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利用正交设计优化水曲柳ISSR-PCR反应体系 被引量：115
1
作者 谢运海 夏德安 +1 位作者 姜静 林萍 《分子植物育种》 CAS CSCD 2005年第3期445-450,共6页
利用正交设计L16(45)对水曲柳ISSR-PCR反应体系的5因素(Taq酶,Mg2+,模板DNA,dNTP,引物)在4个水平上进行优化试验,PCR结果用统计软件MINITAB分析:①各因素的不同水平对PCR反应结果都有显著的影响,其中Taq酶量影响最大;②筛选出各反应因... 利用正交设计L16(45)对水曲柳ISSR-PCR反应体系的5因素(Taq酶,Mg2+,模板DNA,dNTP,引物)在4个水平上进行优化试验,PCR结果用统计软件MINITAB分析:①各因素的不同水平对PCR反应结果都有显著的影响,其中Taq酶量影响最大;②筛选出各反应因素的最佳水平,建立水曲柳ISSR-PCR反应的最佳体系(20滋l)为:Taq酶1.0U,Mg2+2.0mmol/L,模板DNA50￣200ng,dNTP0.15mmol/L,引物0.3滋mol/L。最后,对水曲柳ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火,得到最佳退火温度为58.3℃。这一优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术,研究水曲柳的地理变异提供一个标准化程序。 展开更多
关键词 PCR反应体系 水曲柳 设计优化 ISSR-PCR ISSR标记技术 MINITAB MG^2+ Taq酶 最佳反应体系 模板dna 标准化程序 正交设计 DNTP 优化试验 统计软件 退火温度 优化系统 地理变异 水平 mol 引物 果用
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茶树ISSR-PCR反应体系的建立 被引量：37
2
作者 姚明哲 王新超 +1 位作者 陈亮 杨亚军 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期172-176,206,共6页
通过优化影响茶树 ISSR-PCR 的主要参数,确立了适用于茶树的 ISSR 反应体系和扩增条件。结果表明在 20 μl 反应体系中,模板 DNA、引物、Mg++、dNTP 和 Taq DNA 聚合酶五种主要成分的最适浓度分别为 10ng、150 nmol/L、1.5 mmol/L、150 ... 通过优化影响茶树 ISSR-PCR 的主要参数,确立了适用于茶树的 ISSR 反应体系和扩增条件。结果表明在 20 μl 反应体系中,模板 DNA、引物、Mg++、dNTP 和 Taq DNA 聚合酶五种主要成分的最适浓度分别为 10ng、150 nmol/L、1.5 mmol/L、150 μmol/L、0.5 U。在扩增过程中,引物的适宜退火温度比其 Tm 值平均高 4.5℃,扩增出足量产物至少需要 30 个热循环。利用该优化反应体系和扩增条件,对 13 份不同茶树种质资源进行ISSR-PCR 扩增,扩增产物的多态性为 77.6%。引物 TRI18 构建的 ISSR 指纹图谱,可以区分 13 份茶树资源中的 12 份,分辨率达 92.3%。 展开更多
关键词 茶树 ISSR-PCR 模板dna 引物 简单重复间序列 核苷酸
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板栗叶片DNA的提取及AFLP反应体系的建立 被引量：28
3
作者 程丽莉 苏淑钗 +1 位作者 秦岭 尹伟伦 《北京农学院学报》 2005年第2期5-9,共5页
