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吉林省汉坦病毒宿主动物携带病毒的遗传进化分析 被引量:7
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作者 范胜涛 高晓龙 +10 位作者 李元果 应瑛 国娇 张钊伟 刘红 吴静 杨松涛 赵永坤 秦川 高玉伟 夏咸柱 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第4期467-471,475,共6页
目的对吉林省汉坦病毒(Hantavirus,Hv)宿主动物携带病毒进行遗传进化分析。方法采集吉林省不同地区鼠肺样品,应用间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)鉴定出HV感染的阳性样本,利用Trizol试剂提取病毒RNA,RT... 目的对吉林省汉坦病毒(Hantavirus,Hv)宿主动物携带病毒进行遗传进化分析。方法采集吉林省不同地区鼠肺样品,应用间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)鉴定出HV感染的阳性样本,利用Trizol试剂提取病毒RNA,RT-PCR法扩增阳性样本中M和S片段基因,并进行测序,应用DNASTAR软件对M和S片段基因的核苷酸同源性进行分析,并与汉城病毒(Seoulvirus,SEOV)参考株进行比较;利用MegAligh软件进行蛋白序列中氨基酸差异性分析;利用MEGA5.0软件进行系统发生分析。结果共捕获719只啮齿动物,其中褐家鼠(R.norvegicus)555只,黑线姬鼠(A.agrarius)74只,小家鼠(胍m12sclzllzs)90只,HV抗原阳性率为1.39%(10/719);10份阳性样本中,7份来自褐家鼠,2份来自小家鼠,1份来自黑线姬鼠。用全长s引物扩增得到的10株病毒全长s基因片段,经同源性分析比较发现,各序列间的核苷酸同源性在92.8%~95.1%之间,与其他SEOV核苷酸同源性在90.2%~94.7%之间;用M引物扩增得到的部分基因片段,经同源性分析比较发现,各序列间的核苷酸同源性在96.5%~99.5%之间,而与其他SEOV核苷酸同源性在91.5%~97.7%之间;10株病毒全部属于SEOV。黑线姬鼠G蛋白365~769位点问有5个氨基酸差异位点(V494L、C546S、Y626C、M630L和V637I),小家鼠G蛋白365~769位点问主要有5个氨基酸差异位点(C378G/R、F420L、Q436P/R、E535G/A和C589G/W),但同种间在378、436、535和589位点也有差异;黑线姬鼠N蛋白1~430位点间存在P298L变异;小家鼠N蛋白变异位点较多,主要在M24K/N、A37D、1140M、M173K、D192E、L219V、P229A、D237E、H265Y、V284L、T333S、A389G和V425E变异。分离得到的10株病毒根据不同的来源地可分为两个不同的进化分支。结论研究表明吉林省宿主动物携带的HV仍以SEOV为主,其遗传进化呈现多 展开更多
关键词 汉坦病毒 遗传 进化 汉城病毒
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近年肾综合征出血热流行病学研究现状、问题与展望 被引量:4
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作者 沈建中 吴光华 《医学动物防制》 2002年第9期504-508,共5页
关键词 肾综合征出血热 流行病学 研究现状 问题 传播途径 HFRS 汉滩病毒 汉城病毒 传播途径
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葫芦岛市居民区褐家鼠携带的汉坦病毒分析 被引量:4
3
作者 李明慧 陈小萍 +4 位作者 杨国庆 沈铁峰 刘保 郭文平 张永振 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS CSCD 2011年第3期239-242,共4页
目的通过对汉坦病毒的监测分析,掌握葫芦岛市居民区鼠类中的汉坦病毒流行情况,为制定人间汉坦病毒的预防控制措施提供依据。方法用鼠笼捕获小动物,采用间接免疫荧光法(IFA)检测小动物肺中的汉坦病毒抗原,用RT?PCR进行基因分型。结果在20... 目的通过对汉坦病毒的监测分析,掌握葫芦岛市居民区鼠类中的汉坦病毒流行情况,为制定人间汉坦病毒的预防控制措施提供依据。方法用鼠笼捕获小动物,采用间接免疫荧光法(IFA)检测小动物肺中的汉坦病毒抗原,用RT?PCR进行基因分型。结果在2005-2006年选取葫芦岛地区9个不同地点的居民区和2个野外地点捕鼠,共捕获褐家鼠254只,小家鼠17只,黑线姬鼠5只,褐家鼠带病毒率为4.72%,小家鼠为5.88%。提取汉坦病毒抗原阳性鼠肺组织中的病毒RNA,从褐家鼠中共扩增出9株汉坦病毒,基因分型全部为汉城病毒,并且分离到1株病毒。而从小家鼠和黑线姬鼠中未扩增到病毒。结论葫芦岛市居民区的鼠类以褐家鼠为主,其携带的病毒属于汉城型。 展开更多
