5 L发酵罐中棘白菌素B发酵工艺参数优化 被引量：3

1

作者 胡晓龙 秦海彬 +3 位作者 吴旭萍 毛健 邹树平 牛坤 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期130-135,共6页

棘白菌素B(Echinocandin B,ECB)是抗真菌药物阿尼芬净的前体物质,主要通过微生物发酵合成。实验对构巢曲霉(Aspergillus nidulans ZJB09223)在5 L发酵罐中的培养条件进行了初步探索,考察了不同的搅拌桨类型、搅拌转速以及通气量等对棘... 棘白菌素B(Echinocandin B,ECB)是抗真菌药物阿尼芬净的前体物质,主要通过微生物发酵合成。实验对构巢曲霉(Aspergillus nidulans ZJB09223)在5 L发酵罐中的培养条件进行了初步探索,考察了不同的搅拌桨类型、搅拌转速以及通气量等对棘白菌素B发酵过程的影响,为实现阿尼芬净的工业化大规模生产探明基本条件。结果表明,与双折叶式搅拌桨和框式搅拌桨相比,六直叶圆盘涡轮搅拌桨更适合ECB的发酵过程。在5 L机械搅拌式发酵罐中,最佳通气量为1. 7 VVM,在发酵前6 d,搅拌转速控制为600 r/min,后9 d搅拌转速控制为400 r/min,可以提高ECB的发酵产量。在该工艺条件下ECB发酵产量为608 mg/L,比优化前提高了193%。 展开更多

关键词 构巢曲霉 棘白菌素b 搅拌桨类型 通气量 搅拌转速

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阿尼芬净合成前体棘白菌素B发酵条件优化 被引量：1

2

作者 牛坤 吴豪 +1 位作者 毛健 邹树平 《发酵科技通讯》 CAS 2017年第1期11-15,共5页

阿尼芬净为新一代棘白菌素类抗生素,其前体物质棘白菌素B(ECB)发酵单位的高低将直接影响阿尼芬净的市场前景.利用构巢曲霉发酵合成ECB,采用单因素实验考察不同参数对ECB产量的影响.结果显示:低温培养有利于ECB的合成,选择前3天37℃培养,... 阿尼芬净为新一代棘白菌素类抗生素,其前体物质棘白菌素B(ECB)发酵单位的高低将直接影响阿尼芬净的市场前景.利用构巢曲霉发酵合成ECB,采用单因素实验考察不同参数对ECB产量的影响.结果显示:低温培养有利于ECB的合成,选择前3天37℃培养,后9天25℃培养,ECB产量可达1 237 mg/L,比25℃恒温培养提高了69.9%;最佳的初始pH为6.5;添加0.6g/L ZnCl2可使ECB产量达到1 100mg/L,比初始发酵培养基提高了69.2%;前体物质脯氨酸及鸟氨酸的添加可以显著提高ECB产量,在第6天添加2g/L脯氨酸或在第3天添加2g/L鸟氨酸可使ECB产量分别提高57.4%和55.2%. 展开更多

关键词 棘白菌素b 构巢曲霉 发酵 条件优化

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棘白菌素B提取液脱色工艺 被引量：1

3

作者 邹树平 刘苗 +3 位作者 钟伟 牛坤 姚黎栋 郑裕国 《生物加工过程》 CAS 2015年第2期98-102,共5页

研究碱性阴离子交换树脂WD-6对发酵棘白菌素B(ECB)提取液的脱色效果。通过对ECB提取液和ECB标准溶液的全波长扫描,确定ECB提取液中色素的最佳吸收波长为315nm;考察了树脂添加量、脱色温度、摇床转速和脱色时间对脱色率和ECB损失率的影响... 研究碱性阴离子交换树脂WD-6对发酵棘白菌素B(ECB)提取液的脱色效果。通过对ECB提取液和ECB标准溶液的全波长扫描,确定ECB提取液中色素的最佳吸收波长为315nm;考察了树脂添加量、脱色温度、摇床转速和脱色时间对脱色率和ECB损失率的影响,获得最佳脱色工艺:树脂添加量4%(质量分数),脱色温度30℃,摇床转速150r/min,脱色时间100min。在此条件下,ECB提取液的脱色率可达88.3%,ECB损失率仅为4.8%。 展开更多

