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HBV全基因C区突变株在永生化B淋巴母细胞系中的稳定表达 被引量：2
1
作者 张明霞 周福元 +3 位作者 刁志宏 何海棠 侯金林 骆抗先 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期725-729,共5页
目的构建携带V60、G87和L97突变位点的HBV全基因组真核表达载体,转染慢性HBV感染者永生化B淋巴母细胞系(LCLs)。方法用定点突变技术将HBVp3.8Ⅱ质粒C基因区3个氨基酸V60、G87、L97进行突变(p3.8Ⅱ-V60,G87,L97),转化E.coli.XL1-Blue感... 目的构建携带V60、G87和L97突变位点的HBV全基因组真核表达载体,转染慢性HBV感染者永生化B淋巴母细胞系(LCLs)。方法用定点突变技术将HBVp3.8Ⅱ质粒C基因区3个氨基酸V60、G87、L97进行突变(p3.8Ⅱ-V60,G87,L97),转化E.coli.XL1-Blue感受态细胞扩增筛选,用限制性内切酶SacⅠ和KpnⅠ分别将野生型和突变型p3.8Ⅱ质粒进行双酶切,插入EBV-plpp真核细胞表达载体,转染LCLs,潮霉素稳定筛选后,鉴定目的基因在转染细胞能够稳定表达。结果与结论DNA序列分析表明,野型HBVDNA核心区第60、87、97位氨基酸发生了预期的突变,WesternBlotting和微粒子免疫荧光法证明转染的LCLs能稳定表达HBV抗原,证实成功构建了预期细胞模型。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 变异 真核细胞表达载体 永生化b淋巴母细胞
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2型糖尿病遗传家系永生细胞株的建立
2
作者 郑纪红 张星光 唐祖明 《医学研究杂志》 2010年第7期106-107,F0003,共3页
目的体外建立2型糖尿病家系永生化B淋巴母细胞系。方法应用EB病毒(EBV)转化技术,将2型糖尿病家系外周血B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系(LCL)。结果成功地为一个2型糖尿病家系的10名成员建立了永生细胞株,其中4名为患者。结论 2型糖... 目的体外建立2型糖尿病家系永生化B淋巴母细胞系。方法应用EB病毒(EBV)转化技术,将2型糖尿病家系外周血B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系(LCL)。结果成功地为一个2型糖尿病家系的10名成员建立了永生细胞株,其中4名为患者。结论 2型糖尿病家系永生细胞株成功建立,该细胞株保存了原来个体完整的基因组,为以后的深入研究提供随时可取的实验材料。 展开更多
关键词 2型糖尿病 家系 Eb病毒 永生化b淋巴母细胞系
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不同类型的HBsAg真核表达质粒在EBV永生化B淋巴母细胞中的表达
3
作者 梁增伟 李用国 +1 位作者 兰英华 任红 《现代临床医学生物工程学杂志》 2002年第3期167-170,共4页
目的　探讨 3种不同类型的HBsAg真核表达质粒在EBV永生化B淋巴母细胞中的表达 .方法　用 3种不同类型的质粒载体分别构建乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)真核表达质粒 (pCI-S、pMEP4 -S、pLXSN -S) ;然后用阳离子脂质体介导的转染法分别转染... 目的　探讨 3种不同类型的HBsAg真核表达质粒在EBV永生化B淋巴母细胞中的表达 .方法　用 3种不同类型的质粒载体分别构建乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)真核表达质粒 (pCI-S、pMEP4 -S、pLXSN -S) ;然后用阳离子脂质体介导的转染法分别转染正常人EBV永生化的B淋巴母细胞 ,经G4 18或HygromycinB筛选出抗性细胞克隆 ,用RT -PCR检测抗性细胞总RNA中目的基因在转录水平的表达 ;用ELISA检测抗性细胞培养上清和细胞裂解液中HB sAg的含量 .结果　 3种不同类型HBsAg重组表达质粒转染的EBV永生化B淋巴母细胞 ,在转录水平上 ,可检出HB sAgmRNA的表达 ;在蛋白水平上 ,细胞培养上清和细胞裂解液均可检出HBsAg;而以EB病毒表达质粒pMEP4 -S表达最高 ,真核表达质粒pCI-S和逆转录病毒表达质粒pLXSN -S表达HBsAg的量无明显差异 .结论　 3种不同类型的HBsAg真核表达质粒均可在EBV永生化B淋巴母细胞中稳定表达 ,EB病毒表达质粒pMEP4 -S表达的HBsAg明显高于真核表达质粒pCI-S和逆转录病毒表达质粒pLXSN -S . 展开更多
关键词 Eb病毒永生化b淋巴母细胞 乙型肝炎表面抗原 真核表达 质粒
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线粒体tRNA Thr T15943C突变可能是影响耳聋相关12s rRNA A1555G突变表型表达的新突变位点 被引量：7