关键词 汉坦病毒 褐家鼠 汉城病毒 系统发生分析
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江西省高安市两株汉城病毒分离鉴定及全基因组序列分析 被引量:3
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作者 刘师文 张艳妮 +5 位作者 肖芳 周珺 刘晓庆 熊英 吴杨博文 龚甜 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期102-107,共6页
目的对2021年江西省高安市采集的鼠肺样本进行肾综合征出血热汉坦病毒分离鉴定及全基因组序列进行分析。方法采用Vero-E6细胞分离肾综合征出血热汉坦病毒,采用实时荧光RT-PCR法和直接免疫荧光法对分离株进行鉴定,采用高通量测序技术对... 目的对2021年江西省高安市采集的鼠肺样本进行肾综合征出血热汉坦病毒分离鉴定及全基因组序列进行分析。方法采用Vero-E6细胞分离肾综合征出血热汉坦病毒,采用实时荧光RT-PCR法和直接免疫荧光法对分离株进行鉴定,采用高通量测序技术对分离株进行全基因组测序,采用CLC、MEGA7.0等软件对基因组序列进行分析。结果从褐家鼠和罗赛鼠各分离到1株汉城病毒(Seoul orthohantavirus,SEOV),分别命名为GAW30/2021、GAW50/2021。2株分离株的3个基因片段大小相同,每个基因编码区长度一致。分离株S、M、L基因分别含1773、3651、6530个核苷酸,分别编码429、1133、2151个氨基酸。2株分离株3个基因核苷酸序列同源性分别为99.7%、99.0%、99.4%、氨基酸序列同源性分别为99.8%、99.7%、99.9%。2株分离株与国内外SEOV参考株全基因组核苷酸同源性为84.3%~94.9%,氨基酸同源性为96.1%~99.8%,在系统进化树上独立分枝。2株分离株与SEOV疫苗株基因组氨基酸同源性为97.6%~99.1%;核蛋白和糖蛋白免疫表位氨基酸序列与疫苗株一致。结论首次在江西省高安市鼠肺样本中分离到2株SEOV变异株,目前疫苗对变异株仍具有保护力。 展开更多
关键词 汉城病毒 病毒分离与鉴定 全基因组序列 疫苗
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汉城病毒的TaqMan-BHO探针实时荧光定量检测方法的建立 被引量:4
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作者 刘纯成 杨鹏飞 +1 位作者 燕清丽 时玉军 《国际检验医学杂志》 CAS 2014年第24期3332-3333,共2页
目的建立一种汉城病毒实时荧光定量RT-PCR快速的检测方法。方法用专业软件设计引物和TaqMan-BHQ探针,以人工合成L基因的片段作为模板,进行实时荧光定量RT-PCR研究。结果模板的Ct值与模板稀释浓度的对数存在良好的线性关系,标准曲线为Y=-... 目的建立一种汉城病毒实时荧光定量RT-PCR快速的检测方法。方法用专业软件设计引物和TaqMan-BHQ探针,以人工合成L基因的片段作为模板,进行实时荧光定量RT-PCR研究。结果模板的Ct值与模板稀释浓度的对数存在良好的线性关系,标准曲线为Y=-3.607 X+41.84,r2=0.998,PCR扩增效率为108.1%,其最低检出限为53.2copies/μL。结论应用TaqMan-BHQ1探针的实时荧光RT-PCR检测汉城病毒核酸,具有耗时短、灵敏度高等特点。 展开更多
关键词 TaqMan-BHQ探针 汉城病毒 定量检测
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双重荧光RT-RAA检测引起肾综合征出血热汉坦病毒方法的建立 被引量:1
6
作者 周冬根 罗洁 +2 位作者 许恒毅 童淑梅 胡群 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2022年第4期253-256,263,共5页
