基于谱效关系及活性验证的百合地黄汤抗抑郁成分研究 被引量：2

1

作者 胡超 赵洪庆 +4 位作者 刘检 王璐 杨磊 张水寒 唐林 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1364-1373,共10页

本研究通过谱效相关分析及活性验证探明百合地黄汤抗抑郁的药效成分。利用不同溶剂分次提取并结合HPLC和UHPLC-MS分析方法对百合地黄汤不同提取部位化学成分进行全面表征。动物实验方案经湖南中医药大学动物伦理委员会审查通过(审查号为... 本研究通过谱效相关分析及活性验证探明百合地黄汤抗抑郁的药效成分。利用不同溶剂分次提取并结合HPLC和UHPLC-MS分析方法对百合地黄汤不同提取部位化学成分进行全面表征。动物实验方案经湖南中医药大学动物伦理委员会审查通过(审查号为LLBH-202104270001),所有程序均严格按照动物使用和护理的伦理原则进行。采用旷场实验、悬尾实验、强迫游泳实验等经典行为学方法结合神经递质测定进行抗抑郁药效综合评价。整合三种相关分析方法进行谱效关联表征,以三种关联分析所得药效成分的交集为潜在药效成分,并进行了体外细胞实验验证。研究发现,王百合苷A、B、C、梓醇和异毛蕊花糖苷可能是百合地黄汤发挥抗抑郁作用的主要药效物质,同时也提示,多元化的谱效相关分析及活性验证有助于提升谱效相关分析结果的准确性。 展开更多

关键词 百合地黄汤 抑郁症 谱效关系 活性验证 熵权-TOPSIS法 HPLC指纹图谱 多指标药效评价

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快速构建CRISPR/Cas9基因组靶向编辑系统 被引量：7

2

作者 王令 张涛 +1 位作者 路宏朝 尹亚军 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1117-1124,共8页

CRISPR/Cas9核酸酶作为一种新的基因组靶向编辑技术,已成功应用于多种动植物基因组修饰研究.CRISPR/Cas9作用后的阳性细胞筛选和富集是该技术的关键之一.本研究以鸡EAVHP(endogenous avian retrovirus-HP)基因和MSTN(myostatin)基因为例... CRISPR/Cas9核酸酶作为一种新的基因组靶向编辑技术,已成功应用于多种动植物基因组修饰研究.CRISPR/Cas9作用后的阳性细胞筛选和富集是该技术的关键之一.本研究以鸡EAVHP(endogenous avian retrovirus-HP)基因和MSTN(myostatin)基因为例,从靶位点的选择、表达载体构建、双基因报告载体构建和核酸酶活性验证4个方面,系统研究了CRISPR/Cas9核酸酶技术平台.结果表明,利用寡聚核苷酸直接退火方法,构建表达载体和报告载体的阳性率分别高达100%和89.5%.报告载体的PuroR(puromycin resistant gene)和e GFP(enhanced green fluorescent protein)基因的成功表达表明,构建的CRISPR/Cas9系统能有效切割靶序列,并用于后续阳性克隆的筛选和富集.本方法摒弃了传统分子克隆的PCR扩增和酶切处理目标基因的方法,而是利用寡聚核苷酸直接退火获得含有黏性末端的目标DNA,简化了载体构建过程,低成本且快速获得CRISPR/Cas9基因组靶向编辑系统. 展开更多

关键词 CRISPR/Cas9核酸酶 基因组靶向编辑 报告载体 活性验证

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基于网络药理学和分子对接研究青果-槐花药对抗幽门螺杆菌感染的活性成分和作用机制 被引量：5

3

作者 严家慧 申雪 +7 位作者 彭昶 张唯佳 陈鹏婷 江琤 张燕玲 甘国兴 朱卫星 姚美村 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期429-436,共8页