以初展开的板栗嫩叶为材料,利用改进的CTAB法,提取到高质量的板栗叶片总DNA。通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件,建立了板栗AFLP银染反应体系,得到了清晰的板栗AFLP指纹图谱。为板栗品种的分子标记和板栗品种间亲缘关系... 以初展开的板栗嫩叶为材料,利用改进的CTAB法,提取到高质量的板栗叶片总DNA。通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件,建立了板栗AFLP银染反应体系,得到了清晰的板栗AFLP指纹图谱。为板栗品种的分子标记和板栗品种间亲缘关系等研究奠定了基础。研究结果表明:①DNA模板的质量影响酶切以及后续的连接扩增反应。以初展开的嫩叶提取的板栗叶片总DNA纯度最高,所含蛋白质、小分子杂质少,改良的CTAB提取法可用于板栗AFLP分析,形成清晰的AFLP指纹。②先进行酶切后再进行酶连的反应体系比酶切酶连一起进行的体系效果更好。板栗基因组DNA最佳酶切反应体系为:模板DNA总量500ng,反应体积为25μl,10×Y+/TanqoTMBuffer2.5μl,BSA0.8μl,EcoRI5U,MseI5U。连接反应体系中T4DNA连接酶浓度2U即达最佳效果。酶切、酶连反应最佳温度均为37℃。③以板栗为材料进行AFLP标记时,E AAC+M CAA、E AAC+M CAT和E AGT+M CAT三个引物均获得较好的多态性。其中以E AGT+M CAT引物组合的扩增条带信号强度一致性好,条带分布均匀,能够得到稳定、清晰、分辨率较高的指纹谱带,可进行中国板栗的遗传变异分析。 展开更多
关键词 反应体系 叶片dna 板栗 AFLP指纹图谱 种间亲缘关系 AFLP分析 基因组dna AFLP标记 遗传变异分析 CTAB法 选择性扩增 dna模板 dna纯度 模板dna dna连接 总dna 试验条件 分子标记 质量影响 研究结果 反应体积 最佳温度 信号强度
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香蕉种质资源的AFLP鉴别与分类中DNA模板的制备 被引量：29
4
作者 易干军 于晓英 +1 位作者 霍合强 张秋明 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期345-348,共4页
在运用AFLP技术进行香蕉种质资源的鉴别与分类时,成功的关键之一是HMW基因组DNA的成功制备和避免降解,为了获得高纯度的HMW香蕉模板DNA和清晰的AFLP指纹图谱,以粉蕉为试材进行了用不同方法从不同植物体部位提取香蕉DNA的研究。结果表明... 在运用AFLP技术进行香蕉种质资源的鉴别与分类时,成功的关键之一是HMW基因组DNA的成功制备和避免降解,为了获得高纯度的HMW香蕉模板DNA和清晰的AFLP指纹图谱,以粉蕉为试材进行了用不同方法从不同植物体部位提取香蕉DNA的研究。结果表明,以香蕉未展开的幼叶、成熟叶、新根为材料提取的DNA量足以进行AFLP分析,但考虑到取材的方便性,最好选用未展开的幼叶或成熟叶;用改进后的SDS、CTAB法均可以获得HMW基因组DNA和AFLP指纹图谱,SDS法(用氯仿异-戊醇溶液抽提3次)提取的DNA量将近是CTAB法提取的DNA量的2倍,但SDS法提取的DNA纯度不如CTAB法提取的高。两种方法提取的DNA片段大小一致,大约在16kb左右。 展开更多
关键词 香蕉 AFLP 模板dna 种质资源 鉴别 提取 制备
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乌拉尔甘草ISSR-PCR反应体系优化研究 被引量：24
5
作者 佟汉文 孙群 +3 位作者 吴波 丁自勉 孙宝启 王建华 《中国农学通报》 CSCD 2005年第4期70-74,共5页
甘草是中国最大宗的药材之一,具有重要的药用、生态及工业价值。利用ISSR技术对甘草种质资源的遗传多样性进行深入研究,对甘草物种生物多样性的保护及新品种培育具有重要意义。研究了影响甘草ISSR-PCR扩增效果的一些因素,实验结果表明:... 甘草是中国最大宗的药材之一,具有重要的药用、生态及工业价值。利用ISSR技术对甘草种质资源的遗传多样性进行深入研究,对甘草物种生物多样性的保护及新品种培育具有重要意义。研究了影响甘草ISSR-PCR扩增效果的一些因素,实验结果表明:最适宜用于甘草ISSR+PCR分析的反应条件为:20μl反应体系中,1×TaqDNA聚合酶配套缓冲液(10mmol/LTris-HCL,pH9.0,50mmol/LKCL,0.1%TritonX_100,2.0mmol/LMg2+),0.8UnitTaqDNA聚合酶,0.4μmol/L引物,200μmol/LdNTP,10ng模板DNA。 展开更多
