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猪圆环病毒2型Taqman荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量：8
1
作者 郑敏 黄梅清 +1 位作者 吴南洋 陈少莺 《福建农业学报》 CAS 2011年第6期941-946,共6页
参照GenBank收录的PCV2ORF2基因设计合成引物和Taqman探针,建立PCV2TaqMan荧光定量PCR检测方法,对临床确诊PCV2的病料和30份临床疑似感染PCV2的病料进行检测,同时与常规PCR检测方法进行比较。结果显示,TaqMan荧光定量PCR检测方法灵敏度... 参照GenBank收录的PCV2ORF2基因设计合成引物和Taqman探针,建立PCV2TaqMan荧光定量PCR检测方法,对临床确诊PCV2的病料和30份临床疑似感染PCV2的病料进行检测,同时与常规PCR检测方法进行比较。结果显示,TaqMan荧光定量PCR检测方法灵敏度可达4.5×103拷贝.μL-1,比普通PCR检测方法高10倍;对30份疑似感染PCV2病料的检测表明,TaqMan荧光定量PCR和普通PCR检测阳性率分别为66.7%和56.7%,两者符合率90%。应用TaqMan荧光定量PCR检测方法检测PRV、CSFV、PRRSV结果均为阴性,无交叉反应;表明该方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好等优点,可用于PCV2的流行病学调查和临床诊断。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型(PCV2) 水解探针 荧光定量PCR
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实时荧光定量PCR技术及其在几类病原体检测中的应用 被引量：7
2
作者 李海红 侯锡苗 《职业与健康》 CAS 2015年第18期2586-2589,共4页
实时荧光定量PCR是传统PCR技术与光谱技术相结合而发展起来的核酸定量技术,它具有特异性强、重复性好和PCR污染少等优点。作者对实时荧光定量PCR技术的原理、影响因素以及在临床病原体的快速检测和诊断应用方面进行了综述。
关键词 实时荧光定量PCR 水解探针 影响因素 病原体 应用
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鸡传染性法氏囊病病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：4
3
作者 王永强 祁小乐 +6 位作者 高宏雷 高玉龙 宇文延青 林欢 秦立廷 宋修庆 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期65-68,共4页
本试验根据GenBank中鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)基因组设计一对针对病毒vp5基因的引物和一条特异性Taq Man探针,建立了一种快速检测IBDV核酸载量的Taq Man荧光定量RT-PCR方法。通过对反应条件和反应体系的优化,使得该方法在108拷贝/μL... 本试验根据GenBank中鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)基因组设计一对针对病毒vp5基因的引物和一条特异性Taq Man探针,建立了一种快速检测IBDV核酸载量的Taq Man荧光定量RT-PCR方法。通过对反应条件和反应体系的优化,使得该方法在108拷贝/μL～101拷贝/μL范围内具有良好的线性关系。能够灵敏地检测初始模板中30个拷贝的病毒核酸,其灵敏度是常规RT-PCR检测方法的100倍。该方法不与其它的禽源病毒发生非特异性反应,并且具有良好的重复性,为IBDV的定性定量检测提供了有效的工具。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 荧光定量RT-PCR TAQ Man水解探针
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胎儿弯杆菌病TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：3
4
作者 赵海玲 刘慧芳 +3 位作者 杜艳芬 司微 王春来 刘思国 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期874-877,共4页
为建立胎儿弯杆菌(C.fetus)定量检测方法,本研究根据C.fetus毒力因子表面蛋白(SapA)的基因序列设计引物和一条特异的TaqMan水解探针,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测C.fetus的TaqMan荧光定量PCR方法。对该方法的特异性与敏感... 为建立胎儿弯杆菌(C.fetus)定量检测方法,本研究根据C.fetus毒力因子表面蛋白(SapA)的基因序列设计引物和一条特异的TaqMan水解探针,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测C.fetus的TaqMan荧光定量PCR方法。对该方法的特异性与敏感性研究,结果显示,该方法检测C.fetus结果均为阳性,而非C.fetus均为阴性;对带有SapA基因的阳性质粒的检测敏感性为108拷贝～102拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,可敏感地检测到模板中13个拷贝的细菌DNA,其灵敏度是常规PCR方法的100倍。该方法具有简便、快速、特异性强、敏感性高等特点。该方法为C.fetus快速检测试剂盒的研制打下了良好的基础。 展开更多
关键词 C.fetus 表面蛋白基因SapA 实时荧光PCR TaqMan水解探针
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3种qPCR检测柑桔黄龙病的灵敏度研究 被引量：3
5
作者 赵培娅 卢占军 +4 位作者 黄爱军 高玉霞 丁鹏 刘映雪 Umbreen Shahzad 《中国南方果树》 北大核心 2016年第2期33-37,共5页
把柑桔黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)阳性核酸样品进行梯度稀释后,分别采用HLBp、CQULAP两组TaqMan水解探针法和以rpl基因为目的片段的SYBR Green染料法进行HLB实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)检测,结果发现,HLB... 把柑桔黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)阳性核酸样品进行梯度稀释后,分别采用HLBp、CQULAP两组TaqMan水解探针法和以rpl基因为目的片段的SYBR Green染料法进行HLB实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)检测,结果发现,HLBp探针法可以从稀释105倍的阳性叶片核酸样品(病菌拷贝数约为60个)中检测到病原菌,高于CQULAP探针法和SYBR Green染料法。将3种qPCR检测体系用于赣州安远县、寻乌县和赣县送检的60份田间样品检测,结果发现,HLBp探针法的阳性率为86.7%,CQULAP探针的阳性率为60.0%,SYBR Green染料法的阳性率为68.3%。 展开更多
关键词 柑桔黄龙病 TaqMan水解探针 SYBR Green染料法 实时荧光定量PCR 灵敏度
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实时荧光定量RT-PCR快速检测星状病毒方法的研究 被引量：1
6
作者 徐德顺 朱晓娟 +3 位作者 陈莉萍 吴晓芳 纪蕾 沈月华 《中国卫生检验杂志》 CAS 2015年第4期504-506,515,共4页
目的建立以特异性荧光探针为特点的Taq Man荧光定量RT-PCR检测星状病毒。方法根据星状病毒基因组保守序列设计引物和探针,建立并分析荧光定量RT-PCR的重复性、特异性、敏感性;以所建立方法对128例病毒性腹泻患者粪便标本进行检测,同时... 目的建立以特异性荧光探针为特点的Taq Man荧光定量RT-PCR检测星状病毒。方法根据星状病毒基因组保守序列设计引物和探针,建立并分析荧光定量RT-PCR的重复性、特异性、敏感性;以所建立方法对128例病毒性腹泻患者粪便标本进行检测,同时以基因测序进行验证。结果所建立的荧光定量RT-PCR检测方法对星状病毒具有很好的特异性和重复性,灵敏度达102copy/μl。128例粪便标本中星状病毒的检出率为3.1%,与基因测序比对结果相符。结论构建的星状病毒荧光定量RT-PCR方法具有快速、特异且灵敏的特点,可用于临床病原诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 星状病毒 水解型杂交探针 逆转录聚合酶链反应
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