目的基于网络药理学和分子对接的方法研究青果-槐花药对抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染可能的活性成分和作用机制。方法利用TCMSP数据库及文献检索获取青果、槐花的活性成分,TCMSP、BATMAN-TCM、SwissTargetPrediction数据... 目的基于网络药理学和分子对接的方法研究青果-槐花药对抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染可能的活性成分和作用机制。方法利用TCMSP数据库及文献检索获取青果、槐花的活性成分,TCMSP、BATMAN-TCM、SwissTargetPrediction数据库获取成分靶标。通过Genecards、Drugbank和DisGeNET数据库收集与Hp感染相关的靶标,并与成分靶标相比较,筛选出潜在靶标。利用STRING数据库获取潜在靶标之间的相互关系,筛选出核心靶标。在DAVID数据库中进行潜在靶标的GO分类富集分析和KEGG通路富集分析。通过Autodock进行核心靶标与活性成分的分子对接。最后用体外抗菌试验验证青果-槐花的抗菌活性。结果共收集到青果-槐花药对的20个主要活性成分,通过调节154个潜在靶标参与疾病过程,涉及TNF、FoxO、Toll样受体等通路的作用。活性成分中槲皮素、染料木素、山柰酚、鞣花酸与核心靶标具有良好的结合能力,可能通过作用于TP53、AKT1、IL6等靶标,干扰Hp的侵入和定植。青果-槐花药对抗Hp活性强于单药,其最小抑菌浓度为1.25 mg·mL;。结论本研究探索了青果-槐花药对抗Hp感染可能的活性成分、靶标和通路,其作用机制复杂多样,符合中医药治疗疾病的多成分、多靶点、多途径的作用特点,为青果-槐花药对治疗Hp感染提供了理论依据。 展开更多

关键词 青果 槐花 幽门螺杆菌 网络药理学 分子对接 活性验证

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高效切割Hipp11敲入位点的sgRNA设计及活性验证 被引量：5

4

作者 吴曦 周舒雅 +5 位作者 刘甦苏 谷文达 左琴 李保文 贺争鸣 范昌发 《实验动物科学》 2015年第5期26-30,共5页

目的设计并验证能够高效切割Hipp11位点的sgRNA,为在Hipp11位点定点敲入外源基因提供工作基础。方法使用预测软件对Hipp11位点的sgRNA进行预测并挑选脱靶效应较低的两个sgRNA。构建相应载体,通过CRISPR/Cas9活性检测试剂盒在体外检测sg... 目的设计并验证能够高效切割Hipp11位点的sgRNA,为在Hipp11位点定点敲入外源基因提供工作基础。方法使用预测软件对Hipp11位点的sgRNA进行预测并挑选脱靶效应较低的两个sgRNA。构建相应载体,通过CRISPR/Cas9活性检测试剂盒在体外检测sgRNA的活性。选取活性较高的sgRNA体外转录,与Cas9 m RNA一并注射受精卵。检测出生后小鼠Hipp11位点切割效率,计算出sgRNA的体内活性。结果两个sgRNA的体外活性分别为19.2%和51.7%,使用体外活性高的2号sgRNA显微注射获得8只新生小鼠,其中62.5%(5/8)的小鼠中检测到Hipp11位点周围发生碱基插入或缺失。结论获得一个能够引导高效切割的Hipp11位点通用型sgRNA,从而为基因CRISPR技术在Hipp11位点定点插入外源基因奠定基础。sgRNA体外活性能够预测sgRNA在体内的切割活性,表明体外活性验证是筛选高活性sgRNA的有效手段。 展开更多

关键词 基因定点插入 Hipp11位点 CRISPR/Cas9 sgRNA 活性验证

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应用于基因编辑的核糖核蛋白复合体的构建与活性验证 被引量：2

5

作者 高伟欣 黄火清 +3 位作者 赵晶 张鑫 杨宁 杨浩萌 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期60-68,共9页

CRISPR/Cas9基因编辑技术具有操作简单、成本低廉和编辑效率高等优点,已经被广泛应用于动物、植物、微生物的基因编辑研究。在该技术体系中,发挥核酸剪切功能的是Cas9蛋白和guideRNA(gRNA)组装而成的核糖核蛋白复合体,即RNP(ribonucleop... CRISPR/Cas9基因编辑技术具有操作简单、成本低廉和编辑效率高等优点,已经被广泛应用于动物、植物、微生物的基因编辑研究。在该技术体系中,发挥核酸剪切功能的是Cas9蛋白和guideRNA(gRNA)组装而成的核糖核蛋白复合体,即RNP(ribonucleoprotein)复合体。目前,应用体外组装的RNP复合体直接递送进入受体细胞进行基因编辑的研究越来越多,成为提高编辑效率、降低脱靶率的有效手段。本研究以获得具有高效剪切活性的RNP复合体为试验目的,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了Cas9蛋白,并通过His-tag亲和树脂对重组Cas9蛋白进行了纯化;同时,通过T7转录试剂盒对gRNA进行体外转录和纯化,使纯化的Cas9蛋白和gRNA自发组装成RNP复合体,经体外活性检测,RNP复合体具有很好的DNA双链剪切活性;将其与donor DNA共同转化到黑曲霉菌株,成功敲除了目标蛋白,编辑效率达到90%以上。本研究获得的RNP复合体,可以应用于丝状真菌的基因编辑,节约了试验时间与成本,并推动RNP介导的基因编辑技术在更多领域的应用。 展开更多

