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大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及CM-Dil标记的脑内示踪 被引量:10
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作者 陈朝 黎奔 郭建文 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期946-949,953,共5页
目的建立大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离和培养方法 ,并探讨采用氯甲基苯甲酰胺(CM-Dil)对BMSCs进行体外标记和体内示踪的可行性。方法全骨髓贴壁法分离获取BMSCs,收集第3代细胞,流式细胞术检测CD34、CD44和CD29的表达率。加入CM-Di... 目的建立大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离和培养方法 ,并探讨采用氯甲基苯甲酰胺(CM-Dil)对BMSCs进行体外标记和体内示踪的可行性。方法全骨髓贴壁法分离获取BMSCs,收集第3代细胞,流式细胞术检测CD34、CD44和CD29的表达率。加入CM-Dil对BMSCs进行体外标记,荧光倒置显微镜下观察24h、21d和30d时的标记情况,通过描绘生长曲线明确CM-Dil对体外培养BMSCs生长特性的影响。制作局灶性脑缺血大鼠模型,将CM-Dil标记的BMSCs立体定向移植至大脑纹状体区,于移植后7、14、21d取脑组织制备冰冻切片,荧光显微镜下观察标记细胞在脑内的存活及分布情况。结果 BMSCs贴壁培养至第3代后呈成纤维细胞样,形态均一、排列有序,CD34、CD44和CD29表达率分别为1.71%、80.32%和84.89%。体外CM-Dil标记24h的BMSCs发出红色荧光,标记率为100%;21d后,经传代培养的BMSCs荧光强度与24h时点相近,但30d后荧光有所淬灭。标记后细胞的生长、增殖特性未受影响,形态无改变。脑组织冰冻切片发现移植的BMSCs在7、14、21d时主要位于针道附近,并向周围扩散,数量逐渐减少,呈椭圆形或不规则形。结论通过贴壁培养可以从大鼠骨髓中分离培养出较纯的BMSCs。CM-Dil染色简单、有效、无细胞毒性,体外标记BMSCs的最长时限为21d,可作为BMSCs脑内定向移植的体内示踪方法 。 展开更多
关键词 骨髓 间质干细胞移植 脑缺血 甲基苯甲酰胺 荧光染料
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CM-Dil体外标记骨髓间充质干细胞及其在烧伤大鼠模型肠组织内的示踪 被引量:5
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作者 尹飞 郭丽 +4 位作者 孟春阳 周煜博 张晗 王冬耀 杨小玉 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期211-215,I0001,I0002,共7页
目的:探讨氯甲基苯甲酰胺(CM-Dil)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)的体外标记及其在烧伤大鼠模型肠组织内的示踪能力。方法:采用贴壁培养法分离、纯化、扩增BMSCs。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)和维甲酸(RA)诱导BMSCs向... 目的:探讨氯甲基苯甲酰胺(CM-Dil)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)的体外标记及其在烧伤大鼠模型肠组织内的示踪能力。方法:采用贴壁培养法分离、纯化、扩增BMSCs。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)和维甲酸(RA)诱导BMSCs向神经元样细胞分化,免疫细胞化学法检测神经元表面标志神经细胞特异性标志微管相关蛋白-2(MAP-2)和神经元特异核蛋白(NeuN)的表达。4、6和8 mg·L-1CM-Dil标记BMSCs,CCK-8法检测不同浓度CM-Dil对细胞的毒性作用,流式细胞仪检测其标记率。选用成年雄性Wistar大鼠,制备烧伤大鼠模型,经球后静脉注射1×107个CM-Dil标记的BMSCs。大鼠烧伤2周及6个月后取肠组织,制备冰冻切片,用激光共聚焦显微镜观察BMSCs在大鼠肠组织内的定植情况。结果:免疫细胞化学结果表明,BMSCs诱导分化的神经元样细胞表达NeuN和MAP-2。CCK-8法结果表明,8 mg·L-1CM-Dil组细胞毒性显著高于对照组(P<0.05),4和6 mg·L-1CM-Dil与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。4 mg·L-1CM-Dil标记BMSCs对细胞无毒性,标记率达93.9%,细胞形态无改变。冰冻切片激光共聚焦显微镜观察,CM-Dil标记的BMSCs在大鼠烧伤后2周及6个月的肠组织内定植。结论:CM-Dil可以体外标记BMSCs,可以用于BMSCs在烧伤大鼠模型肠组织组织内的示踪研究。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 甲基苯甲酰胺 烧伤 示踪
