基于PI3K/Akt/Beclin-1信号通路探析积雪草苷对OGD/R诱导损伤H9C2心肌细胞的影响 被引量：5

1

作者 曹策 李玲美 +4 位作者 韩笑 王奥奥 王紫艳 李磊 刘建勋 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1149-1155,共7页

观察积雪草苷(asiaticoside,Ass)对氧糖剥夺/再复(oxygen and glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)损伤的H9C2心肌细胞的增殖、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/Bcl-2同源结构域蛋白(Beclin-1)信号通路的干预作用,探讨其对H... 观察积雪草苷(asiaticoside,Ass)对氧糖剥夺/再复(oxygen and glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)损伤的H9C2心肌细胞的增殖、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/Bcl-2同源结构域蛋白(Beclin-1)信号通路的干预作用,探讨其对H9C2心肌细胞的影响。选用H9C2心肌细胞作为研究对象,采用细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK-8)法检测H9C2细胞活性。将H9C2细胞分成对照组、OGD/R组、Ass低浓度组(10μmol·L^(-1))、Ass高浓度组(80μmol·L^(-1))和Ass高浓度+氯喹组(80μmol·L^(-1)+50μmol·L^(-1))。对照组于正常条件下培养,其余各组在处理后进行氧糖剥夺4 h/再复2 h。酶联免疫吸附法检测细胞上清液中天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)的含量;免疫荧光观察药物对细胞数量的影响;自噬染色检测试剂盒观察细胞自噬;分子对接技术确定Ass分子靶点;蛋白质印迹法检测PI3K、Akt、选择性自噬接头蛋白(P62)、Beclin-1的表达水平。与OGD/R组相比,Ass各组在10~80μmol·L^(-1)具有保护作用,AST、LDH和CK的含量均降低,PI3K、Akt、P62和Beclin-1蛋白表达水平降低。与Ass组相比,Ass高浓度+氯喹组的AST、LDH和CK的含量均降低,PI3K、Akt、Beclin-1和P62蛋白表达水平均降低。免疫荧光显示抑制剂组、各给药组与模型组相比均具有不同程度的保护作用。综上所述,积雪草苷能够降低OGD/R诱导的H9C2心肌细胞损伤,降低AST、LDH、CK含量和P62蛋白水平,减少细胞自噬,这可能与其抑制PI3K/Akt/Beclin-1信号通路激活密切相关。 展开更多

关键词 积雪草苷 心肌细胞 自噬 PI3K/Akt/Beclin-1 氧糖剥夺/再复

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远志皂苷元对氧糖剥夺/再复氧诱导大鼠海马神经干细胞损伤的保护作用 被引量：13

2

作者 廖丹琼 张琳成 +2 位作者 蓝艳 汪家莉 张建平 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期2990-2993,共4页

目的:探讨远志皂苷元对新生大鼠海马神经干细胞(NSCs)氧糖剥夺/再复氧(OGD/R)诱导损伤的保护作用。方法:体外培养新生大鼠海马NSCs,将细胞分为对照组、OGD/R组和远志皂苷元组。OGD/R组用无糖Earle’s液于缺氧后正常培养,远志皂苷元组在O... 目的:探讨远志皂苷元对新生大鼠海马神经干细胞(NSCs)氧糖剥夺/再复氧(OGD/R)诱导损伤的保护作用。方法:体外培养新生大鼠海马NSCs,将细胞分为对照组、OGD/R组和远志皂苷元组。OGD/R组用无糖Earle’s液于缺氧后正常培养,远志皂苷元组在OGD/R基础上加远志皂苷元干预培养。MTT法测定NSCs细胞存活率,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH),DAPI染色检测NSCs细胞的凋亡,Nestin/BrdU双标染色检测NSCs细胞的增殖。结果:与对照组比较,OGD/R组NSCs的OD值、存活率、Nestin/BrdU阳性反应显著降低(P<0.01),LDH漏出率显著增加(P<0.01),DAPI核染提示OGD可诱导细胞凋亡。与OGD/R组比较,远志皂苷元组NSCs的OD值、存活率、Nestin/BrdU阳性反应的面密度及细胞数显著增多(P<0.01),LDH漏出率显著减少(P<0.01),DAPI核染显示远志皂苷元可抑制细胞凋亡。结论:远志皂苷元对OGD/R诱导大鼠海马NSCs的损伤具有改善作用。 展开更多