关键词 Cas9蛋白 RNP复合体 大肠杆菌 活性验证

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葡激酶聚乙二醇修饰及活性鉴定研究 被引量：2

6

作者 白垒 徐彦颖 +1 位作者 汪德强 周建中 《重庆医科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第7期893-897,共5页

目的:通过对葡激酶(staphylokinase,SAK)基因序列进行定点突变,表达突变蛋白,并对其进行聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)修饰。通过分子筛分离得到较高纯度修饰蛋白,在体内外鉴定其溶栓活性。方法:根据SAK晶体结构及抗原位点选择突... 目的:通过对葡激酶(staphylokinase,SAK)基因序列进行定点突变,表达突变蛋白,并对其进行聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)修饰。通过分子筛分离得到较高纯度修饰蛋白,在体内外鉴定其溶栓活性。方法:根据SAK晶体结构及抗原位点选择突变位点,构建突变质粒,并在大肠杆菌中表达半胱氨酸(cysteine,Cys)突变蛋白S-cys;分离纯化目的蛋白;对目的蛋白在不同条件下进行聚乙二醇修饰,筛选最优修饰条件;分离修饰蛋白与未修饰蛋白,得到较高纯度的修饰蛋白peg-S-cys,通过纤维蛋白平板溶圈实验和动物栓塞模型的构建初步对其生物活性进行验证。结果:原核表达、纯化后得到纯度较高的S-cys突变体蛋白;优化筛选S-cys蛋白的PEG修饰实验参数,得到最佳修饰条件;应用分子筛分离纯化,成功获得纯度较高的peg-S-cys蛋白(纯度大于90%);初步验证peg-S-cys具有溶栓活性。结论:通过对蛋白质基因序列的定点突变,成功实现了蛋白质的聚乙二醇定点修饰,在体外和体内初步验证其活性,为蛋白质改造提供了一种新的方法与思路。 展开更多

关键词 蛋白质改造 聚乙二醇修饰 定点突变 活性验证

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新型冠状病毒木瓜样蛋白酶抑制剂的虚拟筛选与活性验证

7

作者 汪益妃 乔婧昕 +1 位作者 黎文培 李琳丽 《华西药学杂志》 CAS CSCD 2022年第1期1-5,共5页

目的通过分子对接的虚拟筛选和体外酶活性测试,获得具有新型骨架结构的新型冠状病毒木瓜样蛋白酶(PL^(pro))抑制剂。方法利用分子对接筛选商业化合物库与自有化合物库,根据打分排序以及相互作用模式分析,挑选苗头化合物,通过荧光共振能... 目的通过分子对接的虚拟筛选和体外酶活性测试,获得具有新型骨架结构的新型冠状病毒木瓜样蛋白酶(PL^(pro))抑制剂。方法利用分子对接筛选商业化合物库与自有化合物库,根据打分排序以及相互作用模式分析,挑选苗头化合物,通过荧光共振能量转移法测定化合物对PL^(pro)酶活性的抑制效力。结果从分子对接后的打分排序以及相互作用模式分析中,挑选了20个分子。通过FRET方法测试酶活性,发现了2个化合物(Y949、C528)对新型冠状病毒PL^(pro)具有抑制活性,其半数最大抑制浓度分别为97.7、145.0μmol·L^(-1)。结论通过虚拟筛选和体外酶活性测试,获得了两个具有新骨架结构的PL^(pro)抑制剂,为靶向PL^(pro)抗新型冠状病毒创新药物的研发提供了苗头化合物。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 非结构蛋白 木瓜样蛋白酶 虚拟筛选 分子对接 活性验证 小分子抑制剂 新型骨架

