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用改进的细胞核移植方法构建重构胚 被引量：4
1
作者 吴克良 时永香 +4 位作者 白增亮 田海滨 张楠 刘兰兰 刘昌彬 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期161-165,共5页
为了能够找出一种既容易操作,又不需要特殊设备的核移植方法,对以前的操作进行了改进。首先以预先吸有细胞核或细胞的注射针在固定于持卵针上的卵母细胞透明带上穿刺两个孔,然后一边缓慢地将注射针回拔至卵周隙中,一边逐渐增加持卵针中... 为了能够找出一种既容易操作,又不需要特殊设备的核移植方法,对以前的操作进行了改进。首先以预先吸有细胞核或细胞的注射针在固定于持卵针上的卵母细胞透明带上穿刺两个孔,然后一边缓慢地将注射针回拔至卵周隙中,一边逐渐增加持卵针中的负压,直至极体与目标核质被完整吸入持卵针中而完成去核,最后在不拔出注射针的情况下直接注射细胞核或完整细胞进而完成重构胚的构建。用此方法对200个卵母细胞进行注核和注细胞操作,平均完成一个重构胚的构建各自耗时约40s和30s,成功率分别为62·6%和86·0%。用核染料Hoechst33342对卵母细胞的去核效率进行验证,去核成功率达到73·3%。实验证明,用此方法可以在只有倒置显微镜和显微操作仪的条件下一次性快速完成去核和注核,大大提高了细胞核移植的效率和重构胚成活率;更重要的是该方法操作简单,新手可以很快掌握该技术,易于在实际工作中推广应用。 展开更多
关键词 细胞核移植 重构胚 去核 注核
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小鼠体细胞植入卵胞质体技术方案的选择
2
作者 李雁 冯云 +3 位作者 张爱军 孙贻娟 陆小溦 余海琴 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期166-172,共7页
目的:探讨几种不同的小鼠核移植方案的优劣及造成此差异的原因和解决途径。方法:①取8-10周龄昆明鼠成熟卵胞质体作为受体,颗粒细胞作为核供体,比较含糖及不含糖操作液对去核过程的影响;②透明带打孔法、透明带膨胀法和挤压法去核,对卵... 目的:探讨几种不同的小鼠核移植方案的优劣及造成此差异的原因和解决途径。方法:①取8-10周龄昆明鼠成熟卵胞质体作为受体,颗粒细胞作为核供体,比较含糖及不含糖操作液对去核过程的影响;②透明带打孔法、透明带膨胀法和挤压法去核,对卵胞质体质量的影响;③比较直接注核和电融合得到的重构卵激活后出现类原核的数目及克隆胚胎发育的情况。结果:在2种操作液中的去核效率并无差异,但操作≥10min时在含糖操作液中的去核死亡率高于不含糖操作液组(P<0.05);在3种去核方法中,透明带打孔法的单个卵子平均去核所需时间较其他2种方法长(P<0.05),挤压法的单个卵子平均去除胞质比例较其他2种方法高(P<0.05);在注核方法中,使用直接注核法较电融合法导致注核后重构胚的死亡率高(P<0.05),激活后出现2个及以上类原核的比例高(P<0.05),但克隆胚胎发育情况优于电融合组(P<0.05)。结论:使用含糖操作液显核清晰,但应尽量缩短操作时间;透明带膨胀法是3种方法中对卵子胞质影响最小的方法;直接注核较电融合法对卵子的激活作用小,克隆胚胎发育更好。 展开更多
关键词 核移植 去核 注核 电融合 小鼠
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注核方法对大鼠-小鼠种间体细胞核移植重组胚发育的影响 被引量：1
3
作者 朱德生 谢松涛 +3 位作者 杨贵忠 李华 冯秀亮 刘水冰 《陕西医学杂志》 CAS 北大核心 2004年第4期294-296,325,F004,共5页
目的 :探讨胞质内直接注核法和电融合法对大鼠 -小鼠种间体细胞核移植重组胚发育的影响。方法 :采用血清饥饿法同步化处理的 SD大鼠成纤维细胞作为供体细胞 ,常规超排 KM小鼠获得卵母细胞 ,采用盲吸法去核 ,分别采用直接注核法和电融合... 目的 :探讨胞质内直接注核法和电融合法对大鼠 -小鼠种间体细胞核移植重组胚发育的影响。方法 :采用血清饥饿法同步化处理的 SD大鼠成纤维细胞作为供体细胞 ,常规超排 KM小鼠获得卵母细胞 ,采用盲吸法去核 ,分别采用直接注核法和电融合法构建重组胚胎 ,6- DMAP+ CCB+乙醇激活重组胚 ,CZB培养液中培养。结果 :电场强度 ( V/cm)和脉冲 ( ms)为 :1 5 0 0 /30 ;1 5 0 0 /40 ;1 80 0 /30 ;1 80 0 /40时 ,融合率为 :81 .5 % ;83.3% ;77.6% ;82 .0 %。直接注核法和电融合法构建重组胚的卵裂率分别为 33.1 %和 2 8.9% ,桑椹胚发育率为 1 7.8%和 1 5 .5 %。结论 :电场强度为 1 5 0 0～ 1 80 0 V/cm,脉冲为 30 ms或 40 ms时 ,都能获得较高的融合率 ;直接注核法构建的核移植重组胚胎的卵裂率要比电融合法略高 。 展开更多