关键词 ISSR PCR反应体系 乌拉尔甘草 优化研究 TAQdna聚合酶 遗传多样性 SSR技术 新品种培育 生物多样性 PCR分析 模板dna 工业价值 种质资源 扩增效果 反应条件 DNTP HCL 缓冲液 mol 药材
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猕猴桃模板DNA的提取及RAPD-PCR最佳反应体系的建立 被引量：23
6
作者 陈万秋 李思光 +1 位作者 罗玉萍 陈少风 《生物技术通报》 CAS CSCD 2003年第3期40-43,共4页
以改良CTAB法从猕猴桃叶片中制备模板DNA ,优化了PCR热循环参数 ,建立了RAPD PCR扩增的最佳反应体系。实验结果表明 ,CTAB提取液中EDTA组分的浓度对模板提取影响很大 ,其最适浓度为 80mmol/L ;用异丙醇沉淀后不经乙醇洗涤纯化的DNA不会... 以改良CTAB法从猕猴桃叶片中制备模板DNA ,优化了PCR热循环参数 ,建立了RAPD PCR扩增的最佳反应体系。实验结果表明 ,CTAB提取液中EDTA组分的浓度对模板提取影响很大 ,其最适浓度为 80mmol/L ;用异丙醇沉淀后不经乙醇洗涤纯化的DNA不会影响扩增效果。PCR热循环参数为 :94℃预变性 5min ;94℃变性 1min ,37℃退火 1min ,72℃延伸 2min ,循环 4 0次 ;最后在 72℃延伸 6min。 展开更多
关键词 猕猴桃 模板dna 提取 RAPD-PCR 最佳反应体系
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一种供RAPD分析用蜘蛛模板DNA的快速提取方法 被引量：10
7
作者 王智 颜亨梅 +3 位作者 唐果 徐湘 尹长民 傅俊江 《生命科学研究》 CAS CSCD 1999年第3期268-275,共8页
简要介绍了一种高效、快速提取蜘蛛模板 Ｄ Ｎ Ａ 供 Ｒ Ａ Ｐ Ｄ 分析的方法⒚该方法具有快速简便、重复性好的优点，提取的 Ｄ Ｎ Ａ 无污染物产生，完全能满足 Ｒ Ａ Ｐ Ｄ
关键词 蜘蛛 dna提取 RAPD 模板dna
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实时荧光定量PCR模板DNA快速制备的方法建立与应用 被引量：11
8
作者 王忠发 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期248-250,共3页
实时荧光定量PCR技术于1996年美国Appied Biosystems公司推出，由于该技术不仅实现PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，具有特异性更强、敏感度更高、操作简便快速、可以有效解决常规PCR污染问题等优点，已广泛应用于突发公共... 实时荧光定量PCR技术于1996年美国Appied Biosystems公司推出，由于该技术不仅实现PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，具有特异性更强、敏感度更高、操作简便快速、可以有效解决常规PCR污染问题等优点，已广泛应用于突发公共卫生事件应急处置中病原体的检测。提高实时荧光定量PCR的检测速度，服务于突发公共卫生事件应急检测是当前备受关注的技术问题。实时荧光定量PCR由模板制备和PCR两部分组成，缩短模板制备时间就可提高实时荧光定量PCR的检测速度。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR技术 模板dna 快速制备 突发公共卫生事件 模板制备 污染问题 应急处置 检测