目的 建立汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)、汉城病毒(Seoul virus,SEOV)、普马拉病毒(Puumala virus,PUUV)、多不拉伐病毒(Dobrava virus,DOBV)4种引起肾综合征出血热病毒的快速筛查、诊断方法。方法 分析确定上述4种病毒的保守基因作为... 目的 建立汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)、汉城病毒(Seoul virus,SEOV)、普马拉病毒(Puumala virus,PUUV)、多不拉伐病毒(Dobrava virus,DOBV)4种引起肾综合征出血热病毒的快速筛查、诊断方法。方法 分析确定上述4种病毒的保守基因作为靶标区域,设计4组特异性引物和探针,组合成两组双重荧光重组酶介导等温扩增(RTRAA)反应体系。分别用4种病毒的体外转录RNA验证方法的灵敏度,采用登革病毒I-Ⅳ型、基孔肯雅病毒、黄热病毒疫苗株、乙型脑炎病毒、甲型流感病毒3型、甲型H1N1流感病毒以及乙型流感病毒核酸及4种病毒体外转录RNA进行特异性验证,分别采用中浓度(10^(4)拷贝/μl)、低浓度(10^(2)拷贝/μl)的体外转录RNA验证双检测体系的重复性。结果 通过生物信息学分析,将4种病毒组合成HTNV+SEOV组合以及PUUV+DOBV双重荧光RT-RAA检测体系,均在39℃检测15 min,检测灵敏度为1-10^(2)拷贝/μl,均与其他病毒无交叉反应。4种病毒对10^(4)拷贝/μl体外转录RNA检出率均达到100.0%,10^(2)拷贝/μl体外转录RNA检出率也能达到66.7%。结论 本研究建立的检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于人体及鼠类样本的诊断与筛查. 展开更多
关键词 重组酶介导等温扩增 汉滩病毒 汉城病毒 普马拉病毒 多不拉伐病毒
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一种汉滩病毒和汉城病毒双重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:3
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作者 刘师文 熊英 +3 位作者 施勇 李健雄 王倩 龚甜 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期478-483,共6页
目的建立一种汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)和汉城病毒(Seoul virus,SEOV)双重实时定量荧光RT-PCR检测方法。方法根据HTNV和SEOV S基因设计引物和探针、优化反应条件,建立2种汉坦病毒的双重实时荧光定量RT-PCR方法。以甲型流感病毒、登... 目的建立一种汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)和汉城病毒(Seoul virus,SEOV)双重实时定量荧光RT-PCR检测方法。方法根据HTNV和SEOV S基因设计引物和探针、优化反应条件,建立2种汉坦病毒的双重实时荧光定量RT-PCR方法。以甲型流感病毒、登革热病毒、新布尼亚病毒、寨卡病毒、新冠病毒阳性核酸为模板验证方法的特异性,将建立的方法与巢氏RT-PCR比较,确定方法对临床样本的适用性。结果建立了一种HTNV和SEOV双重实时定量荧光RT-PCR检测方法,该方法对2种型别病毒的最低检测限均为10 copies/μL,不同浓度标准品Ct值批内和批间差异均小于2%。与登革热病毒、新布尼亚病毒、寨卡病毒、新型冠状病毒、甲型流感病毒均无交叉反应。对10份肾综合征出血热急性期血清样本进行检测,结果9份为HTNV、1份为SEOV,与巢式RT-PCR方法结果一致。结论建立的双重实时荧光定量RT-PCR方法可以快速对HTNV和SEOV进行分型和定量检测,适用于肾综合征出血热临床早期诊断。 展开更多
关键词 汉滩病毒 汉城病毒 双重实时荧光定量RT-PCR
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中和试验发现西安地区为肾综合征出血热混合型疫区 被引量:3
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作者 王丽 魏菁 +8 位作者 李慎 马长安 屈建惠 董建华 马颖欣 张全福 李川 王敬军 余鹏博 《国际病毒学杂志》 2017年第2期107-110,共4页