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美洲大蠊内生菌几丁质酶基因的克隆、表达及其活性研究 被引量：1

8

作者 许敏华 张晶晶 +3 位作者 金小宝 李小波 王艳 马艳 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期31-37,共7页

目的:对美洲大蠊内生黏质沙雷氏菌几丁质酶ChiA基因进行克隆、可溶性表达及功能验证。方法:PCR扩增ChiA基因,TA亚克隆,构建重组表达载体ChiA/p ET21b,生物信息学分析和低温诱导表达、SDS-PAGE、Western blot鉴定,打孔法对几丁质酶活性... 目的:对美洲大蠊内生黏质沙雷氏菌几丁质酶ChiA基因进行克隆、可溶性表达及功能验证。方法:PCR扩增ChiA基因,TA亚克隆,构建重组表达载体ChiA/p ET21b,生物信息学分析和低温诱导表达、SDS-PAGE、Western blot鉴定,打孔法对几丁质酶活性检测。结果:PCR成功扩增了ChiA基因序列,该序列与GenBank上的S. marcescens ChiA基因序列同源性达99%;该序列编码571个氨基酸,并能够在原核系统中稳定表达。可溶性表达分析显示:通过低温诱导表达,获得可溶性的目的蛋白;活性试验发现:含目的蛋白的表达产物可分解几丁质,且活性强于美洲大蠊内生黏质沙雷氏菌。结论:从美洲大蠊内生黏质沙雷氏菌基因组中成功克隆了几丁质酶ChiA基因,通过原核表达系统获得了具有较强活性的可溶性几丁质酶ChiA,为其应用奠定了基础。 展开更多

关键词 美洲大蠊 黏质沙雷氏菌 几丁质酶ChiA 可溶性表达 活性验证

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转运体稳定表达的验证方法及其研究进展

9

作者 沈琦 胡海红 曾苏 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 2012年第7期603-609,共7页

目的介绍验证转运体稳定表达的方法和技术,为转运体细胞模型的应用提供依据。方法对近年来研究转运体在细胞模型中稳定表达的相关文献进行综述。结果实时定量PCR及Western blot是分别验证转运体转录水平和蛋白表达的经典方法。结论与荧... 目的介绍验证转运体稳定表达的方法和技术,为转运体细胞模型的应用提供依据。方法对近年来研究转运体在细胞模型中稳定表达的相关文献进行综述。结果实时定量PCR及Western blot是分别验证转运体转录水平和蛋白表达的经典方法。结论与荧光检测技术相结合的验证方法在转录水平、蛋白表达与功能活性等三方面都显示出广阔的应用前景。 展开更多

关键词 转运体 转录水平 蛋白表达 活性验证

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基于网络药理学和分子对接技术探讨黄芪-紫苏子配伍治疗慢性阻塞性肺疾病的作用机制 被引量：17

10

作者 韩晓晓 赵迪 +2 位作者 刘学芳 董浩然 冯素香 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 北大核心 2021年第9期3147-3159,共13页