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MPN-PCR法快速定量检测海产品中致病性副溶血弧菌 被引量：9
9
作者 栾晓燕 陈吉祥 +4 位作者 李筠 杨慧 魏鉴腾 杨官品 张晓华 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1060-1061,共2页
副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是在海洋环境及江湖河口广泛分布的一种条件性致病菌，是可引起人食物中毒的病原菌。患者以沿海地区居多，是食品检验的必检项目，常规检验多不能定量检测，常规PCR、多重PCR、荧光定量PCR等检测... 副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是在海洋环境及江湖河口广泛分布的一种条件性致病菌，是可引起人食物中毒的病原菌。患者以沿海地区居多，是食品检验的必检项目，常规检验多不能定量检测，常规PCR、多重PCR、荧光定量PCR等检测技术只对反应体系中模板DNA进行定量，无法鉴别污染食品中死活菌体。 展开更多
关键词 快速定量检测 副溶血弧菌 PCR法 致病性 海产品 荧光定量PCR 多重PCR 模板dna
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单条固定线虫基因组DNA提取及18S rRNA基因PCR扩增 被引量：8
10
作者 沈锡权 杨官品 廖梅杰 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期33-36,共4页
根据线虫18S核糖体RNA基因PCR扩增效果比较了丙酮、乙醇、乙醇+0.05mol/LEDTA(pH8.0)和5%海水福尔马林4种固定剂,碱裂解和蛋白酶K处理2种单条线虫基因组DNA提取方法的优劣。用乙醇固定的样品最适合制备PCR模板DNA,而5%海水福尔马林固定... 根据线虫18S核糖体RNA基因PCR扩增效果比较了丙酮、乙醇、乙醇+0.05mol/LEDTA(pH8.0)和5%海水福尔马林4种固定剂,碱裂解和蛋白酶K处理2种单条线虫基因组DNA提取方法的优劣。用乙醇固定的样品最适合制备PCR模板DNA,而5%海水福尔马林固定的样品能最完整地保持样品形态。蛋白酶K处理获得的DNA较碱裂解获得的更适合PCR扩增。结果有助于分子生物学方法在海洋线虫分类、多样性和生态学研究中的应用。 展开更多
关键词 PCR扩增 基因组dna提取 RRNA基因 18S dna提取方法 分子生物学方法 福尔马林 蛋白酶K 模板dna 生态学研究 效果比较 乙醇固定 海洋线虫 碱裂解 PCB M基因 核糖体 固定剂 样品 多样性 海水
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兰花SRAP指纹图谱的构建 被引量：9
11
作者 张芬 李达 +4 位作者 吕长平 张力 冯岳东 许威 张宏志 《湖南农业科学》 2011年第2期129-132,共4页
以兰花的叶片、花瓣、根系为材料,用改进后的CTAB+Tris-HCl洗涤法、CTAB法、SDS+Tris-HCl洗涤法、SDS法均获得HMW基因组DNA。其中,CTAB+Tris-HCl洗涤法提取的DNA纯度较高,其操作简单,并能有效地将兰花叶中富含的酚类、多糖类物质去除,... 以兰花的叶片、花瓣、根系为材料,用改进后的CTAB+Tris-HCl洗涤法、CTAB法、SDS+Tris-HCl洗涤法、SDS法均获得HMW基因组DNA。其中,CTAB+Tris-HCl洗涤法提取的DNA纯度较高,其操作简单,并能有效地将兰花叶中富含的酚类、多糖类物质去除,使得提取出DNA的纯度、浓度都符合SRAP分析要求,取材也最方便。研究获得了兰花的清晰SRAP指纹图谱,为SRAP的相关研究提供参考。 展开更多
关键词 兰花 SRAP 模板dna 指纹图谱