关键词 注核方法 大鼠 小鼠 细胞核 移植 胚胎学 卵母细胞
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水牛体细胞核移植方法比较及激活前的时间间隔对全细胞胞质内注射法核移植效果的影响 被引量：1
4
作者 杨素芳 陈自洪 +2 位作者 韦精卫 陆凤花 石德顺 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1735-1740,共6页
本研究旨在比较水牛2种体细胞核移植（Somatic Cell Nuclear Transfer,SCNT）方法的效果以及激活前的时间间隔对全细胞胞质内注射法（Whole-Cell Intracytoplasmic Microinjection,WCICSI）核移植效果的影响。采用水牛胎儿成纤维细胞作... 本研究旨在比较水牛2种体细胞核移植（Somatic Cell Nuclear Transfer,SCNT）方法的效果以及激活前的时间间隔对全细胞胞质内注射法（Whole-Cell Intracytoplasmic Microinjection,WCICSI）核移植效果的影响。采用水牛胎儿成纤维细胞作为供核,比较了透明带下注核法（Perivitelline Microinjection,PM）和WCICSI核移植效果。另外,试验了不同类型的供体细胞进行全细胞胞质内注射后与激活前的受体胞质的最适宜作用时间。结果,WCICSI构建核移植重构胚的成功率显著高于PM（87.1%vs 81.1%,P〈0.05）,虽然其重构胚的分裂率极显著低于PM（49.5%vs 71.8%,P〈0.01）,但囊胚率、核移植的效率无显著差异（P〉0.05）。卵丘细胞和胎儿成纤维细胞在注射后3 h激活,重构胚的囊胚发育率最高;颗粒细胞注射后与激活前的最佳时间间隔可在1.5~3 h,但3 h是最佳的作用时间。结果表明,（1）WCICSI可用于水牛体细胞核移植的研究;（2）水牛胞质内注射供体细胞后3 h进行激活,核移植重构胚的发育效果最好。 展开更多
关键词 水牛 核移植 透明带下注核法 全细胞胞质内注射法 激活前时间间隔
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梅花鹿-牛异种体细胞核移植操作方法的研究
5
作者 王士勇 郑军军 +3 位作者 杨月春 刘宗岳 于淼 杨福合 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1381-1386,共6页
本研究旨在对梅花鹿-牛异种体细胞核移植(Interspecies somatic cell nuclear transfer,ISCNT)的显微操作方法进行系统研究,从而优化其操作过程。以梅花鹿耳皮肤成纤维细胞为供核细胞,牛MⅡ期卵母细胞为受体,分别采用盲吸法、挤压法和... 本研究旨在对梅花鹿-牛异种体细胞核移植(Interspecies somatic cell nuclear transfer,ISCNT)的显微操作方法进行系统研究,从而优化其操作过程。以梅花鹿耳皮肤成纤维细胞为供核细胞,牛MⅡ期卵母细胞为受体,分别采用盲吸法、挤压法和脱羰秋水仙碱(Demecoline,DEME)化学辅助的方法去核,带下注射(Perivitelline microin—jection,PM)、Pizeo破膜细胞胞质内注射(Break—membrane-cell intracytoplasmic microinjection,BMCIM)和全细胞胞质内注射(Whole-cell intracytoplasmic microinjection,WCIM)的方法注核,带下注核的卵母细胞电融合后化学激活,其余方法注核后直接化学激活,重组胚用CR1aa培养液体外培养。结果表明:(1)DEME辅助法去核率最高,挤压法最低,3种去核方法的去核率差异显著(P<0.05),去核时间差异不显著(P>0.05);(2)PM组和WCIM组注核成功率分别为100.0%和94.8%,注核时间分别为31.0和35.1 s,显著低于BMCIM法(P<0.05),但是注核成功率显著高于BMCIM法(P<0.05),而且两者差异不显著(P>0.05);(3)BMCIM组和WCIM组的激活率均显著高于PM组(P<0.05),其中一步法的BMCIM组最高,一步法和两步法在激活率、卵裂率和囊胚率方面均无显著差异(P>0.05)。结果提示:DEME辅助去核、Pizeo辅助破膜胞质内注射的一步法显微操作可有效用于梅花鹿-牛的异种体细胞核移植的研究。 展开更多
关键词 异种体细胞核移植 盲吸法 挤压法 Demecolcine化学辅助去核 带下注核 胞质内注射
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