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小反刍兽疫病毒感染对山羊外周血单核细胞源外泌体分泌水平的影响 被引量:4
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作者 曾巍 万阳丽 +4 位作者 关照 王家龙 高楚茜 王晶钰 齐雪峰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1715-1720,1727,共7页
提取小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)疫苗毒N75-1株感染以及未感染对照山羊外周血单个核细胞(PBMCs)源外泌体,通过纳米颗粒示踪分析技术(NTA)测定提取外泌体粒径和分布范围,并通过Western blot技术和流式细胞术... 提取小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)疫苗毒N75-1株感染以及未感染对照山羊外周血单个核细胞(PBMCs)源外泌体,通过纳米颗粒示踪分析技术(NTA)测定提取外泌体粒径和分布范围,并通过Western blot技术和流式细胞术检测外泌体表面标志物CD63和CD81的表达水平;然后将PPRV感染PBMCs源外泌体与正常山羊PBMCs共培养,同时设定正常山羊PBMCs源外泌体共培养组以及PBMCs培养对照组,通过荧光定量PCR法和Western blot技术检测以上各组受体细胞中PPRV特异性受体淋巴信号活化分子(SLAM)表达水平变化。结果显示,PPRV感染及对照山羊PBMCs中外泌体粒径主要分布在100 nm,且感染组外泌体(Exo-PPRV)分泌水平较正常对照组(Exo-Mock)显著升高(P<0.05);Exo-PPRV共培养组SLAM mRNA和蛋白质表达水平较Exo-Mock组显著上调(P<0.05),Exo-Mock组与PBMCs培养对照组间SLAM mRNA和蛋白质表达水平差异不显著。结果表明,PPRV感染能够诱导山羊PBMCs中外泌体分泌水平升高且该外泌体对未感染PBMCs中PPRV受体SLAM的表达水平具有显著的正调控作用。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 山羊PBMCs 外泌体 淋巴细胞信号活化分子
原文传递
小反刍兽疫病毒疫苗毒株N75-1感染细胞源外泌体对山羊SLAM表达的影响 被引量:2
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作者 褚云馨 陈燕 +5 位作者 马雨晴 曾巍 陈松睿 赵治钤 王晶钰 齐雪峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期2500-2508,共9页
淋巴细胞信号活化分子(SLAM)是小反刍兽疫病毒(PPRV)在淋巴细胞的主要受体。本研究旨在探索PPRV感染细胞源外泌体对山羊SLAM表达的影响。通过荧光定量PCR法、流式细胞术和Western blot技术检测PPRV疫苗毒株N75-1感染山羊外周血单核细胞(... 淋巴细胞信号活化分子(SLAM)是小反刍兽疫病毒(PPRV)在淋巴细胞的主要受体。本研究旨在探索PPRV感染细胞源外泌体对山羊SLAM表达的影响。通过荧光定量PCR法、流式细胞术和Western blot技术检测PPRV疫苗毒株N75-1感染山羊外周血单核细胞(PBMCs)源外泌体(Exo-PPRV)共育对接纳细胞(正常山羊PBMCs)中SLAM表达水平和细胞因子分泌水平的影响。结果表明,与正常细胞分泌外泌体(Exo-Mock)共育组相比,Exo-PPRV共培养组细胞SLAM mRNA和细胞表面表达水平均显著上调(P<0.05),TNF-α、IL-10和IFN-γ表达水平升高,而IFN-α水平降低(P<0.05)。进一步研究表明,Exo-PPRV中荷载高水平的PPRV H蛋白且可以将其传递至接纳细胞中,同时pcDNA3.1-H转染组中SLAM表达水平较pcDNA3.1对照转染组和未转染组明显升高。以上结果表明,PPRV感染PBMCs源外泌体对接纳细胞中SLAM表达水平具有显著正调控作用,外泌体中载荷高水平PPRV H蛋白是其调控接纳细胞SLAM表达的关键分子之一。 展开更多
关键词 外泌体 小反刍兽疫病毒 山羊PBMCs 淋巴细胞信号活化分子
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Novel_miR218对山羊外周血单核细胞中SLAM受体表达的影响 被引量:1
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作者 宋华杰 王婷 +2 位作者 李珍 王晶钰 齐雪峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2435-2441,共7页
为研究山羊源novel_miR218对小反刍兽疫病毒(PPRV)在淋巴细胞的主要受体——淋巴细胞信号活化分子(SLAM)表达水平的调节作用,通过荧光定量PCR法和Western blot技术检测PPRV疫苗毒N75-1株接种山羊外周血单核细胞(PBMCs)中SLAM和novel_miR... 为研究山羊源novel_miR218对小反刍兽疫病毒(PPRV)在淋巴细胞的主要受体——淋巴细胞信号活化分子(SLAM)表达水平的调节作用,通过荧光定量PCR法和Western blot技术检测PPRV疫苗毒N75-1株接种山羊外周血单核细胞(PBMCs)中SLAM和novel_miR218表达变化以及病毒增殖水平,然后检测novel_miR218模拟物(novel_miR218mimic)和拮抗物(novel_miR218inhibitor)转染山羊PBMCs中SLAM表达水平变化及对PPRV增殖的影响。结果表明,山羊PBMC感染PPRV后24h(hpi)即可检测到细胞病变效应,特别在感染后48~72hpi尤为明显;与对照组相比,PPRV感染组中SLAM受体mRNA表达水平在24hpi极显著升高(P<0.01),随后逐渐降低,而novel_miR218表达水平在24hpi极显著降低(P<0.01),随后逐渐升高,对照组中novel_miR218和SLAM的mRNA表达水平在各检测时间点未发现显著变化;感染组中SLAM受体的蛋白表达规律与其mRNA表达相似,而PPRV-N蛋白的表达水平呈现不断增加的趋势;novel_miR218mimic转染组中SLAM和PPRV-N蛋白表达水平较对照组显著降低(P<0.05或P<0.01),且呈转染剂量依赖性,而novel_miR218inhibitor转染组中SLAM和PPRV-N蛋白表达水平较对照组显著升高(P<0.05或P<0.01),且呈转染剂量依赖性。结果表明,PPRV感染山羊PBMCs中novel_miR218和SLAM表达水平具有相关性,细胞转染检测结果提示novel_miR218对SLAM受体的表达水平具有负调控作用并影响PPRV在山羊PBMCs中的复制水平。 展开更多
关键词 novel_miR218 小反刍兽疫病毒 山羊PBMCs 淋巴细胞信号活化分子
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