关键词 远志皂苷元 氧糖剥夺/再复氧 海马 神经干细胞

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白藜芦醇预处理对大鼠皮质神经元氧糖剥夺/再复氧损伤后神经元突起生长的影响 被引量：10

3

作者 唐凡人 余萍萍 +2 位作者 王莉 郭霜 杨琴 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期1-6,共6页

目的探讨白藜芦醇预处理对大鼠皮质神经元氧糖剥夺/再复氧损伤后神经元突起生长的影响。方法体外皮质神经元氧糖剥夺150min,复氧培养24 h。实验分为正常组、对照组和5μmol/L白藜芦醇预处理组。免疫荧光法鉴定神经元,细胞计数试剂盒8(CC... 目的探讨白藜芦醇预处理对大鼠皮质神经元氧糖剥夺/再复氧损伤后神经元突起生长的影响。方法体外皮质神经元氧糖剥夺150min,复氧培养24 h。实验分为正常组、对照组和5μmol/L白藜芦醇预处理组。免疫荧光法鉴定神经元,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法测定细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫荧光法和Western blotting检测微管相关蛋白2(MAP-2)和生长相关蛋白43(GAP-43)的表达,并计数神经元突起的长度和数目。结果培养细胞均高表达神经元特异性标记物MAP-2。白藜芦醇组细胞活力较对照组明显增加(0.551±0.009比0.436±0.013,P<0.01),而凋亡则明显降低(18.3%±1.3%比35.3%±1.9%,P<0.01),上调MAP-2(0.790±0.102比0.462±0.063,P<0.01)和GAP-43(0.768±0.084比0.424±0.065,P<0.01)蛋白的表达,增加神经元突起的长度(89.510±6.939比61.538±9.14,P<0.01)和数目(6.347±1.002比3.040±0.608,P<0.01)。结论白藜芦醇预处理能减轻氧糖剥夺/再复氧对神经元的损伤,促进神经元突起的生长。 展开更多

关键词 白藜芦醇 神经保护 神经突起 氧糖剥夺/再复氧 免疫印迹法 大鼠

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人参皂苷Rg1抗PC12细胞氧糖剥夺复糖复氧后损伤与自噬关系的研究 被引量：4

4

作者 黄小平 杨筱倩 +5 位作者 李静娴 丁煌 唐标 刘晓丹 唐映红 邓常清 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期1974-1978,共5页

目的:探讨人参皂苷Rg1(Rg1)对PC12细胞氧糖剥夺后再复糖复氧(OGD/R)诱导的细胞自噬性损伤的作用及作用机制。方法:以PC12细胞建立OGD/R自噬性损伤模型,观察Rg1抗OGD/R后细胞自噬性损伤的作用,并从PI3KⅠ/Akt/m-TOR和PI3KⅢ/Becline-1/Bc... 目的:探讨人参皂苷Rg1(Rg1)对PC12细胞氧糖剥夺后再复糖复氧(OGD/R)诱导的细胞自噬性损伤的作用及作用机制。方法:以PC12细胞建立OGD/R自噬性损伤模型,观察Rg1抗OGD/R后细胞自噬性损伤的作用,并从PI3KⅠ/Akt/m-TOR和PI3KⅢ/Becline-1/Bcl-2信号通路研究其作用机制。结果:Rg1能增加OGD/R诱导的PC12细胞存活、减少乳酸脱氢酶(LDH)漏出;同时抑制细胞自噬体的形成,降低胞浆LC3-Ⅱ阳性斑片的数量、下调LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值而上调p62蛋白表达。机制研究结果表明,Rg1提高了PI3KⅠ、Akt、m-TOR蛋白磷酸化水平,对PI3KⅢ、Becline-1和Bcl-2蛋白表达没有影响。结论:在缺糖缺氧2h再复糖复氧24h,细胞出现过度自噬和损伤,Rg1均能减轻OGD/R诱导的PC12细胞自噬性损伤,其机制可能与激活PI3KⅠ/Akt/m-TOR信号通路有关。 展开更多

