目的·探讨泛素连接酶E3C(ubiquitin protein ligase E3C,UBE3C)对卵巢癌SKOV3细胞增殖、侵袭能力的影响。方法·Western blotting法检测UBE3C蛋白在不同卵巢癌细胞株和正常卵巢上皮细胞中的表达。选择卵巢癌SKOV3细胞株转染si-...目的·探讨泛素连接酶E3C(ubiquitin protein ligase E3C,UBE3C)对卵巢癌SKOV3细胞增殖、侵袭能力的影响。方法·Western blotting法检测UBE3C蛋白在不同卵巢癌细胞株和正常卵巢上皮细胞中的表达。选择卵巢癌SKOV3细胞株转染si-UBE3C下调UBE3C表达,转染ex-UBE3C质粒上调UBE3C表达。CCK-8法、平板克隆实验检测细胞增殖能力的变化,细胞划痕、Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力的变化,并检测增殖、转移相关蛋白β-catenin、c-Myc的表达。结果·UBE3C在卵巢癌细胞株中的表达显著高于正常卵巢上皮细胞。si-UBE3C转染SKOV3细胞沉默UBE3C表达,细胞增殖能力下降,迁移及侵袭能力减弱,β-catenin、c-Myc蛋白表达下调。ex-UBE3C转染后UBE3C过表达,SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭能力增强,且β-catenin、c-Myc蛋白表达水平升高。结论·UBE3C可能通过上调β-catenin及c-Myc蛋白表达,增强卵巢癌SKOV3细胞的增殖、侵袭能力。展开更多
目的构建含有标签蛋白的人环指蛋白11(ring finger protein 11,RNF11)的真核表达载体,并观测其在293T细胞中的表达。方法使用MEGA5.0等生物学软件构建人RNF11的分子进化树;应用RT-PCR从4种人胃癌细胞系中检测到该基因的表达,并将其克隆...目的构建含有标签蛋白的人环指蛋白11(ring finger protein 11,RNF11)的真核表达载体,并观测其在293T细胞中的表达。方法使用MEGA5.0等生物学软件构建人RNF11的分子进化树;应用RT-PCR从4种人胃癌细胞系中检测到该基因的表达,并将其克隆到pEASY-Blunt载体中,酶切测序鉴定正确后,再将其连接到真核表达载体pCMV-HA中,酶切鉴定正确后转染293T细胞,Western-blotting测其表达。结果重组的携带有RNF11的真核表达载体酶切鉴定后显示载体及片段的大小正确,将该真核表达载体转染293T细胞后使用Western-blotting检测到了融合蛋白的表达。结论携带有标签蛋白的人RNF11基因的真核表达载体pCMV-HA-RNF11克隆及表达成功,为进一步研究其与其它蛋白质的相互作用奠定了基础。展开更多
文摘目的·探讨泛素连接酶E3C(ubiquitin protein ligase E3C,UBE3C)对卵巢癌SKOV3细胞增殖、侵袭能力的影响。方法·Western blotting法检测UBE3C蛋白在不同卵巢癌细胞株和正常卵巢上皮细胞中的表达。选择卵巢癌SKOV3细胞株转染si-UBE3C下调UBE3C表达,转染ex-UBE3C质粒上调UBE3C表达。CCK-8法、平板克隆实验检测细胞增殖能力的变化,细胞划痕、Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力的变化,并检测增殖、转移相关蛋白β-catenin、c-Myc的表达。结果·UBE3C在卵巢癌细胞株中的表达显著高于正常卵巢上皮细胞。si-UBE3C转染SKOV3细胞沉默UBE3C表达,细胞增殖能力下降,迁移及侵袭能力减弱,β-catenin、c-Myc蛋白表达下调。ex-UBE3C转染后UBE3C过表达,SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭能力增强,且β-catenin、c-Myc蛋白表达水平升高。结论·UBE3C可能通过上调β-catenin及c-Myc蛋白表达,增强卵巢癌SKOV3细胞的增殖、侵袭能力。
文摘目的构建含有标签蛋白的人环指蛋白11(ring finger protein 11,RNF11)的真核表达载体,并观测其在293T细胞中的表达。方法使用MEGA5.0等生物学软件构建人RNF11的分子进化树;应用RT-PCR从4种人胃癌细胞系中检测到该基因的表达,并将其克隆到pEASY-Blunt载体中,酶切测序鉴定正确后,再将其连接到真核表达载体pCMV-HA中,酶切鉴定正确后转染293T细胞,Western-blotting测其表达。结果重组的携带有RNF11的真核表达载体酶切鉴定后显示载体及片段的大小正确,将该真核表达载体转染293T细胞后使用Western-blotting检测到了融合蛋白的表达。结论携带有标签蛋白的人RNF11基因的真核表达载体pCMV-HA-RNF11克隆及表达成功,为进一步研究其与其它蛋白质的相互作用奠定了基础。
