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慢性肾衰竭大鼠主动脉UPP组分表达变化 被引量:1
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作者 冯兵 杨旭 +3 位作者 张耀全 叶自林 袁发焕 杨惠标 《中国血液净化》 2008年第6期321-324,共4页
目的探讨慢性肾衰竭大鼠主动脉泛素-蛋白酶体组分表达变化及意义。方法采用单肾切除、对侧肾动脉部分结扎法建立慢性肾衰竭模型,RT-PCR检测Ub、E2 mRNA表达水平,免疫组织化学检测Ub蛋白表达,免疫印迹法测定泛素化蛋白含量,并用图像分析... 目的探讨慢性肾衰竭大鼠主动脉泛素-蛋白酶体组分表达变化及意义。方法采用单肾切除、对侧肾动脉部分结扎法建立慢性肾衰竭模型,RT-PCR检测Ub、E2 mRNA表达水平,免疫组织化学检测Ub蛋白表达,免疫印迹法测定泛素化蛋白含量,并用图像分析定量。结果与正常大鼠比较,慢性肾衰竭大鼠术后4个月和6个月时主动脉Ub mRNA(灰度值)分别为(1.436±0.142)、(1.480±0.124),E2 mRNA(灰度值)分别为(2.253±0.689)、(2.002±0.383),均显著升高(P<0.01)。与正常大鼠比较,慢性肾衰竭大鼠主动脉Ub蛋白表达(积分光密度)在4个月和6个月时分别为(8.20±1.15)、(9.48±2.80),也显著升高(P<0.01)。而慢性肾衰竭大鼠主动脉泛素化蛋白含量在术后4个月和6个月时分别为(积分光密度)(1.46±0.26)、(2.32±0.83),均显著低于正常大鼠(P<0.01)。蛋白酶体抑制剂MG-132可明显抑制慢性肾衰竭大鼠主动脉Ub和E2 mRNA和蛋白质表达,泛素化蛋白积聚增多。结论慢性肾衰竭大鼠主动脉泛素-蛋白酶体信号通路显著活化。 展开更多
关键词 慢性肾衰竭 主动脉 泛素(ub) 泛素活化酶(E2) 泛素化蛋白
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磷酸化调控泛素单体与Rad23A/Ubiquilin-1中泛素结合域互作的检测 被引量:1
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作者 冉梦琳 覃凌云 +1 位作者 唐淳 董旭 《波谱学杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期15-22,共8页
泛素(ubiquitin,Ub)是一种广泛存在、高度保守的信号蛋白质,它能够特异性识别成千上万种靶蛋白,以非共价方式行使不同的功能,其中包含蛋白质降解.Ubiquilin-1(Ubql-1)和Rad23A作为两种蛋白降解的转运因子,都包含有与泛素结合的结构域,... 泛素(ubiquitin,Ub)是一种广泛存在、高度保守的信号蛋白质,它能够特异性识别成千上万种靶蛋白,以非共价方式行使不同的功能,其中包含蛋白质降解.Ubiquilin-1(Ubql-1)和Rad23A作为两种蛋白降解的转运因子,都包含有与泛素结合的结构域,被称为泛素结合域(ubiquitin-associated domain, UBA).2014年,泛素S65位磷酸化修饰的特异性激酶PINK1被发现,磷酸化使泛素在溶液中呈现舒展态与收缩态两种互相转换的构象.本文通过核磁共振(nuclear magnetic resonance, NMR)技术对UBA和磷酸化泛素之间的相互作用进行检测,观测磷酸化对UBA和泛素结合的影响.实验结果表明Rad23A-UBA2与Ubql-1 UBA都特异性的与磷酸化泛素的舒展态相互作用,但是磷酸化未改变泛素与UBA之间的亲和力.值得注意的是与Ubql-1 UBA相互作用时,磷酸化促进了泛素收缩态向舒展态的转换. 展开更多
关键词 泛素(ub) 磷酸化 核磁共振(NMR) 蛋白质之间相互作用 泛素结合域(ubA)
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铽离子-镧系金属结合标签的荧光探针的改进 被引量:1
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作者 陈少敏 唐淳 龚洲 《波谱学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期106-116,共11页
镧系金属因其具有较窄的发射光谱带,较大的斯托克斯位移以及毫秒级的荧光寿命,而被广泛应用于荧光检测中,其中Tb^(3+)、Eu^(3+)最为常用.镧系金属结合标签(Lanthanide Binding Tag,LBT)可以与蛋白质融合表达,并且一般不会影响蛋白的结... 镧系金属因其具有较窄的发射光谱带,较大的斯托克斯位移以及毫秒级的荧光寿命,而被广泛应用于荧光检测中,其中Tb^(3+)、Eu^(3+)最为常用.镧系金属结合标签(Lanthanide Binding Tag,LBT)可以与蛋白质融合表达,并且一般不会影响蛋白的结构和功能,这些特点使LBT被广泛应用于蛋白质结构与功能研究中.LBT能够特异性地结合镧系金属离子,并利用LBT上色氨酸的吲哚环作为"天线"吸收外部能量,再将能量传递给镧系金属离子,进而激发镧系金属离子产生荧光.该文以经典模式蛋白泛素(Ubiquitin,Ub)作为媒介,将LBT引入到Ub的碳端,采用定点突变的方法增加LBT上吲哚环的数量,观察Ub-LBT[结合铽离子(Tb^(3+))]荧光量子产率的变化.结果表明在LBT结构中增加吲哚环的数量能够提高LBT(结合Tb^(3+))的荧光量子产率. 展开更多
关键词 荧光光谱学 镧系金属结合标签(LBT) 荧光量子产率 解离常数 泛素(ub)
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