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板栗RAPD影响因素的研究 被引量：1
12
作者 项艳 高健 +3 位作者 张晓渡 朱谦 朱苏文 程备久 《经济林研究》 2001年第1期13-16,共4页
稳定的 RAPD反应体系是进行 RAPD分析的关键。分别测试了模板 DNA、d NTP、Mg2 +、引物、Taq DNA聚合酶浓度和变性时间、退火温度及时间、延伸时间、循环次数等对反应结果的影响。通过实验确定了板栗最佳的 RAPD反应条件。在 5 0 μl反... 稳定的 RAPD反应体系是进行 RAPD分析的关键。分别测试了模板 DNA、d NTP、Mg2 +、引物、Taq DNA聚合酶浓度和变性时间、退火温度及时间、延伸时间、循环次数等对反应结果的影响。通过实验确定了板栗最佳的 RAPD反应条件。在 5 0 μl反应体系中含有 5 0 ng模板、0 .74μmol/L随机引物、180 μmol/L d NTP、3 U Taq DNA聚合酶、2 .0 mmo1/LMg Cl2 。反应扩增程序为 :94℃预变性5 min,40次热循环 ,每个循环包括 :94℃变性 3 0 sec,3 6℃退火 45 sec,72℃延伸 90 sec,最后 72℃终延伸 7min。按照优化的 RAPD条件进行的重复实验 ,重现性良好。 展开更多
关键词 板栗 RAPD分析 PAPD反应体系 模板dna Taqdna聚合酶浓度 变性时间 退火温度
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中国地鼠RAPD分析体系的优化 被引量：6
13
作者 宋国华 刘田福 《中国比较医学杂志》 CAS 2005年第2期84-87,共4页
目的　优化中国地鼠RAPD分析体系。方法　以30条引物对山医群体中国地鼠的两个家系基因组DNA在各种不同条件下进行RAPD ,分析比较扩增结果。结果　在下列反应体系及温度循环参数下结果较好:在2 5 μl的反应体系中含有10×buffer 2 ... 目的　优化中国地鼠RAPD分析体系。方法　以30条引物对山医群体中国地鼠的两个家系基因组DNA在各种不同条件下进行RAPD ,分析比较扩增结果。结果　在下列反应体系及温度循环参数下结果较好:在2 5 μl的反应体系中含有10×buffer 2 5 μl,dNTP 0 2mmol L ,Mg2 + 2 0mmol L ,引物0 2 μmol L ,Taq酶1 5U ,模板DNA 15ng ,扩增程序为94℃预变性3min后进入循环体系,94℃变性30s ,36℃退火5 0s ,72℃延伸1min ,4 0个循环后接7min延伸。结论　以上述反应体系及温度循环参数进行中国地鼠RAPD 。 展开更多
关键词 RAPD 中国地鼠 分析体系 优化 mol/L 基因组dna BUFFER 反应体系 MG^2+ 模板dna 分析比较 Taq酶 循环参数 预变性 引物 温度 延伸
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濒危植物刺桫椤RAPD反应体系的优化 被引量：3
14
作者 黄儒珠 王经源 《福建师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2003年第2期69-71,81,共4页
以高盐 SDS法提取濒危植物刺桫椤 ( Alsophila spinulosa)嫩叶总 DNA,进行 RAPD分析 ,分别研究了模板 DNA、引物、 d NTP、 Mg2 + 和 Taq DNA聚合酶用量以及反应体积对反应结果的影响 .筛选并建立了适合于刺桫椤 RAPD扩增的反应体系 :... 以高盐 SDS法提取濒危植物刺桫椤 ( Alsophila spinulosa)嫩叶总 DNA,进行 RAPD分析 ,分别研究了模板 DNA、引物、 d NTP、 Mg2 + 和 Taq DNA聚合酶用量以及反应体积对反应结果的影响 .筛选并建立了适合于刺桫椤 RAPD扩增的反应体系 :反应体积 1 0 μL,内含 2 ng/ μL模板 DNA,2 .0 mmol/ L Mg Cl2 ,0 .3μmol/ L引物 ,30 0μmol/ L d NTP,0 .5 u Taq DNA聚合酶 . 展开更多