目的调查陕西西安地区汉坦病毒感染现状,分析当地肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)疫源地性质。方法根据HFRS发病报告数据,分析西安HFRS的发病特点。通过荧光定量RT—PCR方法,检测西安HFRS疫区家鼠和... 目的调查陕西西安地区汉坦病毒感染现状,分析当地肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)疫源地性质。方法根据HFRS发病报告数据,分析西安HFRS的发病特点。通过荧光定量RT—PCR方法,检测西安HFRS疫区家鼠和野鼠携带汉坦病毒情况及病毒型别。微量中和试验确定西安本地HFRS病人、HFRS疫苗接种者和隐性感染者血清中的汉坦病毒中和抗体水平并分型,回顾性调查阳性感染者。结果西安地区HFRS发病每年均有6—7月份的小高峰和10—12月份的大高峰;在当地642只家鼠和1546只野鼠肺组织中检出汉滩病毒RNA136份;143份人血清中123份检测到汉坦病毒中和抗体,未检测到中和抗体的有20份。中和抗体阳性者中判定为汉滩病毒感染者92人,占74.80%;判定为汉城病毒感染者3人,占2.44%;不能区分病毒感染型别者28人,占22.76%,3例感染汉城病毒者分别为HFRS病人、疫苗接种者和隐性感染者,调查显示3例均为本地感染。结论实验室和现场调查证实当地存在汉城型病毒本地感染,陕西西安地区是以汉滩病毒型为绝对优势的HFRS混合型疫区。 展开更多
关键词 汉滩病毒 汉城病毒 中和抗体 西安 疫区
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褐家鼠携带2株汉坦病毒的遗传特征分析 被引量:3
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作者 王文 林献丹 +2 位作者 郭文平 李明慧 张永振 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1030-1034,共5页
目的 分析来自内蒙古自治区呼和浩特市和河南省杞县两地褐家鼠标本中的汉坦病毒(HV)遗传特征,研究其与已知HV及疫苗株之间的关系.方法 提取病毒总RNA,用反转录-聚合酶链式反应法扩增阳性标本中HV的全M、S基因片段,测序后进行序列特征... 目的 分析来自内蒙古自治区呼和浩特市和河南省杞县两地褐家鼠标本中的汉坦病毒(HV)遗传特征,研究其与已知HV及疫苗株之间的关系.方法 提取病毒总RNA,用反转录-聚合酶链式反应法扩增阳性标本中HV的全M、S基因片段,测序后进行序列特征和系统发生分析.结果 成功扩增出2株HV(NM133株和Q12株)的全M、S基因片段,并测定序列.2株病毒的S基因片段核苷酸序列全长分别为1770nt和1772 nt,均仅有1个开放读码框(ORF),编码429个氨基酸,M基因片段核苷酸序列全长均为3654 nt,编码1133个氨基酸.2株HV与绝大部分已知的汉城病毒(SEOV)具有很高的同源性;但与汉滩病毒(HTNV)等其他型HV同源性较低.2株病毒的核蛋白、糖蛋白氨基酸序列与疫苗株Z37具有一致的二级结构.另外,在用全S和M基因片段核苷酸序列所构建的系统进化树中,2株病毒被分在SEOV的Ⅰ亚型,与Hb8610、R22、HB55、L99以及K24-e7的亲缘关系最近.结论 2株病毒为SEOV的Ⅰ亚型,与包括疫苗株Z37在内的已知SEOV具有很高的同源性和一致的二级结构,提示当前的疫苗能有效预防SEOV引起的肾综合征出血热. 展开更多
关键词 汉坦病毒 汉城病毒 基因分型 遗传特征
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深圳市福田区1997—2011年流行性出血热流行病学特征分析 被引量:3
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作者 李丽廉 刘俊玲 +2 位作者 莫浩联 黄慧萍 舒彬 《社区医学杂志》 2012年第13期57-58,共2页
目的对深圳市福田区流行性出血热(epidemic hemorrhagic fever,EHF)发病数据进行流行病学分析,为制订EHF的预防和控制措施提供科学依据。方法 EHF鼠密度调查采用笼日法,带毒率用ELISA法检测鼠血清EHF特异性抗体。结果福田区在1997—2... 目的对深圳市福田区流行性出血热(epidemic hemorrhagic fever,EHF)发病数据进行流行病学分析,为制订EHF的预防和控制措施提供科学依据。方法 EHF鼠密度调查采用笼日法,带毒率用ELISA法检测鼠血清EHF特异性抗体。结果福田区在1997—2011年共发现EHF病例69例,呈低度活跃状态,近5年发病有增多趋势,其中男性61例,占88.41%;女性8例,占11.59%。年龄20~49岁居多,占86.96%。职业分布中前三位是工人、商业服务、家政待业;EHF在区内呈现春夏型;鼠媒监测显示褐家鼠是优势鼠种,平均捕获率9.72%,EHF病毒分型主要为汉坦病毒(hantavirus,HV)Ⅱ型即汉城病毒(seoul virus,SEOV)。结论福田区EHF符合家鼠型传播特点,褐家鼠是区内的主要宿主动物和传染源。加强对EHF疾病监测及健康教育,注重环境和食品卫生、加强鼠密度监测的同时灭鼠防鼠,可有效防止疫情传播。 展开更多