关键词 棘白菌素b 脱色 离子交换树脂

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微粒添加对棘白菌素B发酵过程的影响 被引量：1

4

作者 牛坤 胡逸博 +2 位作者 毛健 邹树平 郑裕国 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1082-1088,共7页

阿尼芬净是一种新型的抗真菌药物,能够抑制各种致病念珠菌在活体内外的活性。棘白菌素B(Echinocandin B,ECB)是合成阿尼芬净的关键前体,其发酵单位的高低直接关系到阿尼芬净的价格及市场前景。文中考察了构巢曲霉在摇瓶发酵生产ECB的过... 阿尼芬净是一种新型的抗真菌药物,能够抑制各种致病念珠菌在活体内外的活性。棘白菌素B(Echinocandin B,ECB)是合成阿尼芬净的关键前体,其发酵单位的高低直接关系到阿尼芬净的价格及市场前景。文中考察了构巢曲霉在摇瓶发酵生产ECB的过程中,添加滑石粉、Al2O3、玻璃珠等微粒对其发酵单位的影响。发现微粒的粒径和添加浓度是菌体形态和ECB产量的关键影响因素,添加20 g/L滑石粉(d50=14.2μm)和7颗玻璃珠(d=6 mm)可使ECB发酵产量分别比对照提高33.2%和41.7%,达到1 262.9 mg/L和1 344.1mg/L。结果表明微粒的添加可以显著地改善丝状微生物发酵过程中的菌丝形态,提高其产物的发酵产量,为丝状微生物发酵过程的优化提供了一种重要手段。 展开更多

关键词 棘白菌素b 构巢曲霉 微粒 发酵

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阿尼芬净关键中间体棘白菌素B的加压毛细管电色谱分析 被引量：1

5

作者 赵琪 彭沪 +1 位作者 闵涛玲 胡海峰 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期830-832,共3页

目的 建立抗真菌药物-阿尼芬净关键中间体棘白菌素B（Echinocandin B,ECB）加压毛细管电色谱分析（pCEC）方法.方法 采用流动相为乙腈-4.35mmol/L的磷酸盐缓冲盐（pH 5.5）（52∶48,V/V）,等度洗脱,流速为0.08mL/min,紫外检测波长212nm... 目的 建立抗真菌药物-阿尼芬净关键中间体棘白菌素B（Echinocandin B,ECB）加压毛细管电色谱分析（pCEC）方法.方法 采用流动相为乙腈-4.35mmol/L的磷酸盐缓冲盐（pH 5.5）（52∶48,V/V）,等度洗脱,流速为0.08mL/min,紫外检测波长212nm,分离电压-15kV.结果 各组分在0.015～3.84mg/mL范围内线性良好;检出限和定量限分别为15和30μg/mL;日间和日内精密度均小于5％;加样回收率均高于98％.结论 该方法简单方便,重现性好,准确可靠,回收率较高,为阿尼芬净中间体ECB的分析和质量控制提供了新的方法. 展开更多

关键词 加压毛细管电色谱 棘白菌素b 阿尼芬净 抗真菌

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棘白菌素B高产菌株Aspergillus delacroxii转化体系的构建与优化

6

作者 闵涛玲 高苹 +2 位作者 熊磊 陈昌发 胡海峰 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期981-986,共6页