关键词 刺桫椤 RAPD扩增 反应体系 反应体积 模板dna 引物 TAQdna聚合酶 遗传多样性 濒危植物
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非洲菊的AFLP指纹图谱构建 被引量：3
15
作者 吴莉英 唐前瑞 +4 位作者 李达 陈丽 贺苏华 王慧颖 尹恒 《湖南林业科技》 2008年第4期8-10,23,共4页
以非洲菊的嫩叶、老叶为材料,用改进后的CTAB—FREE洗涤法、CTAB法均获得HMW基因组DNA;CTAB—FREE洗涤法提取的DNA纯度较高,其操作简单,并能有效地将非洲菊老叶中富含的酚类、多糖类物质去除,使得提取出DNA纯度、浓度都合符AFLP分析要求... 以非洲菊的嫩叶、老叶为材料,用改进后的CTAB—FREE洗涤法、CTAB法均获得HMW基因组DNA;CTAB—FREE洗涤法提取的DNA纯度较高,其操作简单,并能有效地将非洲菊老叶中富含的酚类、多糖类物质去除,使得提取出DNA纯度、浓度都合符AFLP分析要求,取材也最方便;本研究还获得了非洲菊的清晰AFLP指纹图谱,为非洲菊的相关研究提供参考。 展开更多
关键词 非洲菊 AFLP 模板dna 指纹图谱
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香蕉RAPD反应体系的建立 被引量：5
16
作者 刘金福 潘东明 +3 位作者 代立春 陈清西 庄西卿 李英豪 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2009年第16期51-55,共5页
利用改良的CTAB方法从香蕉叶片中提取高质量的DNA。在参考一般RAPD分析反应程序的基础上,经过反复试验,确定适合香蕉PCR扩增程序为:94℃预变性5min;94℃变性1min;38℃退火1min;72℃延伸2min;循环45次;最后72℃延伸2min。PCR扩增的体系(... 利用改良的CTAB方法从香蕉叶片中提取高质量的DNA。在参考一般RAPD分析反应程序的基础上,经过反复试验,确定适合香蕉PCR扩增程序为:94℃预变性5min;94℃变性1min;38℃退火1min;72℃延伸2min;循环45次;最后72℃延伸2min。PCR扩增的体系(总体积25μl)为:模板DNA20ng,dNTP200μmol/L,10×PCRBuffer2.5μl,引物0.20μmol/L,Taq酶0.75U,ddH2O17.85μl。 展开更多
关键词 香蕉 模板dna RAPD
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山羊RAPD反应条件的研究 被引量：4
17
作者 陈祥 张勇 +3 位作者 李国红 廖正录 简承松 魏泓 《贵州农业科学》 CAS 2004年第4期11-13,共3页
以贵州山羊为材料 ,研究了MgCl2 浓度、引物浓度、dNTP浓度、模板DNA用量、TaqDNA聚合酶用量对RAPD反应的影响 ,建立了一套适合山羊的最佳RAPD反应体系。反应总体积为 2 5 μl ,MgCl2 浓度 2 .0mmol/L ,引物为 1 8.75ng ,dNTP浓度 0 .32... 以贵州山羊为材料 ,研究了MgCl2 浓度、引物浓度、dNTP浓度、模板DNA用量、TaqDNA聚合酶用量对RAPD反应的影响 ,建立了一套适合山羊的最佳RAPD反应体系。反应总体积为 2 5 μl ,MgCl2 浓度 2 .0mmol/L ,引物为 1 8.75ng ,dNTP浓度 0 .32mmol/L ,模板DNA为 1 5ng ,TaqDNA聚合酶为 2U。PCR反应程序为 :94℃ 3min ;94℃ 1min ,38℃ 1min ,72℃ 2min ,40Cycles ;72℃ 1 0min。 展开更多
关键词 山羊 RAPD 模板dna 引物浓度 MgCl2浓度 随机扩增多态dna