4
作者 肖红利 何哲耘 +6 位作者 高应龙 阳娅玲 郑静 蔡朝阳 郑斌娇 唐霄雯 管敏鑫 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期163-168,共6页
目的通过对一个中国汉族耳聋塞系进行分析研究，探索与耳聋相关的新的继发突变位点。方法对一个中国汉族耳聋家系进行临床和分子遗传学特征分析，然后建立永生化淋巴母细胞系，从细胞倍增时间和活性氧等部分功能实验方面进行验证。结果... 目的通过对一个中国汉族耳聋塞系进行分析研究，探索与耳聋相关的新的继发突变位点。方法对一个中国汉族耳聋家系进行临床和分子遗传学特征分析，然后建立永生化淋巴母细胞系，从细胞倍增时间和活性氧等部分功能实验方面进行验证。结果家系内听力下降的母系成员在听力损失程度和听力曲线方面存在差异。该家系耳聋外显率较高，包括药物致聋的耳聋外显率为66．7％，而非药物致聋的外显率为44．4％。对先证者及母系成员进行线粒体DNA全序列分析，发现除了12s rRNA A1555G和tRNA Thr T15943C突变位点外，其余33个均为已报道的多态性位点。进一步的单体型进化树分析发现，该家系属于东亚线粒体单体型F。15943位点位于tRNA Thr茎结构上，该位点发生T-C碱基变化时会破坏tRNAn Thr 二级结构上十分保守的T-A碱基对。细胞功能实验表明，与相同F单体型的正常对照组和仅携带12s rRNA A1555G单突变家系相比，该双突变耳聋家系永生细胞系的细胞倍增时间均较其他两个对照组延长，活性氧水平则增高。结论线粒体tRNA Thr T15943C突变可能作为潜在的修饰因子与12s rRNA A1555G突变相互作用，从而增强耳聋外显率和表现度。 展开更多
关键词 耳聋 线粒体DNA 突变 tRNA 永生化淋巴母细胞系
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家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体基因新突变位点的鉴定 被引量：4
5
作者 刘燕荣 陶谦民 +7 位作者 陈君柱 陶明 郭晓纲 尚云鹏 朱建华 张芙荣 郑良荣 王兴祥 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期566-572,共7页
家族性高胆固醇血症(hypercholesterolemia familial, FH)是由于低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor, LDLR)基因突变导致的常染色体显性遗传性疾病, 临床上表现为多发黄色瘤、高水平血浆 LDL、早发性冠心病及有阳性家... 家族性高胆固醇血症(hypercholesterolemia familial, FH)是由于低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor, LDLR)基因突变导致的常染色体显性遗传性疾病, 临床上表现为多发黄色瘤、高水平血浆 LDL、早发性冠心病及有阳性家族史。本研究通过临床症状结合血脂测定诊断出一个 FH 家系, 其纯合子 FH 患者的血浆总胆固醇水平高达 19.05 mmol/L, LDL 达17.06 mmol/L, 并有黄色瘤; 而杂合子 FH 患者的血浆总胆固醇水平为 7.96 mmol/L, LDL为5.55 mmol/L, 并有心绞痛症状和黄色瘤。我们对该FH 家系患者LDLR 基因的PCR 扩增DNA片段进行测序, 发现纯合子FH 患者LDLR 基因Exon4 区域内发生了GAG683GCG 突变, 即编码 LDLR 第 683 位的谷氨酸被丙氨酸替换, 而杂合子 FH 患者该位点呈现杂合突变。此基因型与临床诊断遗传谱完全一致。同时, 利用获得Epstein-Barr(EB)病毒转化型人永生淋巴细胞株(EBV-Ls)与荧光探针DiI标记的LDL结合反应, 再通过流式细胞仪检测结果显示, 具有功能性LDLR 的EBV-Ls 细胞比例, 在纯合子FH 患者(7.02%)和杂合子FH 患者(62.64%)均比健康对照者(84.69%)低, 纯合子FH 患者LDLR 活性仅为健康对照者的8.29%、而杂合子FH 患者LDLR 活性约为健康对照者的73.96%, 前者呈现非常显著的降低? 展开更多
关键词 家族性高胆固醇血症 低密度脂蛋白受体 Epstein—barr~~ 永生化淋巴母细胞 流式细胞仪 突变位点
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瘢痕疙瘩家系外周血永生细胞库的建立 被引量：4
6
作者 宋玫 高建华 +2 位作者 严欣 刘晓军 陈阳 《中华整形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期445-447,共3页
