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病毒介导的海洋球石藻(Coccolithophores)鞘脂类代谢调控 被引量：1
1
作者 马亚瑞 刘旭宏 +2 位作者 蔡艺钦 李健 刘静雯 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1555-1564,共10页
海洋球石藻(Coccolithophores)是一种全球广泛分布且具有重要生态功能的真核浮游植物,有些种类是大洋和近岸常见的赤潮种。自然海域中,病毒感染是导致球石藻死亡和赤潮消亡的一个关键因素。基于一株海洋球石藻Emiliania huxleyi及其特... 海洋球石藻(Coccolithophores)是一种全球广泛分布且具有重要生态功能的真核浮游植物,有些种类是大洋和近岸常见的赤潮种。自然海域中,病毒感染是导致球石藻死亡和赤潮消亡的一个关键因素。基于一株海洋球石藻Emiliania huxleyi及其特异性裂解病毒全基因组测序注释的结果,研究者们发现病毒可能通过基因横向转移从宿主基因组中获取了一系列与鞘脂类代谢相关的关键酶基因,进而在一定程度上掌控了宿主鞘脂类代谢,大量合成、积累病毒性鞘脂类物质,并最终诱导宿主细胞以凋亡的形式死亡。因此,病毒介导的宿主鞘脂类代谢在调节病毒与宿主间相互作用中具有重要意义。本文着重综述海洋球石藻病毒与宿主间的基因横向转移、病毒介导的宿主鞘脂类代谢特点及其生态学意义,以期深入了解海洋球石藻病毒与宿主间复杂的相互作用关系。 展开更多
关键词 海洋球石藻 海洋球石藻病毒 基因横向转移 鞘脂类代谢 生态学意义
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一种新的海洋微藻病毒丝氨酸蛋白酶基因的克隆表达及其活性分析 被引量：1
2
作者 李丽华 邱健健 +2 位作者 蔡艺钦 于鹏 刘静雯 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期101-110,共10页
从海洋球石藻 Emiliania huxleyi 病毒 EhV99B1的基因组中克隆了丝氨酸蛋白酶（Sp）基因（GenBank 登录号：KC161207），对该基因的开放阅读框（ORF）进行系统的生物信息学分析，并在大肠杆菌中融合表达，通过亲和层析法获得了纯化的重... 从海洋球石藻 Emiliania huxleyi 病毒 EhV99B1的基因组中克隆了丝氨酸蛋白酶（Sp）基因（GenBank 登录号：KC161207），对该基因的开放阅读框（ORF）进行系统的生物信息学分析，并在大肠杆菌中融合表达，通过亲和层析法获得了纯化的重组 Sp。结果表明：EhV99B1-Sp 基因的 ORF 为1110 bp，编码368个氨基酸，蛋白相对分子质量为39．5 kDa；该基因片段与 GenBank 中 EhV86-Sp 的同源性很高，核苷酸及其对应的氨基酸序列同源性分别为95％和97％，而与其他物种 Sp 序列的同源性仅为28％～32％，说明其可能是丝氨酸蛋白酶家族中的一个新成员；预测的二级结构特征显示EhV99B1-Sp 的蛋白结构域中具有典型的 LTAGHC （组氨酸活性位点区域）和 AICNGDSGGPLF（丝氨酸活性位点区域）两个丝氨酸蛋白酶催化活性位点的氨基酸基序，是一个两次跨膜蛋白；将该基因在大肠杆菌中进行低温诱导表达，得到分子量为60 kDa 的重组蛋白，经鲤鱼肌肉丝氨酸蛋白酶（MB-SP）抗体检测证实为 Sp，且重组蛋白在大肠杆菌细胞中具有明显的生物学活性。本研究结果为进一步探讨 EhV99B1-Sp 在病毒与宿主相互作用过程中的调节作用及其功能与应用奠定基础。 展开更多
关键词 海洋球石藻病毒 丝氨酸蛋白酶 基因克隆 重组表达 活性分析
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海洋球石藻病毒甾醇去饱和酶基因的克隆与表达 被引量：1
3
作者 王彩凤 刘静雯 《集美大学学报（自然科学版）》 CAS 2019年第5期335-342,共8页
以海洋球石藻(Emiliania huxleyi)病毒EhV-99B1基因组为模板,用一对病毒甾醇去饱和酶(sterol desaturase,SD)基因的特异性引物进行PCR扩增,获得EhV-SD基因,将扩增产物克隆至pMD19-T载体后进行测序,并对该基因编码的蛋白质序列进行生物... 以海洋球石藻(Emiliania huxleyi)病毒EhV-99B1基因组为模板,用一对病毒甾醇去饱和酶(sterol desaturase,SD)基因的特异性引物进行PCR扩增,获得EhV-SD基因,将扩增产物克隆至pMD19-T载体后进行测序,并对该基因编码的蛋白质序列进行生物信息学分析。将测序正确的目的基因亚克隆入酿酒酵母表达载体pYES2/CT中,转化酿酒酵母缺陷型菌株YMR015C,并用 D-半乳糖诱导表达,提取重组酵母和野生型酵母细胞总脂并进行薄层色谱(thin layer chromatography,TLC)分析。结果显示:EhV-SD基因全长为987 bp,编码328个氨基酸,该蛋白质的理论等电点为8.31,预测的蛋白质分子质量为37.83 ku,为疏水性、不稳定蛋白质,存在6个跨膜结构域,不存在信号肽;其二级结构中,α-螺旋含量最多。氨基酸序列比对结果显示,EhV-SD基因与宿主球石藻及金色藻属( Chrysochromulina sp.CCMP 291)亲缘关系较近。TLC结果表明,EhV-SD基因的表达导致酵母细胞极性较强的脂类明显减少,而极性较弱的脂质成分显著增加,表明EhV-SD具有一定的催化活性。 展开更多
关键词 海洋球石藻病毒 甾醇去饱和酶基因 酿酒酵母 克隆 表达 脂类 薄层色谱