Aspergillus delacroxii SIPI-W15是棘白菌素B的高产菌株,目前尚缺少相关遗传操作信息,极大地限制了其代谢机制和分子机制的研究。本研究考察了Asp. delacroxii SIPI-W15 转化过程中的主要影响因素,建立了高效的遗传转化体系: Agrobacte... Aspergillus delacroxii SIPI-W15是棘白菌素B的高产菌株,目前尚缺少相关遗传操作信息,极大地限制了其代谢机制和分子机制的研究。本研究考察了Asp. delacroxii SIPI-W15 转化过程中的主要影响因素,建立了高效的遗传转化体系: Agrobacterium tumefaciens AGL-1作为介导菌株、新鲜孢子浓度1×10^6cuf/ml、农杆菌浓度OD600 0.7、24 ℃共转化3d。在最佳转化体系下,转化效率可达96个转化子(以10^6个分生孢子计),外源基因可以稳定遗传。基于上述遗传转化技术,获得棘白菌素B产量提高22%的转化子(产量达到2468mg/L),为进一步研究棘白菌素B 生物合成的功能基因和提高其产量提供了有力手段。 展开更多

关键词 棘白菌素b ASPERGILLUS delacroxii 农杆菌介导转化

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棘白菌素B衍生物的分离纯化与结构解析

7

作者 闵涛玲 王元清 胡海峰 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期215-220,共6页

棘白菌素B在酸性甲醇溶液中不稳定,生成3个衍生物。经大孔吸附树脂分离纯化,分别测定其UV、MS和NMR等图谱数据,完成了3个衍生物的结构解析。初步判断一个衍生物结构与棘白菌素H结构一致,另两个衍生物为新化合物。纸片法检测结果表明这3... 棘白菌素B在酸性甲醇溶液中不稳定,生成3个衍生物。经大孔吸附树脂分离纯化,分别测定其UV、MS和NMR等图谱数据,完成了3个衍生物的结构解析。初步判断一个衍生物结构与棘白菌素H结构一致,另两个衍生物为新化合物。纸片法检测结果表明这3个化合物具有与棘白菌素B不同的体外抗真菌活性。 展开更多

关键词 棘白菌素b 衍生物 分离纯化 结构解析

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棘白菌素B脱酰基酶工程菌的构建及酶学性质研究 被引量：3

8

作者 邹树平 廖思行 +2 位作者 牛坤 郑裕国 沈寅初 《浙江工业大学学报》 CAS 北大核心 2016年第1期99-103,共5页

棘白菌素B(ECB)脱酰基酶能选择性催化水解脱去ECB酰基侧链,得到ECB母核,可用于合成新型抗真菌药物阿尼芬净.从实验室保藏的犹他游动放线菌(Actinoplanes utahensis)ZJB-0801基因组中克隆到ECB脱酰基酶基因,并将其构建入表达质粒pSET152... 棘白菌素B(ECB)脱酰基酶能选择性催化水解脱去ECB酰基侧链,得到ECB母核,可用于合成新型抗真菌药物阿尼芬净.从实验室保藏的犹他游动放线菌(Actinoplanes utahensis)ZJB-0801基因组中克隆到ECB脱酰基酶基因,并将其构建入表达质粒pSET152,通过接合转移的方法将表达质粒导入到天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)A3中,构建可以高效表达ECB脱酰基酶的工程菌.对重组ECB脱酰基酶的酶学性质进行了考察,结果表明:重组酶的最适反应温度为45℃,最适pH为7.5.Zn^(2+),Mg^(2+),Mn^(2+),Fe^(2+)对重组酶有显著的激活作用,而Cu^(2+),Co^(2+)具有显著地抑制作用.动力学参数分析表明:该酶对底物ECB的K_m和V_(max)分别为0.356mmol/L和397μmol/(min·mg). 展开更多

关键词 棘白菌素b脱酰基酶 天蓝色链霉菌 重组表达 酶学性质

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棘白菌素B脱酰基酶的研究 被引量：2

9

作者 崔建卫 邹树平 郑裕国 《生物技术通讯》 CAS 2016年第4期592-595,共4页

棘白菌素B脱酰基酶是合成阿尼芬净重要中间产物棘白菌素B母核的关键酶。本文综述了近年来国内外学者对该酶的成熟机制、酶学性质、重组表达及生物催化应用等方面的相关研究进展。