关键词 流行性出血热 汉坦病毒 汉城病毒 流行病学
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张永振 为“中国符号”而战 被引量:2
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作者 夏辉 《中国卫生人才》 2017年第3期52-55,共4页
2008年,发现沅江病毒;2012年,发现3个新亚型汉城病毒;2013年,发现4种新汉坦病毒;2014年,发现具有重要生物学意义的病毒——荆门病毒;2015年,发现115种全新病毒;2016年,发现1457种全新的病毒……看到这些,即使不属于这个行... 2008年,发现沅江病毒;2012年,发现3个新亚型汉城病毒;2013年,发现4种新汉坦病毒;2014年,发现具有重要生物学意义的病毒——荆门病毒;2015年,发现115种全新病毒;2016年,发现1457种全新的病毒……看到这些,即使不属于这个行业的科学工作者也能知道这意味着什么。在疾病防控领域的工作者,可能都知道发现者的名字,他就是中国疾控中心传染病所人兽共患病室主任张永振研究员。 展开更多
关键词 中国疾控中心 汉城病毒 科学工作者 生物学意义 汉坦病毒 疾病防控 人兽共患 新亚型
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深圳市啮齿动物感染汉坦病毒的基因特征研究
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作者 罗瑶 李玥 +4 位作者 黄亚兰 张晓敏 熊玲红 张仁利 阳帆 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1804-1810,共7页
目的:研究深圳市啮齿动物所携带的汉坦病毒分子流行病学特征,分析汉坦病毒基因型别。方法:采用笼日法布点捕鼠,收集鼠肺标本后研磨提取RNA。运用实时荧光PCR方法进行分型检测,进一步采用反转录-巢式PCR扩增部分M片段G2区和S片段核苷酸序... 目的:研究深圳市啮齿动物所携带的汉坦病毒分子流行病学特征,分析汉坦病毒基因型别。方法:采用笼日法布点捕鼠,收集鼠肺标本后研磨提取RNA。运用实时荧光PCR方法进行分型检测,进一步采用反转录-巢式PCR扩增部分M片段G2区和S片段核苷酸序列,并进行同源性和系统进化树分析。结果:共捕获200只鼠类动物,包含褐家鼠189只、黄胸鼠9只和小家鼠2只。汉坦病毒检出率为21.0%(42/200),均为汉城病毒,其中宝安区鼠肺检出率最高,达45.7%( χ^(2)=25.60, P<0.05)。从阳性鼠肺标本中分别扩增出25条汉坦病毒M片段G2区和S片段序列,核苷酸同源性分别为95.3%~100.0%和97.6%~100.0%,与来自广州市的参考序列核苷酸相似性较高。系统进化树显示此次研究深圳市鼠类动物所携带的汉坦病毒均为汉城病毒的S2亚型。氨基酸突变位点分析发现,在S基因编码的核衣壳蛋白中存在1个位点突变,为BA-111第973位由丙氨酸(Ala)变为苏氨酸(Thr)。 结论:深圳市鼠类动物所携带的汉坦病毒为汉城病毒的S2亚型,与深圳市历年以及周边省市汉坦病毒代表病毒毒株相比变异不大。 展开更多
关键词 汉坦病毒 汉城病毒 基因分型 序列分析
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呼和浩特市鼠类携带汉坦病毒的基因分型 被引量:1
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作者 张凤贤 张永振 +8 位作者 陈化新 张玉敏 薄福宝 王大伟 杨月清 郭强 楮秀珍 刘小平 任仙云 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期45-48,共4页
目的对呼和浩特市流行的汉坦病毒进行基因分型,为制定肾综合征出血热防制对策提供科学依据。方法对经间接免疫荧光试验初筛为阳性的鼠肺标本用汉坦病毒型特异性引物,以巢式逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增部分M和S基因片段上的目的核... 目的对呼和浩特市流行的汉坦病毒进行基因分型,为制定肾综合征出血热防制对策提供科学依据。方法对经间接免疫荧光试验初筛为阳性的鼠肺标本用汉坦病毒型特异性引物,以巢式逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增部分M和S基因片段上的目的核苷酸序列,纯化回收测序后,将扩增片段的核苷酸序列与已知病毒的核苷酸序列进行比较,以明确汉坦病毒的基因型及基因亚型。结果呼和浩特市33份阳性鼠肺中,其中32份为褐家鼠肺,1份为小家鼠肺,经巢式RT-PCR扩增,用汉城病毒型特异性引物共扩增出部分S、M片段(G1、G2区)69个,经同源性和系统发生分析,褐家鼠和小家鼠所携带汉坦病毒均为汉城型S1亚型。结论呼和浩特市家鼠中流行的汉坦病毒为汉城型,与流行病学分型一致。 展开更多