目的建立瘢痕疙瘩家系永生细胞库,为瘢痕疙瘩发病机制的研究提供永久的研究材料。方法采用EB病毒(Epstein-Barrvirus)转化技术,把瘢痕疙瘩家系外周血B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系(LCL)。结果成功地为一个瘢痕疙瘩家系27个个体建... 目的建立瘢痕疙瘩家系永生细胞库,为瘢痕疙瘩发病机制的研究提供永久的研究材料。方法采用EB病毒(Epstein-Barrvirus)转化技术,把瘢痕疙瘩家系外周血B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系(LCL)。结果成功地为一个瘢痕疙瘩家系27个个体建立了永生细胞株,所有的细胞株冻存后复苏的成功率为100%。结论瘢痕疙瘩家系永生细胞库保存了原来个体完整的基因组,为以后的深入研究提供用之不竭的DNA资源。 展开更多
关键词 瘢痕疙瘩 家系 Eb病毒 永生化淋巴母细胞系 b淋巴细胞
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瘢痕疙瘩家系永生淋巴细胞株的建立及其染色体分析 被引量：4
7
作者 宋玫 高建华 +2 位作者 严欣 刘晓军 陈阳 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1760-1762,共3页
目的建立瘢痕疙瘩家系永生淋巴细胞株,并对该细胞株进行染色体核型分析,探讨用这种方法建立瘢痕疙瘩永生细胞库的可行性和可靠性。方法采用EB病毒转化技术,把瘢痕疙瘩家系外周血B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系(LCL)。分别对建株前... 目的建立瘢痕疙瘩家系永生淋巴细胞株,并对该细胞株进行染色体核型分析,探讨用这种方法建立瘢痕疙瘩永生细胞库的可行性和可靠性。方法采用EB病毒转化技术,把瘢痕疙瘩家系外周血B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系(LCL)。分别对建株前和建株后10、20、30、35代的细胞株进行染色体核型分析。结果成功地对瘢痕疙瘩家系27个个体建立了永生细胞株,建株后10代、20代的细胞株染色体未发现明显异常;而培养30代、35代的细胞株染色体发生数目和结构的异常。结论瘢痕疙瘩家系永生淋巴细胞株可以为以后的研究提供随时可取的实验材料,在用做遗传学分析时宜在转化早期进行。 展开更多
关键词 瘢痕疙瘩 家系 Eb病毒 永生化淋巴母细胞系 染色体
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瘢痕疙瘩家系外周血淋巴细胞永生化方法探讨 被引量：1
8
作者 严欣 高建华 +2 位作者 宋玫 刘小军 陈阳 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期22-24,共3页
目的探讨建立瘢痕疙瘩家系永生化细胞库的方法,为研究瘢痕疙瘩的发病机制、诊断和治疗提供长期的标本来源。方法采用EB病毒转化技术,分别采用新鲜血法和冻存血法,将瘢痕疙瘩家系外周血B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系。结果成功建立... 目的探讨建立瘢痕疙瘩家系永生化细胞库的方法,为研究瘢痕疙瘩的发病机制、诊断和治疗提供长期的标本来源。方法采用EB病毒转化技术,分别采用新鲜血法和冻存血法,将瘢痕疙瘩家系外周血B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系。结果成功建立了一瘢痕疙瘩家系中27个个体的永生细胞株:新鲜血法较冻存血法可明显提高一次建系成功率。结论 EB病毒转化技术可有效保存原来个体完整的基因组,为以后的相关研究提供了长期的DNA资源。新鲜血法明显优于冻存血法,更适用于永生化细胞库的建立。 展开更多
关键词 瘢痕疙瘩 家系 Eb病毒 b淋巴细胞 永生化淋巴母细胞系
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云南苗族Bardet-Biedl综合征家系外周血B淋巴母细胞系的建立 被引量：2
9
作者 沈涛 寿涛 +9 位作者 林克勤 易文 华映坤 董虹 高建梅 张进萍 王林坪 王金丽 李丽 严新民 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期33-36,共4页
目的建立云南苗族巴德一毕氏综合征（Bardet-Biedlsyndrome，BBS）家系外周血B淋巴母细胞系，为研究BBS的发病机制、诊断和治疗提供长期的标本来源。方法取1个BBS核心家系成员新鲜肝素抗凝全血，采用EB病毒转化技术，并加入环孢霉素A（c... 目的建立云南苗族巴德一毕氏综合征（Bardet-Biedlsyndrome，BBS）家系外周血B淋巴母细胞系，为研究BBS的发病机制、诊断和治疗提供长期的标本来源。方法取1个BBS核心家系成员新鲜肝素抗凝全血，采用EB病毒转化技术，并加入环孢霉素A（cyclosporineA，CyA）抑制T淋巴细胞，将B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系。结果成功建立了苗族BBS核心家系中12个个体的永生细胞株。结论EB病毒转化技术可有效保存原来个体完整的基因组，为以后的相关研究提供了长期的DNA资源。 展开更多
关键词 巴德-毕氏综合征 家系 Eb病毒 b淋巴细胞 永生化淋巴母细胞系
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