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CM-Dil与DAPI联合标记人羊膜上皮细胞的可行性研究 被引量:1
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作者 王黎 周清 +2 位作者 杨艳 陈剑 徐锦堂 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第11期1001-1005,共5页
目的建立人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cell,HAEC)的体外培养方法,并探讨氯甲基苯甲酰胺(CM—Dil)与4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)对HAEC进行联合标记示踪的可行性。方法运用酶消化法获取HAEC,收集第2代细胞,... 目的建立人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cell,HAEC)的体外培养方法,并探讨氯甲基苯甲酰胺(CM—Dil)与4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)对HAEC进行联合标记示踪的可行性。方法运用酶消化法获取HAEC,收集第2代细胞,流式细胞仪检测CD29、CD34、CD44、CIM5和CD105的表达率,SP免疫化学法鉴定HAEC。CM—Dil与DAPI对HAEC进行体外标记,荧光倒置显微镜下观察1d、7d和14d的标记情况,台盼蓝染色检测细胞活力,CCK-8法检测细胞增殖以明确联合标记对体外培养HAEC生长特性的影响。结果HAEC贴壁培养后呈扁平多角形,CD29、CD34、CD44、CD45和CD105的阳性率分别为99.64%、2.21%、32.41%、0.84%、36.70%,细胞角蛋白Keratin阳性表达。HAEC在cM—Dil和DAPI联合标记1d后,荧光显微镜下可观察到细胞膜和细胞核分别在不同波长下呈红色和蓝色荧光,标记率为100%;14d后,经传代培养的HAEC荧光强度与1d时相近,细胞形态无改变。台盼蓝染色显示标记细胞存活率为96.8%-98.9%,CCK-8检测标记细胞的增殖力较未标记组差异无统计学意义(P〉0.05)。结论CM—Dil和DAPI可有效标记HAEC,染色简单、无细胞毒性,荧光衰减较慢,可作为HAEC的标记及示踪方法。 展开更多
关键词 人羊膜上皮细胞 甲基苯甲酰胺 4’ 6-二脒基-2-基吲哚 标记 示踪
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氯甲基苯甲酰胺标记大鼠肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞的可行性 被引量:2
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作者 訾利影 郑红光 +1 位作者 张德伟 梅煜明 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第19期3520-3524,共5页
背景:氯甲基苯甲酰胺被认为是目前较为稳定的细胞荧光标记物质。目的:观察荧光染料氯甲基苯甲酰胺标记肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞的标记效果及其对细胞形态、生长及增殖能力等生物学特性的影响。方法:采用胶原酶消化法分离、培养SD... 背景:氯甲基苯甲酰胺被认为是目前较为稳定的细胞荧光标记物质。目的:观察荧光染料氯甲基苯甲酰胺标记肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞的标记效果及其对细胞形态、生长及增殖能力等生物学特性的影响。方法:采用胶原酶消化法分离、培养SD大鼠肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞,以氯甲基苯甲酰胺细胞标记液标记第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞。结果与结论:荧光显微镜下观察氯甲基苯甲酰胺标记的肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞呈红色荧光,细胞标记率达95%以上,标记前后细胞形态、生长及增殖等方面无明显变化。经多次传代培养后,红色荧光细胞数量及强度有所下降,但细胞传代至第8代,氯甲基苯甲酰胺标记后的第15天细胞标记率仍可达50%以上。表明氯甲基苯甲酰胺可有效标记肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞,且方法简单,标记率高,对细胞无毒性,不影响细胞生物学特性。 展开更多
关键词 甲基苯甲酰胺(CM-DiI) 肾脂肪囊 脂肪间充质干细胞 标记 大鼠
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