关键词 汉坦病毒 逆转录-聚合酶链反应 基因分型 汉城病毒
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长春市鼠类携带汉坦病毒的基因型分析 被引量:1
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作者 孙炳欣 孙宇 +1 位作者 沈博 吴静 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS CSCD 2015年第6期600-604,共5页
目的了解长春市鼠类动物所携带的汉坦病毒基因型别。方法采集长春市地区鼠肺样品,应用免疫荧光法检测鼠肺中汉坦病毒抗原,提取阳性样本中病毒RNA,利用RT-PCR法扩增S基因片段,并测序,利用DNAman软件和Mega 6.0软件进行序列分析。结果在... 目的了解长春市鼠类动物所携带的汉坦病毒基因型别。方法采集长春市地区鼠肺样品,应用免疫荧光法检测鼠肺中汉坦病毒抗原,提取阳性样本中病毒RNA,利用RT-PCR法扩增S基因片段,并测序,利用DNAman软件和Mega 6.0软件进行序列分析。结果在长春地区共捕获褐家鼠100只,检测到阳性样本3份,阳性率为3.0%。通过测序获得3株病毒的S基因片段序列,经同源性分析比较发现各序列间核苷酸同源性为100%,与其他汉城病毒(SEOV)核苷酸同源性在95.4%~100%之间,3株病毒全部为SEOV。系统发生树分析表明,3株病毒在同一组内,属于S3亚型。结论研究表明长春市褐家鼠中携带的汉坦病毒为SEOV型,S3亚型。 展开更多
关键词 汉坦病毒 反转录-聚合酶链反应 基因分型 汉城病毒
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2013年和2014年贵州省肾综合征出血热高发地区病人血清标本与鼠肺标本的病原学检测
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作者 吴萍 蒋维佳 +5 位作者 周敬祝 余春 陶忠发 任中秋 蒋开军 张泽英 《中华卫生杀虫药械》 CAS 2022年第5期443-446,共4页
目的了解贵州省肾综合征出血热病人血清汉坦病毒变化以及鼠感染的情况。方法收集2013年和2014年遵义县及金沙县两地肾综合征出血热病人急性期血清标本及鼠肺标本,进行病原检测。结果187例病例的急性期血清标本IgM抗体阳性的有112份,阳... 目的了解贵州省肾综合征出血热病人血清汉坦病毒变化以及鼠感染的情况。方法收集2013年和2014年遵义县及金沙县两地肾综合征出血热病人急性期血清标本及鼠肺标本,进行病原检测。结果187例病例的急性期血清标本IgM抗体阳性的有112份,阳性率为60%,112份血清标本核酸检测结果汉滩型有10份,汉城型有2份。671份鼠血标本IgG抗体阳性的有74份,阳性率为3.6%,其中鼠肺核酸检测结果汉滩型有20份,汉城型有3份。结论2013—2014年遵义县及金沙县鼠间和人间感染的病原主要以汉坦病毒为主。 展开更多
关键词 肾综合征出血热 汉坦病毒 汉城病毒
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对分离自褐家鼠的汉滩型和汉城型病毒的毒力测定
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作者 段正秀 李明慧 +3 位作者 于娟 王文 郭文平 张永振 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1047-1050,共4页
目的比较分离自褐家鼠的汉滩病毒(HTNV)CGRn5310株和汉城病毒(SEOV)HR54株的毒力差异,探索汉坦病毒(HV)“溢出”到非宿主动物后的毒力变化。方法选取从贵州省褐家鼠中分离的CGRn5310株HTNV和从河南省褐家鼠分离的HR54株SEOV,用... 目的比较分离自褐家鼠的汉滩病毒(HTNV)CGRn5310株和汉城病毒(SEOV)HR54株的毒力差异,探索汉坦病毒(HV)“溢出”到非宿主动物后的毒力变化。方法选取从贵州省褐家鼠中分离的CGRn5310株HTNV和从河南省褐家鼠分离的HR54株SEOV,用不同稀释度的病毒悬液经脑内接种于昆明乳鼠,观察小鼠发病症状,测定其半数致死量(LD50),并用免疫荧光法检测脑与肺组织内HV特异抗原。结果接种2株病毒后的小鼠生长缓慢,均出现不同程度的神经症状。CGRn5310株的LD50是10^-6.42,HR54株的LD50是10^-4.51。在死亡小鼠的脑与肺组织中均能检测到HV特异抗原,而对照组脑与肺组织内未检测到病毒抗原。结论从褐家鼠中分离到的CGRn5310株HTNV的毒力大于从褐家鼠中分离到HR54株SEOV,这可能意味着HV“溢出”到非宿主动物后毒力变化较小。 展开更多