目的采用网络药理学和分子对接技术研究黄芪-紫苏子配伍治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)的主要化学成分、可能的作用靶点以及相关信号通路,探讨其多成分-多靶点-多通路的潜在作用机制。方法通过TCMSP数据库检索黄芪-紫苏子的化学成分;运用Pu... 目的采用网络药理学和分子对接技术研究黄芪-紫苏子配伍治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)的主要化学成分、可能的作用靶点以及相关信号通路,探讨其多成分-多靶点-多通路的潜在作用机制。方法通过TCMSP数据库检索黄芪-紫苏子的化学成分;运用PubChem数据库和Swiss Target Prediction数据库筛选其潜在靶点;借助GeneCards数据库检索COPD相关靶点,与黄芪-紫苏子化合物靶点进行交集筛选出共同靶点作为研究靶点;使用Cytoscape3.2.1软件构建"中药-化学成分-靶点-疾病"网络;将上述共同靶点导入String数据库获取数据后在Cytoscape3.2.1软件中构建蛋白质-蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction,PPI),然后进行核心靶点筛选;利用Metascape数据库进行GO和KEGG通路富集分析;使用RCSB PDB数据库、Pymol和Autodock Vina软件进行分子对接;采用A549细胞进行体外活性实验评价槲皮素和异鼠李素的抗炎作用,验证网络药理学及分子对接结果的科学准确性。结果黄芪-紫苏子的"中药-化学成分-靶点-疾病"网络包含34个化学成分和74个治疗COPD的潜在靶点,其核心化学成分主要为黄酮类化合物;另PPI网络中核心靶点主要涉及ALB、TP53、AKT1等;GO功能富集得到GOBP条目1841条,GOCC条目109条,GOMF条目105条;KEGG通路富集筛选得到130条信号通路,其中靶点在AGE-RAGE信号通路、PI3K-AKT信号通路和HIF-1信号通路等富集较为集中。分子对接结果显示,黄芪和紫苏子的核心化合物中的黄芪异黄烷苷、木犀草素、槲皮素以及异鼠李素等黄酮类成分对ALB具有较高亲和力。体外活性验证中槲皮素和异鼠李素具有显著的抗炎活性。结论黄芪-紫苏子配伍可通过多成分、多靶点和多通路调控炎症因子释放,达到治疗COPD的效果,为其分子机制研究奠定一定的基础。 展开更多

关键词 黄芪-紫苏子 慢性阻塞性肺疾病 网络药理学 分子对接 抗炎活性验证 作用机制

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抗微生物食品包装

11

作者 莫文敏 《食品与机械》 CSCD 2001年第6期36-38,共3页

关键词 食品包装材料 抗微生物食品 包装体系 设计 抗微生物活性验证

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生物活性检测方法验证统计分析软件的设计和功能 被引量：3

12

作者 韩璐 隋思涟 +4 位作者 谭德讲 段丽 李娜 杜颖 施瑞红 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期979-987,共9页

生物活性检测方法验证(biological method validation, BMV)统计分析软件是一款具有全部自主产权的专用统计分析软件。其优势在于:(1)提供常见的方法验证性能参数,如精密度及其置信上限、准确度及其相应的置信区间、范围等;(2)提供满足... 生物活性检测方法验证(biological method validation, BMV)统计分析软件是一款具有全部自主产权的专用统计分析软件。其优势在于:(1)提供常见的方法验证性能参数,如精密度及其置信上限、准确度及其相应的置信区间、范围等;(2)提供满足方法需求的判定标准,如分析总误差、报告值的预测区间、容忍区间、方法能力指数(MCI)等;(3)新增方法应用指标,包括操作模式变异度、报告值的区分阈值、能力验证标准差、方法关键影响因素分析等;(4)为使用者提供自主选择生物实验系统适用性模型,并可计算验证实验所需样本量。此软件不仅操作简便,而且输出结果科学可靠,可满足各国药典或指南对方法验证的要求。该软件的开发,将方便于药品行业研发人员建立科学可靠的生物活性检测方法,以确保药品的质量安全。 展开更多

关键词 生物活性检测方法验证(BMV) 统计分析软件 方法性能参数 分析总误差 报告值的预测区间 报告值的容忍区间 方法能力指数 操作模式变异度 报告值的区分阈值 能力验证标准差 方法关键影响因素分析 样本量

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防风通圣丸通里生物活性检定方法的建立

13

作者 张蕻 李松梅 李洋 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第B11期146-146,共1页

目的建立防风通圣丸通里生物活性的检定方法.方法分别采用小鼠肠推进及小鼠湿粪计数法对防风通圣丸通里生物活性的检定方法进行筛选,并进行方法学验证.结果选用小鼠湿粪计数法,观察小鼠4h的排便粒数,试验剂量4g生药/kg体重可有效控制防... 目的建立防风通圣丸通里生物活性的检定方法.方法分别采用小鼠肠推进及小鼠湿粪计数法对防风通圣丸通里生物活性的检定方法进行筛选,并进行方法学验证.结果选用小鼠湿粪计数法,观察小鼠4h的排便粒数,试验剂量4g生药/kg体重可有效控制防风通圣丸通里生物活性,经方法学验证该方法切实可行.结论该方法可用于防风通圣丸质量控制. 展开更多

关键词 防风通圣丸 通里 生物活性方法学验证 生物检定 质量控制

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