关键词 人参皂苷RG1 PC12细胞氧糖剥夺后再复糖复氧 自噬性损伤 PI3KⅠ/Akt/m-TOR PI3KⅢ/Becline-1/Bcl-2

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波动性高糖对氧糖剥夺/再复供神经元存活的影响

5

作者 陈秋月 张丹红 +4 位作者 王莉 张叶青 陈慧红 陈富强 何泽宝 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期61-66,共6页

目的探讨波动性高糖对氧糖剥夺/再复供(OGD/R)后神经元存活的影响。方法原代培养小鼠海马神经元,待细胞融合达到80%左右时传代培养。取对数生长期细胞置于缺氧状态(37℃、5%CO2、95%N2)的培养箱中模拟细胞缺氧,将培养液更换为无糖Hank... 目的探讨波动性高糖对氧糖剥夺/再复供(OGD/R)后神经元存活的影响。方法原代培养小鼠海马神经元,待细胞融合达到80%左右时传代培养。取对数生长期细胞置于缺氧状态(37℃、5%CO2、95%N2)的培养箱中模拟细胞缺氧,将培养液更换为无糖Hank平衡盐溶液(HBSS)模拟细胞缺糖;设常糖常氧对照组。细胞缺氧缺糖处理6h后,倒置相差显微镜下观察细胞形态,用CCK-8细胞增殖检测试剂盒检测细胞活性,再进行分组实验。将细胞随机分为4组,分别采用含不同浓度葡萄糖培养基,置于常氧、5%CO2、37℃培养条件下继续培养72h,制备OGD/R模型模拟细胞缺血/再灌注。低糖对照组用含5.5mmol/L葡萄糖的培养基培养;恒定高糖组用含33.0mmol/L葡萄糖的培养基培养;波动高糖组日间用含33.0mmol/L葡萄糖的培养基培养3h,再用含5.5mmol/L葡萄糖的培养基培养2h,交替3次,夜间用含33.0mmol/L葡萄糖的培养基过夜;高渗对照组用含5.5mmol/L葡萄糖的培养基与甘露醇配制,渗透压与恒定高糖组相同,有效糖浓度与常糖常氧对照组相同,以排除高糖培养基引起的渗透压变化对结果的影响。各组细胞培养72h后,倒置相差显微镜下观察细胞形态学改变;用CCK-8试剂盒测定细胞活性;用流式细胞术测定细胞凋亡率。结果倒置相差显微镜下显示,常糖常氧对照组细胞饱满,折光性强,胞核明显,突起清晰,细胞活性较高。缺氧缺糖处理6h后,细胞皱缩,折光性差,核质不清,突起不清晰,细胞活性较常糖常氧对照组明显降低(A值:0.34±0.06比1.09±0.06,P<0.01),说明细胞氧糖剥夺(OGD)模型制备成功。更换不同浓度葡萄糖继续培养72h后,低糖对照组细胞皱缩,胞膜不完整,核质不清,坏死细胞较多;恒定高糖组细胞折光性差,大量细胞漂浮,胞核不明显;而波动高糖组细胞形态正常,细胞折光性稍降低,坏死细胞较少;高渗对照组与恒定高糖组细胞状态接近。与� 展开更多

关键词 波动性高糖 氧糖剥夺/再复供 海马神经元 存活

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环王巴明抑制sonic hedgehog信号通路对氧糖剥夺/再复氧损伤大鼠皮质神经干细胞增殖的影响

6

作者 成薇 王莉 +2 位作者 余萍萍 沈长波 杨琴 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期625-629,共5页