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海洋球石藻(Emiliania huxleyi)病毒硫氧还蛋白(TRX)基因的克隆及生物信息学分析 被引量：5
4
作者 张彦锋 刘静雯 +1 位作者 张稚兰 董双林 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期293-300,共8页
首次从海洋球石藻病毒(Emiliania huxleyi virus-EhV99B1)中克隆了硫氧还蛋白(Trx)基因(该序列已提交GenBank,登录号:GU109280)。系统进化关系分析表明:EhV99B1-Trx与GenBank中已报道的EhV86-Trx(NC_007346)有很高的同源性,核酸及其推... 首次从海洋球石藻病毒(Emiliania huxleyi virus-EhV99B1)中克隆了硫氧还蛋白(Trx)基因(该序列已提交GenBank,登录号:GU109280)。系统进化关系分析表明:EhV99B1-Trx与GenBank中已报道的EhV86-Trx(NC_007346)有很高的同源性,核酸及其推导的氨基酸序列的同源性分别为98%和100%,而与其它物种的Trx序列同源性仅为9.8%-18.8%。采用生物信息学方法和工具分析了EhV99B1-Trx的生化参数,预测了该蛋白的高级结构。结果表明:(1)EhV99B1-Trx基因的开放阅读框全长591bp,编码196个氨基酸,蛋白的相对分子量为22.1kDa,理论等电点为5.27;(2)EhV-99B1-Trx N端蛋白结构域具有保守的Cys-Gly-Pro-Cys(CGPC)硫氧还蛋白氧化还原活性位点氨基酸基序;(3)对该蛋白二、三级结构分析预测结果进一步证实EhV99B1-Trx基因编码的为一种新型的硫氧还蛋白家族成员。 展开更多
关键词 海洋球石藻病毒(EhV) 硫氧还蛋白(Trx) 基因克隆及生物信息学分析
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海洋球石藻Emiliania huxleyi(Prymnesiophyceae)病毒主要外壳蛋白基因的克隆与序列分析 被引量：4
5
作者 张稚兰 刘静雯 +2 位作者 董双林 苏国成 张彦锋 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期152-158,共7页
在实验室纯培养条件下,用过滤的海洋球石藻特异性病毒(Emiliania huxleyi virus,EhV)EhV-99B1株感染球石藻(E. huxleyi,Eh),建立病毒与宿主之间稳定的感染体系,病毒裂解滤液经卷式切向流超滤和PEG8000浓缩、CsCl密度梯度离心,获得足量... 在实验室纯培养条件下,用过滤的海洋球石藻特异性病毒(Emiliania huxleyi virus,EhV)EhV-99B1株感染球石藻(E. huxleyi,Eh),建立病毒与宿主之间稳定的感染体系,病毒裂解滤液经卷式切向流超滤和PEG8000浓缩、CsCl密度梯度离心,获得足量高纯度的病毒颗粒。根据已报道的其它EhV株系主要外壳蛋白(MCP)基因内保守片段设计合成一对特异引物,从EhV-99B1病毒基因组中克隆到了长度约为300bp的病毒外壳蛋白基因保守片段。该片段与pBS-T载体连接后转化Escherichia coli DH5α,对筛选到的阳性克隆进行序列测定与分析。结果表明,该克隆片段与GenBank中EhV163(AF453851)分离株的同源性最高,该区域内的核苷酸与对应推导的氨基酸序列同源性均为100%,证实获得的DNA片段是EhV-99B1的外壳蛋白基因;与EhV203(AF453855)分离株的核苷酸及氨基酸序列的同源性较低,分别为93%和100%。表明该病毒在自然海域中分布广泛并具有一定的多态性,同时在进化上也存在相当的复杂性。因此,MCP基因可以作为一种新的分子遗传标记以区分自然群落中EhV的不同基因型,对于理解海洋球石藻类病毒与宿主之间复杂的相互作用关系将是一个十分有价值的工具。 展开更多
关键词 海洋球石藻病毒(EhV) 病毒主要外壳蛋白(MCP) 基因克隆与序列分析
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海洋球石藻病毒(Coccolithovirus)硫氧还蛋白(Trx)在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达及其活性分析 被引量：1
6
作者 蔡艺钦 张稚兰 +1 位作者 罗邦彬 刘静雯 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期905-910,共6页
从实验室保存的pBS-Trx重组质粒中克隆球石藻病毒EhV-Trx基因,构建毕赤酵母重组表达载体pPIC9K-EhV-Trx,将重组质粒电转化毕赤酵母GS115,诱导分泌表达并对重组蛋白进行二硫键还原酶活性分析。结果表明,EhV-Trx基因开放阅读框为591bp,编... 从实验室保存的pBS-Trx重组质粒中克隆球石藻病毒EhV-Trx基因,构建毕赤酵母重组表达载体pPIC9K-EhV-Trx,将重组质粒电转化毕赤酵母GS115,诱导分泌表达并对重组蛋白进行二硫键还原酶活性分析。结果表明,EhV-Trx基因开放阅读框为591bp,编码197个氨基酸;在毕赤酵母GS115中成功诱导表达重组EhV-Trx,经SDS-PAGE分析目的蛋白分子量约为27.8kDa;重组EhV-Trx具有二硫键还原酶的活性,能有效打开胰岛素A、B两条链的二硫键,有望开发成一种新型的硫氧还蛋白脱敏制剂应用于食品安全领域。 展开更多
关键词 海洋球石藻病毒(EhV) 硫氧还蛋白 毕赤酵母 分泌表达 活性分析
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