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基因工程乙肝新型疫苗(汉逊酵母表达系统)的开发 被引量：27
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作者 李河民 汪和睦 《微生物学免疫学进展》 2001年第3期47-54,共8页
HBsAg不同成份在多条生物细胞系统中已表达成功 ,但至今仅哺乳动物细胞 (CHO ,C12 7等 )和酿酒酵母表达系统占领了大部分市场。我们的临床观察也证明了酵母重组疫苗对HBeAg和HBsAg双阳性母亲所生的新生儿免疫保护效果最好。近年来又发... HBsAg不同成份在多条生物细胞系统中已表达成功 ,但至今仅哺乳动物细胞 (CHO ,C12 7等 )和酿酒酵母表达系统占领了大部分市场。我们的临床观察也证明了酵母重组疫苗对HBeAg和HBsAg双阳性母亲所生的新生儿免疫保护效果最好。近年来又发展了汉逊酵母表达系统。其特点为 30个adw2HBsAg基因拷贝整合于该酵母染色体中 ;含有MOX、FMD等高效启动子 ;能利用甘油、甲醇为能量来源进行高密度发酵 ,每升发酵液的细胞干重达 10 0 g以上 ;工程菌发酵生产稳定性好 ,HBsAg颗粒表达量达 40 0 μg/ml,最终纯化的HBsAg达 6 0 μg/ml,其单位产量比酿酒酵母表达系统高约 10倍 ,小鼠实验证明该系统表达的HBsAg诱导体液和细胞免疫应答较好 ,值得开发出产品 ,适合于我国广大农村使用。在发展基因工程乙肝疫苗时也应考虑研究增强抗原细胞免疫工程菌的构建和疫苗佐剂。 展开更多
关键词 乙肝 基因工程疫苗 汉逊酵母表达系统
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重组人胃蛋白酶原Ⅰ在汉逊酵母中的分泌表达、纯化及其应用
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作者 陈丹 李璐 +5 位作者 班靖洋 郭玉争 王维龙 刘娟 李鼎锋 刘勇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第2期125-132,共8页
目的实现人胃蛋白酶原Ⅰ(pepsiongenⅠ,PGⅠ)在汉逊酵母表达系统中的高效分泌表达,并将纯化的重组PGⅠ蛋白制备成体外诊断试剂用校准品。方法根据汉逊酵母遗传密码子偏爱性优化设计并合成PGⅠ基因,克隆至表达载体p RMHP2.1中,电转化汉... 目的实现人胃蛋白酶原Ⅰ(pepsiongenⅠ,PGⅠ)在汉逊酵母表达系统中的高效分泌表达,并将纯化的重组PGⅠ蛋白制备成体外诊断试剂用校准品。方法根据汉逊酵母遗传密码子偏爱性优化设计并合成PGⅠ基因,克隆至表达载体p RMHP2.1中,电转化汉逊酵母宿主菌26012,进行多次传代及稳定,筛选高水平分泌表达PGⅠ的菌株,并对该菌株的目的基因整合位置及整合拷贝数进行检测。应用200 L发酵罐大规模制备发酵培养液,通过Ni柱亲和层析方法纯化获得重组PGⅠ蛋白,经胶乳增强免疫比浊试剂盒进行PGⅠ蛋白的定值,应用类血清基质液制备100及50μg/L浓度的PGⅠ校准品后检测稳定性。结果重组表达质粒p RMHP2.1-PGⅠ经双酶切及测序鉴定证明构建正确。筛选获得的重组汉逊酵母菌株分泌表达的PGⅠ蛋白相对分子质量约45 000,表达量达100 mg/L以上,其外源基因整合于宿主r DNA位置,整合拷贝数不低于20个。纯化后的重组PGⅠ蛋白纯度为94.5%,配制后的PGⅠ校准品经4℃实时保存稳定性、37℃加速破坏性及4℃开盖保存稳定性试验,校准品定值的平均下降幅度均不超过10%。结论应用汉逊酵母表达系统可高效分泌PGⅠ蛋白,该蛋白具有良好的稳定性,可用作体外诊断试剂的PGⅠ校准品。 展开更多
关键词 胃蛋白酶原Ⅰ 汉逊酵母表达系统 分泌表达 纯化
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