关键词 棘白菌素b脱酰基酶 重组表达 生物催化

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棘白菌素B母核关键杂质的制备与鉴定 被引量：1

10

作者 李敏 张炜 +3 位作者 任风芝 冷凤 谢新宇 郭栋 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期259-263,共5页

采用制备液相色谱技术对棘白菌素B母核粗品中的关键杂质进行分离纯化,并通过质谱和核磁共振波谱分析鉴定杂质结构。制备的2个棘白菌素B母核杂质(化合物M和N)与棘白菌素B母核具有相同的主体结构,分别为母核F位和E位氨基酸残基的去甲基产... 采用制备液相色谱技术对棘白菌素B母核粗品中的关键杂质进行分离纯化,并通过质谱和核磁共振波谱分析鉴定杂质结构。制备的2个棘白菌素B母核杂质(化合物M和N)与棘白菌素B母核具有相同的主体结构,分别为母核F位和E位氨基酸残基的去甲基产物,为阿尼芬净的杂质研究和质量控制提供了技术支持。 展开更多

关键词 棘白菌素b母核 阿尼芬净 制备液相色谱 杂质 结构鉴定

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棘白菌素B母核的分离纯化工艺研究 被引量：1

11

作者 史洲洋 陈舟舟 +3 位作者 李继安 林惠敏 沈剑锋 陈代杰 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期660-664,共5页

目的研究大孔吸附树脂结合亲水性C18硅胶填料分离纯化棘白菌素B母核(ECBN)的工艺,有效去除色素及其他杂质,获得高纯度ECBN。方法用HPLC检测方法,以ECBN的吸附量和洗脱率为指标,考察大孔吸附树脂和亲水性C18填料分离纯化ECBN的吸附性能... 目的研究大孔吸附树脂结合亲水性C18硅胶填料分离纯化棘白菌素B母核(ECBN)的工艺,有效去除色素及其他杂质,获得高纯度ECBN。方法用HPLC检测方法,以ECBN的吸附量和洗脱率为指标,考察大孔吸附树脂和亲水性C18填料分离纯化ECBN的吸附性能和洗脱参数。结果分离纯化ECBN的最佳吸附剂为大孔吸附树脂XAD-18和亲水性C18填料,洗脱剂分别为8%乙醇和3%甲醇。此工艺路线获得的成品纯度大于95%,总收率为65%。结论该分离纯化方法为国内首次报道,工艺简单,使用有机溶剂少,分离效果好,适用于工业化生产。 展开更多

关键词 棘白菌素b母核 大孔吸附树脂 亲水性C18填料 分离纯化

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棘白菌素B新型衍生物的设计合成及体外抗真菌活性 被引量：1

12

作者 朱冰 东圆珍 +1 位作者 张喜全 马洁 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期704-712,共9页

本研究以棘白菌素B母核(ECBN)为基础,在侧链中引入了多肽结构,并探索出了棘白菌素B新型衍生物的固相及液相联合合成的路线。以不同芳香性氨基酸、极性带正电荷氨基酸以及脂肪酸为原料合成了14个新的棘白菌素B衍生物,分别对其进行了抗真... 本研究以棘白菌素B母核(ECBN)为基础,在侧链中引入了多肽结构,并探索出了棘白菌素B新型衍生物的固相及液相联合合成的路线。以不同芳香性氨基酸、极性带正电荷氨基酸以及脂肪酸为原料合成了14个新的棘白菌素B衍生物,分别对其进行了抗真菌活性、溶血毒性、水溶性评估,筛选得到了ECBN-[3-(2-萘基)-D-丙氨酸]-(2,4-二氨基丁酸)-月桂酸(ECBN-D-2-Nal-Dab-C12,13)。相比于阿尼芬净,13在保留抗真菌活性的同时,溶血毒性大大降低,并且水溶性得到极大改善,时间-杀菌曲线也证实二者对白念珠菌和克柔念珠菌有相似的杀菌效果。因此,13可作为候选化合物进一步研究和开发。 展开更多

关键词 棘白菌素b衍生物 抗真菌药 固-液相合成 抗真菌活性 水溶性

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