目的探讨环王巴明预处理抑制sonic hedgehog信号通路对体外氧糖剥夺/再复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤大鼠大脑皮质神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖的影响。方法新生SD大鼠大脑皮质神经干细胞采用... 目的探讨环王巴明预处理抑制sonic hedgehog信号通路对体外氧糖剥夺/再复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤大鼠大脑皮质神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖的影响。方法新生SD大鼠大脑皮质神经干细胞采用悬浮培养法分离纯化。第3代神经干细胞贴壁培养后氧糖剥夺150 min,复氧培养24 h。实验分为正常组、模型组及环王巴明预处理组。细胞鉴定采用免疫荧光法,细胞活力采用CCK-8法检测,细胞增殖采用Brd U法及流式细胞周期检测,Ptc-1、Smo、Gli-1蛋白表达采用Western blot检测。结果悬浮及贴壁培养细胞均高表达巢蛋白。模型组及环王巴明组细胞活力较正常组显著降低。其中,环王巴明组降低更明显(P<0.05)。模型组细胞增殖明显,Ptc-1、Smo、Gli-1蛋白表达上调,而环王巴明组细胞增殖较模型组低,Ptc-1、Smo、Gli-1蛋白表达下调(P<0.05)。结论环王巴明预处理能抑制体外氧糖剥夺/再复氧损伤后神经干细胞的增殖,提示Shh信号可能参与损伤后神经干细胞增殖的调控。 展开更多

关键词 环王巴明 预处理 神经干细胞 氧糖剥夺/再复氧 增殖 sonic HEDGEHOG

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解耦联蛋白2对氧糖剥夺/再复供神经细胞的保护作用及机制研究

7

作者 王天宇 陈秋月 +3 位作者 陈琪 张叶青 陈富强 陈云 《中国中西医结合急救杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期680-684,共5页

目的探讨解耦联蛋白2(UCP2)对氧糖剥夺/再复供(OGD/R)神经细胞的保护作用及其机制。方法原代培养小鼠海马神经元细胞,融合率达80%左右可进行传代培养。取对数期细胞,采用UCP2-干扰小RNA(siRNA)转染的神经细胞沉默UCP2表达;将转染后的细... 目的探讨解耦联蛋白2(UCP2)对氧糖剥夺/再复供(OGD/R)神经细胞的保护作用及其机制。方法原代培养小鼠海马神经元细胞,融合率达80%左右可进行传代培养。取对数期细胞,采用UCP2-干扰小RNA(siRNA)转染的神经细胞沉默UCP2表达;将转染后的细胞随机分为UCP2-siRNA组和阴性对照siRNA组(NC-siRNA组)。采用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫荧光染色鉴定细胞,倒置相差显微镜下观察细胞状态,细胞增殖采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测。用转染后的细胞制备OGD/R模型。两组分别于复氧复糖后即刻和12、24、48 h收集细胞,应用相应试剂盒检测细胞内三磷酸腺苷(ATP)、活性氧(ROS)、琥珀酸脱氢酶(SDH)的表达水平。结果倒置相差显微镜下观察显示,NC-siRNA组细胞饱满,折光性强,胞核明显,突起清晰;海马神经元细胞经UCP2-siRNA转染干扰沉默UCP2后,细胞皱缩,折光性差,核质不清,突起不清晰。MTT法检测细胞增殖情况提示,两组细胞增殖水平均随接种时间延长呈升高趋势,从接种后48 h开始,UCP2-siRNA组各时间点细胞增殖水平均明显低于NC-siRNA组,以接种96 h时最为明显〔吸光度(A)值:1.617±0.008比1.828±0.048,P<0.05〕。随复氧复糖时间的延长,两组细胞ATP和SDH表达均呈下降趋势,ROS表达呈升高趋势,其中UCP2-siRNA组复氧复糖后即刻及12、24、48 h的ATP和SDH表达水平均明显低于NC-siRNA组,ROS表达水平均明显高于NC-siRNA组,以复氧复糖48 h时最为明显〔ATP(RLU):0.33±0.09比0.50±0.11,SDH(U/mg):0.30±0.08比0.57±0.08,ROS(μmol/L):194.54±6.64比177.29±9.35,均P<0.05〕。结论UCP2对OGD/R神经细胞存在保护作用,UCP2可能通过改善能量代谢、抗氧化等方面达到对OGD/R神经细胞的保护作用。 展开更多

关键词 解耦联蛋白2 氧糖剥夺/再复供 神经细胞 保护作用

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LncRNA MCM3AP-AS1调控miR-19b-3p对OGD/R诱导的神经元细胞损伤的影响 被引量：2

8

作者 江爱民 吴强 +2 位作者 陈刚 马枭 张金武 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2023年第6期1482-1486,共5页

