2

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作者 李娜 李朝品 +2 位作者 刁吉东 赵蓓蓓 姜玉新 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2014年第4期415-419,共5页

目的预测并鉴定粉尘螨3类变应原(Der f 3)的T细胞表位。方法运用生物信息学分析软件预测Der f 3的T细胞抗原表位,并人工合成所预测的T细胞表位肽。采用改良MTT法,用预测表位肽刺激致敏鼠脾淋巴细胞进行脾淋巴细胞增殖试验;酶联免疫吸附... 目的预测并鉴定粉尘螨3类变应原(Der f 3)的T细胞表位。方法运用生物信息学分析软件预测Der f 3的T细胞抗原表位,并人工合成所预测的T细胞表位肽。采用改良MTT法,用预测表位肽刺激致敏鼠脾淋巴细胞进行脾淋巴细胞增殖试验;酶联免疫吸附试验检测脾细胞培养上清液中白细胞介素-2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、IL-4及IL-5水平。结果成功预测了Der f 3的5个T细胞表位肽,通过脾淋巴细胞增殖试验,其中3个表位肽序列可促进脾淋巴细胞增殖并刺激细胞因子IL-2和IFN-γ的分泌,抑制细胞因子IL-4和IL-5的分泌。其序列分别为37GDCPYQISLQSSSHFCGG54、98IYQHENYDSMTIDNDVALIKLKTPMT123和164SELQRVDIDVVSREQCDQLYS184。结论初步鉴定了Der f 3变应原中3个T细胞表位序列,为后续过敏性哮喘的诊断和特异性免疫治疗奠定基础。 展开更多

关键词 粉尘螨 粉尘螨3类变应原 T细胞表位 表位预测 脾淋巴细胞增殖试验

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白蜡虫免疫调节作用试验研究 被引量：7

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作者 冯颖 陈晓鸣 +1 位作者 马艳 何钊 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2006年第2期221-224,共4页

对白蜡虫的特异性和非特异性免疫调节功能进行了试验研究,结果表明:特异性免疫的血清溶血素试验中,白蜡虫高剂量组小鼠的溶血素生成量明显高于对照,淋巴细胞转化增殖试验中,白蜡虫高剂量组小鼠的淋巴细胞转化增殖明显。非特异性免疫的... 对白蜡虫的特异性和非特异性免疫调节功能进行了试验研究,结果表明:特异性免疫的血清溶血素试验中,白蜡虫高剂量组小鼠的溶血素生成量明显高于对照,淋巴细胞转化增殖试验中,白蜡虫高剂量组小鼠的淋巴细胞转化增殖明显。非特异性免疫的小鼠碳粒廓清试验、免疫器官的变化未出现阳性结果。试验结果表明白蜡虫对机体的细胞和体液特异性免疫都有提高的作用,说明白蜡虫具有免疫调节功能,具有较高的资源开发利用价值。 展开更多

关键词 白蜡虫 免疫调节 特异性免疫 血清溶血素试验 淋巴细胞转化增殖试验

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犬红细胞培养上清液对淋巴细胞增殖转化的影响 被引量：2

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作者 张佩君 白丽丽 +1 位作者 乔琦 陈德坤 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第4期51-54,59,共5页

无菌采取犬血、肝素抗凝、分离出红细胞,制备不同浓度的红细胞悬液,接种24孔板中进行培养,在培养不同时间分别收集红细胞培养上清液,采用淋巴细胞增殖转化试验,检测其单独及协同不同丝裂原(PHA-P、ConA和LPS)对犬淋巴细胞增殖转化的影响... 无菌采取犬血、肝素抗凝、分离出红细胞,制备不同浓度的红细胞悬液,接种24孔板中进行培养,在培养不同时间分别收集红细胞培养上清液,采用淋巴细胞增殖转化试验,检测其单独及协同不同丝裂原(PHA-P、ConA和LPS)对犬淋巴细胞增殖转化的影响,淋转结果用MTT法测定。结果显示,无论单独或是协同不同丝裂原(PHA- P、ConA和LPS),红细胞培养上清液对淋巴细胞均有明显的促增殖转化作用(P<0．05);单独及协同丝裂原PHA-P、ConA和LPS刺激淋巴细胞时,红细胞浓度分别为1×108,1×109,5．0×107和1×108mL1,培养时间分别为56,72, 56和72 h的红细胞培养上清效果最佳。表明,犬红细胞培养上清液对犬淋巴细胞的增殖转化有明显的促进作用。 展开更多

关键词 犬 红细胞培养上清液 淋巴细胞转化增殖试验 MTT法

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158例恶性肿瘤患者免疫功能检测分析

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作者 王典瑞 那爱华 +4 位作者 南景一 梁兆祥 宁学才 高梅 何玲 《空军医高专学报》 1995年第3期185-185,共1页

近年来研究结果表明,恶性肿瘤患者体内存在免疫功能调节紊乱,并成为恶性肿瘤复发与转移的原因之一.为了深入探讨恶性肿瘤患者外周血T细胞亚群的变化及自身细胞免疫功能的状态,为恶性肿瘤免疫治疗提供新的依据。

关键词 恶性肿瘤患者 细胞免疫功能 检测分析 医学高等专科学校 肿瘤免疫治疗 吉林市 自身免疫 复发与转移 淋巴细胞增殖试验 血T细胞

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