关键词 汉坦病毒 汉滩病毒 汉城病毒 毒力
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汉城病毒L99株双抗体夹心ELISA抗原检测方法的建立及应用
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作者 孙晨 唐剑光 +3 位作者 孙宏亮 李景良 常军亮 顾建阳 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期234-240,共7页
目的:建立汉城病毒(Seoul virus, SEOV)L99株特异性双抗体夹心ELISA抗原检测方法,验证其检测性能,为双价肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS)疫苗研制、生产和检定过程中Ⅱ型病毒抗原含量检测提供有效手段。方... 目的:建立汉城病毒(Seoul virus, SEOV)L99株特异性双抗体夹心ELISA抗原检测方法,验证其检测性能,为双价肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS)疫苗研制、生产和检定过程中Ⅱ型病毒抗原含量检测提供有效手段。方法:小鼠体内诱生法制备L99病毒单克隆抗体(monoclonal antibody, McAb)腹水,Protein-A亲和层析纯化腹水抗体,SDS-PAGE鉴定纯化抗体纯度,间接ELISA法测定McAb效价,Western blot鉴定其特异性;叠加ELISA法对4株McAb进行抗体配对。用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)标记单抗后,通过正交试验优化包被和标记抗体使用浓度,建立双抗体夹心ELISA病毒抗原检测方法。以Ⅱ型HFRS疫苗标准品作为定量标准,验证方法的检测限、线性范围、专属性、准确性、精密度;通过检测3批Ⅱ型病毒疫苗灭活原液验证方法适用性。结果:4株McAb腹水效价均>1∶10 6,抗体纯度均>98%;经Western blot鉴定,1D5、3A4、5B7特异识别Ⅱ型L99株出血热病毒核衣壳蛋白,2E3与Ⅰ型PS-6株出血热病毒存在交叉反应;经抗体配对筛选后,选择3A4为包被抗体,1D5为标记抗体;棋盘滴定法确定包被抗体工作浓度为20 μg/ml,HRP标记抗体工作浓度为1∶4 000。该方法对SEOV L99抗原最低检测限为0.078 1 μg/ml;线性范围为0.078 1~2.500 0 μg/ml, R2>0.99;专属性验证其对Ⅱ型HFRS疫苗具有检测特异性;抗原回收率在95.8%~108.7%之间,精密度验证变异系数<10%。用该方法检测3批Ⅱ型HFRS灭活疫苗原液结果均呈剂量依赖性。 结论:成功建立了SEOV L99株型特异性双抗体夹心ELISA抗原检测方法,为地鼠肾双价肾综合征出血热疫苗生产及检定过程中,SEOV L99株病毒抗原含量测定提供了检测方法。 展开更多
关键词 汉城病毒 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA 抗原检测
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抗汉城病毒荧光单克隆抗体的制备及初步应用
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作者 张雨薇 彭言峰 +4 位作者 刘双军 陈子杨 韩德明 李景良 常军亮 《国际生物制品学杂志》 CAS 2022年第4期181-186,共6页
目的制备抗汉城病毒(Seoul virus,SEOV)荧光单克隆抗体(单抗),并初步应用于Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗原液的病毒灭活验证。方法以SEOV L-99株灭活病毒原液为免疫原,采用小鼠杂交瘤细胞融合技术,筛选抗SEOV特异性单抗杂交瘤;小鼠体内... 目的制备抗汉城病毒(Seoul virus,SEOV)荧光单克隆抗体(单抗),并初步应用于Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗原液的病毒灭活验证。