目的 探讨LncRNA MCM3AP-AS1对氧糖剥夺再复氧(OGD/R)诱导的神经元细胞损伤的影响及其对miR-19b-3p的调控作用。方法 采用OGD/R诱导小鼠海马神经元细胞HT22建立细胞损伤模型,si-NC、si-MCM3AP-AS1、miR-NC、miR-19b-3p mimics、si-MCM3A... 目的 探讨LncRNA MCM3AP-AS1对氧糖剥夺再复氧(OGD/R)诱导的神经元细胞损伤的影响及其对miR-19b-3p的调控作用。方法 采用OGD/R诱导小鼠海马神经元细胞HT22建立细胞损伤模型,si-NC、si-MCM3AP-AS1、miR-NC、miR-19b-3p mimics、si-MCM3AP-AS1与anti-miR-NC、si-MCM3AP-AS1与anti-miR-19b-3p分别转染入HT22细胞后再进行OGD/R处理;采用qRT-PCR法检测MCM3AP-AS1、miR-19b-3p的表达量;根据试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因实验检测MCM3AP-AS1与miR-19b-3p的靶向关系。结果 转染si-MCM3AP-AS1或转染miR-19b-3p mimics可降低OGD/R诱导的HT22细胞中MDA、TNF-α、IL-6水平和凋亡率,SOD水平明显升高(P<0.05);MCM3AP-AS1可靶向调控miR-19b-3p;共转染si-MCM3AP-AS1与anti-miR-19b-3p可提高OGD/R诱导的HT22细胞中MDA、TNF-α、IL-6的水平,细胞凋亡率明显升高(P<0.05),并可明显降低SOD水平(P<0.05)。结论 干扰MCM3AP-AS1表达可减轻OGD/R诱导的神经元细胞损伤。 展开更多

关键词 LncRNA MCM3AP-AS1 miR-19b-3p 氧糖剥夺再复氧 神经元细胞

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中风膏对氧糖剥夺/再复氧损伤大鼠海马神经干细胞增殖的影响 被引量：2

9

作者 黄生辉 巩婷 李妍怡 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期554-557,576,585,共6页

目的:研究中风膏对体外氧糖剥夺/再复氧损伤大鼠神经干细胞增殖的影响。方法:采用悬浮培养法分离纯化新生SD大鼠大脑海马神经干细胞,免疫荧光法鉴定细胞,第3代贴壁培养神经干细胞氧糖剥夺2 h后,复氧培养24 h造模。实验分为正常对照组、... 目的:研究中风膏对体外氧糖剥夺/再复氧损伤大鼠神经干细胞增殖的影响。方法:采用悬浮培养法分离纯化新生SD大鼠大脑海马神经干细胞,免疫荧光法鉴定细胞,第3代贴壁培养神经干细胞氧糖剥夺2 h后,复氧培养24 h造模。实验分为正常对照组、模型组、中风膏5%含药血清组、中风膏10%含药血清组、中风膏20%含药血清组,每组6个复孔,分1 d、3 d、5 d、7 d 4个时间点。CCK8法检测细胞活力,流式细胞仪测定细胞凋亡。结果:悬浮培养细胞均高表达巢蛋白(nestin)。在增殖试验中,正常组与模型对照组比较,模型对照组的细胞增殖能力明显降低(P<0.01);与模型对照组相比,第3日,中风膏20%治疗组的细胞增殖能力明显增强(P<0.01);实验第5日、7日,中风膏5%、10%、20%组细胞增殖能力明显增强(P<0.01)。在凋亡实验中,与正常组比较,模型对照组的细胞凋亡明显升高(P<0.01);与模型对照组相比,中风膏20%组细胞凋亡显著下降(P<0.01)。结论:中风膏含药血清对海马神经干细胞OGD/R损伤后的增殖能力有显著的修复作用,20%中风膏含药血清对干细胞损伤有治疗作用,可降低细胞凋亡。 展开更多

关键词 中风膏 海马神经干细胞 细胞培养 氧糖剥夺再复氧损伤 细胞增殖 细胞凋亡

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基于Nrf2信号通路探讨桃叶珊瑚苷对神经元氧糖剥夺再复氧损伤的保护作用

