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分子筛固定氨基酰化酶I的研究 被引量:11
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作者 宋锡瑾 王杰 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第5期617-620,共4页
以Y型分子筛为载体,分别采用吸附法、吸附-戊二醛交联法、偶联法和偶联-重氮法4种方法对氨基酰化酶I进行固定化。 研究发现偶联法获得的分子筛固定化酶的活性最高,达0.258 IUmg-1,并对分子筛固定化酶最适pH值、最适反应温度、重复使用... 以Y型分子筛为载体,分别采用吸附法、吸附-戊二醛交联法、偶联法和偶联-重氮法4种方法对氨基酰化酶I进行固定化。 研究发现偶联法获得的分子筛固定化酶的活性最高,达0.258 IUmg-1,并对分子筛固定化酶最适pH值、最适反应温度、重复使用性和米氏常数进行了测定;结果表明该载体适合氨基酰化酶I的固定,可以获得较高的酶活力,分子筛固定化酶的最适pH值、最适反应温度都有所拓宽。 展开更多
关键词 分子筛 氨基酰化 固定化 吸附 偶联
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聚氨酯泡沫塑料固定氨基酰化酶Ⅰ的研究 被引量:1
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作者 宋锡瑾 王杰 《浙江大学学报(工学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第4期562-564,594,共4页
以聚醚多元醇和甲苯二异氰酸酯(TDI)为原料,选用氨基酰化酶I作为模型酶,采用一步发泡法,将酶固定在软质聚氨酯泡沫塑料(FPUF)上,并对其进行表征.研究结果表明,在发泡过程中加入一定量的惰性蛋白质,对酶蛋白有一定的屏蔽效果,降低了被TD... 以聚醚多元醇和甲苯二异氰酸酯(TDI)为原料,选用氨基酰化酶I作为模型酶,采用一步发泡法,将酶固定在软质聚氨酯泡沫塑料(FPUF)上,并对其进行表征.研究结果表明,在发泡过程中加入一定量的惰性蛋白质,对酶蛋白有一定的屏蔽效果,降低了被TDI损伤的概率,客观上对酶分子起到保护作用,使固定化后的酶活力收率有所提高.测得FPUF对蛋白质的负载率高达100%,固定化酶活力收率为81.03%,该固定化酶的最适pH值为6.8,与最适pH值为7的酶液相比,略向酸性偏移;最适反应温度与游离酶相似,在50~70℃.将固定化酶用于拆分乙酰-DL-甲硫氨酸的试验,体现了较好的连续使用稳定性,其半衰期为404.3 min. 展开更多
关键词 聚氨酯泡沫塑料 氨基酰化 固定化 乙酰-DL-甲硫氨酸
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酶法拆分DL-蛋氨酸工艺条件的优化控制 被引量:2
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作者 邵友元 谭圣君 +1 位作者 邓冰 李卫 《食品科技》 CAS 北大核心 2006年第8期157-159,共3页
通过从猪肾中提取氨基酰化酶Ⅰ,对DL-蛋氨酸进行拆分实验研究。讨论了影响DL-蛋氨酸拆分制备L-蛋氨酸的酶促反应速度的几个主要因素,如温度、pH、缓冲体系离子强度、金属离子等。结果表明反应最适条件为:N-乙酰-DL-蛋氨酸的浓度为0.2mol... 通过从猪肾中提取氨基酰化酶Ⅰ,对DL-蛋氨酸进行拆分实验研究。讨论了影响DL-蛋氨酸拆分制备L-蛋氨酸的酶促反应速度的几个主要因素,如温度、pH、缓冲体系离子强度、金属离子等。结果表明反应最适条件为:N-乙酰-DL-蛋氨酸的浓度为0.2mol/L,酶用量700U/mmol底物,温度37℃,pH7.0,反应时间0.5h。缓冲体系中的离子对酶活有抑制作用,而低浓度的Co2+对酶活有激活作用。 展开更多
关键词 氨基酰化 DL-蛋氨酸 L-蛋氨酸 拆分
原文传递
毕赤酵母表达重组猪肾氨基酰化酶Ⅰ的纯化与鉴定 被引量:1
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作者 刘志刚 杨波 +1 位作者 胡征 邓贝 《食品与发酵科技》 CAS 2012年第4期95-99,共5页
运用毕赤氏酵母对猪源重组氨基酰化酶Ⅰ(pACY1)进行了表达,并对其酶学参数进行了测定。构建毕赤氏酵母工程菌GS115-pacy1,通过甲醇诱导表达后,进行了Phenyl-Sepharose及Q-Sepharose两步色谱纯化;对纯化后重组pACY1的动力学参数进行测定... 运用毕赤氏酵母对猪源重组氨基酰化酶Ⅰ(pACY1)进行了表达,并对其酶学参数进行了测定。构建毕赤氏酵母工程菌GS115-pacy1,通过甲醇诱导表达后,进行了Phenyl-Sepharose及Q-Sepharose两步色谱纯化;对纯化后重组pACY1的动力学参数进行测定。重组pACY1纯化后呈均一性,其纯度为98.6%;酶学参数测定结果表明,重组酶的比活力(Vmax)为280U/mg,米氏常数(Km)为0.91mM,接近天然酶对应的287U/mg和0.84mM;而酵母重组酶Tm值为74℃,高于天然酶的70℃。毕赤氏酵母表达重组pACY1的酶活性与天然酶相当,且其热稳定性优于天然酶。这为氨基酸拆分产业提供了更加优质而丰富的酶制剂。 展开更多
关键词 氨基酰化 毕赤氏酵母 表达纯化 热稳定性
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构建和评估猪氨基酰化酶Ⅰ的三维结构 被引量:1
5
作者 刘志刚 邓贝 +1 位作者 杨波 胡征 《生物信息学》 2013年第2期130-135,共6页
运用同源模建的方法构建了pACY1三维结构模型,并在能量最小化后对模型进行分子动力学模拟和结构合理性评估。同源模建生成了50个原始模型,经过PROCHECK评测后,筛选出模型A、B进行能量最小化,并得到模型A1、B1。分子动力学模拟结果表明模... 运用同源模建的方法构建了pACY1三维结构模型,并在能量最小化后对模型进行分子动力学模拟和结构合理性评估。同源模建生成了50个原始模型,经过PROCHECK评测后,筛选出模型A、B进行能量最小化,并得到模型A1、B1。分子动力学模拟结果表明模型B1二聚体结构较稳定。PROCHECK、ProSa以及WHATIF检测结果验证了模型B1属于合理性结构。得到的猪氨基酰化酶Ⅰ(pACY1)的三维结构,为研究其结构与功能关系打下基础。 展开更多
关键词 氨基酰化 同源模建 能量最小化 分子动力学模拟
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