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快速DNA提取法在检测卡氏肺孢子虫PCR中的应用 被引量：2
18
作者 安春丽 姜丽 +1 位作者 闻功丽 田边将信 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1998年第5期71-72,91,共3页
为寻求一种适用于临床诊断的PCR方法。方法用快速PCR模板DNA制备方法提取实验大鼠肺组织，支气管肿泡灌洗液和血液中的卡氏肺孢子虫DNA，进行PCR扩增，并与传统的DNA提取法进行对比。结果两种方法收到一致的理想结果。结论快速法提取的... 为寻求一种适用于临床诊断的PCR方法。方法用快速PCR模板DNA制备方法提取实验大鼠肺组织，支气管肿泡灌洗液和血液中的卡氏肺孢子虫DNA，进行PCR扩增，并与传统的DNA提取法进行对比。结果两种方法收到一致的理想结果。结论快速法提取的DNA适用于卡氏肺孢子虫的PCR检测。将此法试用于临床病例检测，也收到如期结果，初步显示其推广应用前景。 展开更多
关键词 模板dna 卡氏肺孢子虫 聚合酶链反应
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隐孢子虫PCR检测中模板DNA提取方法比较 被引量：4
19
作者 严若峰 周金林 +1 位作者 李培英 钱应鹃 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期22-24,共3页
用 4种不同方法抽提隐孢子虫卵囊DNA作模板 ,以 1对人工合成的寡聚核苷酸为引物进行聚合酶链反应 ,均能扩增出 5 40bp特异性DNA片段 ;比较这 4种方法的操作过程和卵囊最低检测量对它们进行综合评价 ,其中 2 0 g/L二硫苏糖醇冻融法最佳 ... 用 4种不同方法抽提隐孢子虫卵囊DNA作模板 ,以 1对人工合成的寡聚核苷酸为引物进行聚合酶链反应 ,均能扩增出 5 40bp特异性DNA片段 ;比较这 4种方法的操作过程和卵囊最低检测量对它们进行综合评价 ,其中 2 0 g/L二硫苏糖醇冻融法最佳 ,具有敏感、简便、快速等优点。 展开更多
关键词 隐孢子虫 腹泻 PCR检测 模板dna 提取方法 二硫苏糖醇冻融法
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PCR-SSP法进行HLA分型的影响因素分析 被引量：2
20
作者 张德梅 《山西职工医学院学报》 CAS 2005年第1期6-7,共2页
目的 :探讨DNA模板质量、DNA聚合酶 (Taq)用量对人类白细胞抗原 (HLA)分型结果的影响 ,从而确定PCR 序列特异性引物 (PCR-SSP)技术的更加优化的扩增体系。方法 :采用PCR 序列特异性引物 (PCR-SSP)的方法 ,对山西地区 14 40 0名骨髓供者... 目的 :探讨DNA模板质量、DNA聚合酶 (Taq)用量对人类白细胞抗原 (HLA)分型结果的影响 ,从而确定PCR 序列特异性引物 (PCR-SSP)技术的更加优化的扩增体系。方法 :采用PCR 序列特异性引物 (PCR-SSP)的方法 ,对山西地区 14 40 0名骨髓供者的血样进行了人类白细胞抗原 (HLA)基因分型 ,回顾性分析DNA模板的纯度、DNA用量、DNA聚合酶 (Taq)酶用量对HLA分型结果的影响。结果 :每个PCR反应的DNA模板量在 3 0ng～ 5 0ng之间时PCR扩增效果最优 ;每个PCR反应所用Taq酶为 0.2 3U时PCR扩增效果最优。结论 :DNA模板量和Taq酶用量是使用PCR-SSP技术进行HLA分型的主要影响因素 ;模板DNA的纯度对实验结果影响不大。 展开更多
关键词 HLA分型 PCR-SSP法 影响因素分析 人类白细胞抗原(HLA) PCR-序列特异性引物 PCR-SSP技术 dna模板 dna聚合酶 PCR反应 分型结果 Taq酶 回顾性分析 模板dna 基因分型 山西地区 结果影响 用量 纯度 增效
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