10

作者 杨芳 庞洋 +2 位作者 刘宝贵 孙锋 廉秋芳 《山西医科大学学报》 CAS 2023年第7期963-971,共9页

目的 探讨桃叶珊瑚苷(Aucubin,AU)对氧糖剥夺再复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导神经元损伤的影响和分子调控机制。方法 采用小鼠海马神经元细胞HT22构建OGD/R模型。HT22神经元细胞分为常氧组、OGD/R组、OGD/R... 目的 探讨桃叶珊瑚苷(Aucubin,AU)对氧糖剥夺再复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导神经元损伤的影响和分子调控机制。方法 采用小鼠海马神经元细胞HT22构建OGD/R模型。HT22神经元细胞分为常氧组、OGD/R组、OGD/R+50μmol/L AU组和OGD/R+100μmol/L AU组。采用Calcein AM细胞活性试剂盒检测神经元存活率。采用原位缺口末端标记(TdT-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)实验检测神经元凋亡。采用活性氧(reactive oxygen species,ROS)试剂盒检测ROS水平。采用Western blot检测Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)、B细胞淋巴瘤因子2(B-cell leukemia/lymphoma 2,Bcl-2)、核转录因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、醌氧化还原酶1(quinone oxidoreductase 1,Nqo-1)和血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,Hmox-1)的蛋白表达水平。采用荧光素酶报告基因实验检测Nrf2的转录活性。采用Nrf2抑制剂ML385验证AU是否通过激活Nrf2通路减轻OGD/R神经元损伤。将HT22神经元细胞分为常氧组、OGD/R组、OGD/R+100μmol/L AU组和OGD/R+100μmol/L AU+5μmol/L ML385组,采用荧光素酶报告基因实验检测Nrf2的转录活性,采用TUNEL实验检测神经元凋亡,采用ROS试剂盒检测ROS水平。结果 与常氧组比较,OGD/R组神经元存活率显著降低,凋亡神经元数量显著增加,Bcl-2蛋白表达显著下调,Bax蛋白表达显著上调,ROS水平显著升高(均P<0.01)。与OGD/R组比较,OGD/R+50μmol/L AU组和OGD/R+100μmol/L AU组神经元存活率显著提高,凋亡神经元数量显著减少,Bcl-2蛋白表达显著上调,Bax蛋白表达显著下调,ROS水平显著降低(均P<0.05)。与常氧组比较,OGD/R组Nrf2转录活性显著提高,Nrf2、Nqo-1和Hmox-1的蛋白表达水平显著增加(均P<0.05)。与OGD/R组比较,OGD/R+50μmol/L AU组和OGD/R+100μmol/L AU组Nrf2转录活性提高,Nrf2、Nqo-1和Hmox-1的蛋白表达水平增加(均P<0.05)。与OGD/R+100μmol/L AU组比较,OGD/R+100μmol/L A 展开更多