方法以SEOV L-99株灭活病毒原液为免疫原,采用小鼠杂交瘤细胞融合技术,筛选抗SEOV特异性单抗杂交瘤;小鼠体内诱生法制备单抗腹水,蛋白A亲和层析纯化单抗,并以蛋白质印迹法鉴定其特异性;间接ELISA测定单抗效价和相对亲和力;纯化单抗采用搅拌法标记异硫氰酸荧光素,并分别采用直接免疫荧光法与小鼠脑内接种法对Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗原液进行病毒灭活验证。结果共筛选出4株特异性抗SEOV L-99株杂交瘤1D5、2E3、3A4及5B7。蛋白质印迹法鉴定4株单抗均与SEOV L-99株核衣壳蛋白发生特异性反应;间接ELISA测定腹水效价为3.13×10^(-8)~1.25×10^(-7);相对亲和力顺序为1D5>3A4>2E3>5B7;纯化抗体纯度>95%;异硫氰酸荧光素标记1D5株单抗的结合比率为3.4;直接免疫荧光法与小鼠脑内接种法检测盲传3代的Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗原液,病毒灭活验证结果一致。结论成功筛选到高效价特异性抗SEOV单抗,并制备成荧光单抗,可用于Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗生产工艺中的病毒灭活验证。 展开更多
关键词 肾综合征出血热 汉城病毒 荧光单克隆抗体 灭活验证
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巴彦淖尔市肾综合征出血热疫情分析
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作者 高娜 马超 +2 位作者 杨鹏飞 李明慧 张永振 《中国热带医学》 CAS 2008年第11期1891-1893,1899,共4页
目的调查1999年后巴彦淖尔市及周围区域流行性出血热疫情呈逐年上升趋势的原因。方法对2005年春末在巴彦淖尔市临河区有HFRS病人的居民区捕获褐家鼠119只、小家鼠21只、获得鼠血条126份、9份病人血清和2份正常人血清样本。以间接免疫荧... 目的调查1999年后巴彦淖尔市及周围区域流行性出血热疫情呈逐年上升趋势的原因。方法对2005年春末在巴彦淖尔市临河区有HFRS病人的居民区捕获褐家鼠119只、小家鼠21只、获得鼠血条126份、9份病人血清和2份正常人血清样本。以间接免疫荧光和RT-PCR等流行病学检测技术,综合全市人文地理特征分析。结果恢复期病人及病人密切接触者的IgG均显示对SEO型L99株抗原的反应滴度高于HTN型76-118株,从褐家鼠筛选出9个阳性标本,对其部分S和部分M核苷酸序列进行系统发生分析,均为SEOⅠ亚型。结论汉城病毒为巴彦淖尔市流行性出血热暴发的主要病原体。褐家鼠为优势鼠种,有很高的感染率和带病毒率,是主要传染源和储存宿主。 展开更多
关键词 汉坦病毒 汉城病毒 系统进化
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河北省2株汉城病毒的遗传特征分析
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作者 郭文平 林献丹 +3 位作者 王文 李明慧 朱会宾 张永振 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期916-919,共4页
目的 对河北省2株汉城病毒(SEOV)进行基因分型及系统进化分析.方法 用RT-PCR法扩增SEOV Li株和LF18株的S与M全基因片段;利用DNAStar软件分析S与M基因片段核苷酸序列同源性;利用Phylip软件构建系统进化树.结果 Li株与LFl8株的全S基因... 目的 对河北省2株汉城病毒(SEOV)进行基因分型及系统进化分析.方法 用RT-PCR法扩增SEOV Li株和LF18株的S与M全基因片段;利用DNAStar软件分析S与M基因片段核苷酸序列同源性;利用Phylip软件构建系统进化树.结果 Li株与LFl8株的全S基因片段均由1772个核苷酸组成,开放阅读框(ORF)的位置均为43~1332核苷酸,编码429个氨基酸的核蛋白.2株病毒的M片段全基因序列均由3653个核苷酸组成,ORF的位置均为49~3450核苷酸,编码1133个氨基酸的糖蛋白前体.2株病毒的糖蛋白前体有62个半胱氨酸残基以及6个糖基化位点.2株病毒的全S、M基因片段的核苷酸序列与包括疫苗株L99、Gou3、Z37在内的已知SEOV的同源性分别为87.6%~99.2%和83.6%~97.3%.全S和全M基因片段构建的系统进化树显示2株病毒均为SEOV第Ⅲ亚型.结论 Li株和LF18株都属于SEOV,为SEOV的第Ⅲ亚型.河北省汉坦病毒的流行毒株的遗传特征与疫苗株Z37相似. 展开更多
关键词 汉城病毒 系统进化分析
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