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泛素特异性蛋白酶18刺激乙型肝炎病毒复制的初步研究 被引量：1
1
作者 姚敏 李玉佳 +4 位作者 叶海艳 廖鑫忠 赵航 李世林 陈利民 《中国输血杂志》 CAS 2018年第4期361-365,共5页
目的了解泛素特异性蛋白酶18（USP18）对乙型肝炎病毒（HBV）复制的影响及其潜在机制。方法 1）USP18和Pol质粒构建：采用常规基因克隆方法,将人USP18编码序列及HBV多聚酶（Pol）编码序列分别构建到pcDNA3.1-3tag真核细胞表达载体内。2... 目的了解泛素特异性蛋白酶18（USP18）对乙型肝炎病毒（HBV）复制的影响及其潜在机制。方法 1）USP18和Pol质粒构建：采用常规基因克隆方法,将人USP18编码序列及HBV多聚酶（Pol）编码序列分别构建到pcDNA3.1-3tag真核细胞表达载体内。2）研究Pol对USP18的影响：高表达转染Pol质粒至Hep AD38细胞内,抽提细胞内总RNA,逆转录成c DNA,用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测Pol对USP18的影响。3）研究USP18对HBV的影响：高表达转染USP18质粒至Hep AD38细胞内,抽提细胞内总RNA和总DNA,qRT-PCR检测USP18对HBV复制的影响。4）研究Pol与USP18之间的相互作用：将Pol质粒按一定比例转染到铺有293T细胞的10cm培养皿中,采用免疫共沉淀的方法检测Pol与USP18之间是否存在相互作用。结果成功构建USP18和Pol表达质粒,并在HepAD38细胞中高表达;过表达Pol蛋白促进USP18表达;过表达USP18刺激HBV复制;Pol与USP18存在相互作用。结论初步证明USP18可能通过与Pol相互作用促进HBV复制。 展开更多
关键词 泛素特异性蛋白酶18(usp18) 乙型肝炎病毒 病毒复制 蛋白免疫印迹试验 实时荧光定量PCR 免疫共沉淀
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