关键词 神经元 氧糖剥夺再复氧 桃叶珊瑚苷 脑缺血再灌注损伤 NRF2 氧化应激

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右美托咪定对氧糖剥夺再复氧下Huvecs的保护机制

11

作者 姚浩旗 汪惠文 +2 位作者 王公孝 杨天德 陈建 《重庆医学》 CAS 2022年第3期366-369,374,共5页

目的探讨右美托咪定(DEX)预处理对氧糖剥夺再复氧条件下人脐静脉内皮细胞(Huvecs)的保护机制。方法人工培养Huvecs,实验分为2部分,氧糖剥夺前细胞分3组:对照组(NC组)、DEX组、DEX+育亨宾(YHB)组。DEX组、DEX+YHB组加入50μmol/L的DEX和... 目的探讨右美托咪定(DEX)预处理对氧糖剥夺再复氧条件下人脐静脉内皮细胞(Huvecs)的保护机制。方法人工培养Huvecs,实验分为2部分,氧糖剥夺前细胞分3组:对照组(NC组)、DEX组、DEX+育亨宾(YHB)组。DEX组、DEX+YHB组加入50μmol/L的DEX和100μmol/L的YHB处理细胞2 h,DEX组加入50μmol/L的DEX处理细胞2 h。氧糖剥夺再复氧后细胞分为4组:对照组(NC组)、ogd/r组、DEX+ogd/r组、DEX+YHB+ogd/r组。DEX+ogd/r组加入50μmol/L DEX预处理2 h,DEX+YHB+ogd/r组加入50μmol/L DEX和100μmol/L YHB处理2 h,ogd/r组加入等体积的PBS,随后将3组细胞置于Hank′s液中于缺氧恒温细胞培养箱内培养12 h,之后换正常培养基置于常氧恒温培养箱内培养4 h,NC组置于正常条件下培养18 h。采用Western blot检测各组Huvecs内部AMP依赖的蛋白激酶α(AMPKα)磷酸化水平,通过Seahorse能量分析检测缺氧复氧前各组Huvecs线粒体呼吸功能。结果与NC组相比,DEX组线粒体基础氧耗速率升高(P<0.05),最大氧气消耗速率升高(P<0.05),线粒体三磷酸腺苷(ATP)产生能力升高(P<0.05);与DEX组相比,DEX+YHB组线粒体基础氧耗速率降低(P<0.05),最大氧气消耗速率降低(P<0.05),线粒体ATP产生能力降低(P<0.05);与ogd/r组相比,DEX+ogd/r组AMPKα磷酸化水平升高(P<0.05);与DEX+ogd/r组相比,DEX+YHB+ogd/r组AMPKα磷酸化水平降低(P<0.05)。结论DEX预处理激活AMPKα分子可提高Huvecs的线粒体呼吸功能,减轻氧糖剥夺再复氧条件下的损伤。 展开更多

关键词 人脐静脉内皮细胞 右美托咪定 氧糖剥夺再复氧 AMP依赖的蛋白激酶α

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PC12细胞氧糖剥夺模型细胞自噬与损伤的关系及黄芪甲苷的保护作用研究 被引量：9

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作者 黄小平 李静娴 +4 位作者 杨筱倩 丁煌 唐标 刘晓丹 邓常清 《世界中医药》 CAS 2016年第4期597-603,共7页

目的：研究PC12细胞OGD/R后自噬与损伤的经时性变化以及黄芪甲苷的干预效应。方法：探讨PC12细胞OGD/R后不同时间自噬的变化及与细胞损伤的关系,初步确定细胞发生自噬性损伤的时间点,再制作PC12细胞OGD/R自噬性损伤模型,研究黄芪甲苷抗... 目的：研究PC12细胞OGD/R后自噬与损伤的经时性变化以及黄芪甲苷的干预效应。方法：探讨PC12细胞OGD/R后不同时间自噬的变化及与细胞损伤的关系,初步确定细胞发生自噬性损伤的时间点,再制作PC12细胞OGD/R自噬性损伤模型,研究黄芪甲苷抗自噬性损伤的作用。结果：复糖复氧6~36 h后,细胞存活率降低、LDH漏出率增加;用3-MA预处理后,可使复糖复氧6~12 h细胞存活率降低、LDH漏出率增加,复糖复氧后24~36 h相反。激光共聚焦和western-blot检测显示,复糖复氧后6 h LC3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加,至24 h达高峰;p62蛋白表达随再复糖复氧时间的延长逐渐降低。黄芪甲苷对OGD 2 h复糖复氧24 h的PC12细胞自噬具有显著抑制作用,且呈剂量依赖性。结论：PC12在在OGD复糖复氧6~12 h,自噬减轻神经细胞的损伤,而在24~36 h后加重细胞损伤;黄芪甲苷可通过抑制细胞过度自噬诱导的细胞损伤,从而发挥对受损细胞的神经保护作用。 展开更多

关键词 PC12细胞 氧糖剥夺再复糖复氧 细胞自噬 细胞损伤 黄芪甲苷 保护作用

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补阳还五汤类方对氧糖剥夺再复糖复氧海马神经元细胞的体外保护作用及其机制研究 被引量：5

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作者 赵梦迪 杨洁红 +3 位作者 周惠芬 虞立 李畅 万海同 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期728-736,共9页

目的探讨补阳还五汤类方(补阳还五汤、脑心通胶囊、养阴通脑颗粒)对乳鼠氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)海马神经元细胞的体外保护作用及其机制。方法原代培养海马神经元细胞,建立海马神经元OGD/R模型,CCK-8法确定补阳还五汤类方含药血清于海... 目的探讨补阳还五汤类方(补阳还五汤、脑心通胶囊、养阴通脑颗粒)对乳鼠氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)海马神经元细胞的体外保护作用及其机制。方法原代培养海马神经元细胞,建立海马神经元OGD/R模型,CCK-8法确定补阳还五汤类方含药血清于海马神经元细胞的作用浓度。实验设对照组、模型组、补阳还五汤含药血清组(10%)、脑心通胶囊含药血清组(10%)、养阴通脑颗粒含药血清组(10%)、补阳还五汤含药血清+TAK-242组(10%,1μmol·L^-1)、脑心通胶囊含药血清+TAK-242组(10%,1μmol·L^-1)、养阴通脑颗粒含药血清+TAK-242组(10%,1μmol·L^-1)共8组。倒置相差显微镜下观察海马神经元生长形态,试剂盒检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素1β(IL-1β)的含量,Hoechst 33358染色荧光显微镜观察神经元细胞的凋亡情况,蛋白免疫印迹(Western blot)检测TLR4/NF-κB信号通路上关键蛋白的表达情况。结果补阳还五汤类方均可以降低海马神经元细胞TNF-α和IL-1β的释放量,显著降低细胞凋亡数,抑制TLR4/NF-κB信号通路中TLR4和NF-κB蛋白的表达,对OGD/R海马神经元细胞的炎症反应起到了保护作用。TLR4特异性抑制剂TAK-242的加入,阻断了该信号通路的传导,降低了补阳还五汤类方的保护作用。结论补阳还五汤类方对OGD/R致海马神经元细胞发生的炎症反应具有保护作用,其作用机制可能与TLR4/NF-κB信号通路有关,且脑心通胶囊的抗炎保护作用相对明显。 展开更多

关键词 补阳还五汤类方 海马神经元细胞 氧糖剥夺再复糖复氧 炎症 TLR4/NF-κB

原文传递

大鼠大脑皮质神经细胞氧糖剥夺再复氧(OGD/R)后自噬对凋亡的抑制作用 被引量：4

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作者 张磊 李阳 +5 位作者 胡玉奇 许晖 朱超 王旭 赵冬 贺昕 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期590-597,共8页

目的 观察大脑皮质神经元氧糖剥夺再复氧(OGD/R)后自噬对凋亡的影响。方法 取18只出生在24 h内的新生SD大鼠,采用机械分离胰蛋白酶消化法提取大脑皮质神经元培养7 d后,建立OGD/R模型,随机分为3组,正常对照组、OGD/R组、OGD/R联合巴弗洛... 目的 观察大脑皮质神经元氧糖剥夺再复氧(OGD/R)后自噬对凋亡的影响。方法 取18只出生在24 h内的新生SD大鼠,采用机械分离胰蛋白酶消化法提取大脑皮质神经元培养7 d后,建立OGD/R模型,随机分为3组,正常对照组、OGD/R组、OGD/R联合巴弗洛霉素A1(BafA1)组。采用CCK-8法和乳酸脱氢酶(LDH)实验检测细胞活力,用异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡,采用反转录PCR法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、 P62及胱天蛋白酶3(caspase-3)的mRNA表达,Western blot法检测LC3、 P62及caspase-3的蛋白表达。采用红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-LC3(RFP-GFP-LC3)腺病毒转染神经细胞检测自噬荧光强度,透射电子显微镜观察自噬体的超微结构变化。结果 与对照组相比,OGD/R组神经细胞活力明显降低,LDH释放水平明显升高,凋亡增加;LC3、 P62、 caspase-3的mRNA和蛋白表达增强;RFP荧光强度增加,自噬体增加且自噬溶酶体更加聚集,加用自噬晚期抑制剂BafA1后RFP荧光强度显著降低。结论 OGD/R诱导了神经元细胞的自噬和凋亡,抑制自噬后加重了神经细胞的损伤和凋亡。 展开更多

关键词 皮质神经元细胞 氧糖剥夺再复氧(OGD/R) 细胞凋亡 自噬 巴弗洛霉素A1(BafA1)

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