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假体周围骨溶解组织中磨损颗粒的提取与分析 被引量：6
1
作者 严孟宁 戴尅戎 +2 位作者 贾庆卫 李宏斌 王晓庆 《临床骨科杂志》 2005年第1期70-73,共4页
目的观察、分析假体周围骨溶解组织中磨损颗粒的分布情况,为体外及体内磨损试验提供颗粒.方法从一个临床严重骨溶解的髋关节翻修病例术中的骨溶解组织,采用强碱消化法提取磨损颗粒,密度梯度离心法纯化金属颗粒直径,通过组织学观察颗粒... 目的观察、分析假体周围骨溶解组织中磨损颗粒的分布情况,为体外及体内磨损试验提供颗粒.方法从一个临床严重骨溶解的髋关节翻修病例术中的骨溶解组织,采用强碱消化法提取磨损颗粒,密度梯度离心法纯化金属颗粒直径,通过组织学观察颗粒在组织中的分布,等离子光谱分析仪(ICP-AES)、偏光镜分析颗粒成分,扫描电镜、颗粒计数仪观察颗粒大小形态.结果磨损颗粒在骨溶解组织中分布不均匀;磨损颗粒主要成分为钛合金、聚乙烯、含硫酸钡骨水泥;组织中颗粒大小变化较大,聚乙烯颗粒直径为0.13～37.00 μm,钛合金颗粒直径为0.05～49.30 μm,金属颗粒密度梯度离心后平均直径为0.85 μm ,约90%颗粒直径在0.50～1.00 μm.结论通过强碱消化及密度梯度离心提取、纯化假体周围骨溶解组织中磨损颗粒的方法可提供符合试验需要的金属颗粒. 展开更多
关键词 骨溶解组织 磨损颗粒 梯度离心法 钛合金
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人参根外泌体的提取、表征及其对多柔比星诱导的心肌损伤保护作用机制 被引量：5
2
作者 刘恬佳 邱智东 +3 位作者 邱野 陈亚君 胡爽 刘达 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期3514-3521,共8页
目的研究人参Panax ginseng根外泌体提取、表征及其体外心肌保护活性。方法采用差速离心法与蔗糖梯度离心法提取人参根外泌体;通过透射电子显微镜(TEM)和纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)技术对外泌体进行鉴定;采... 目的研究人参Panax ginseng根外泌体提取、表征及其体外心肌保护活性。方法采用差速离心法与蔗糖梯度离心法提取人参根外泌体;通过透射电子显微镜(TEM)和纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)技术对外泌体进行鉴定;采用液相色谱-质谱联用(LC-MS)法对人参根外泌体进行蛋白质组学分析;通过SmallRNA测序分析人参根外泌体中SmallRNA种类;建立H9C2心肌细胞损伤模型,利用CCK-8法检测细胞活力;以最刘质量浓度的人参根外泌体处理H9C2细胞,应用Hoechst染色和JC-1染色考察细胞凋亡率;蛋白质免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白。结果 TEM图中清晰可见人参根外泌体呈茶托状的双层膜结构;NTA粒径分析检测到112.7nm的人参根外泌体占总人参根外泌体的92.7%;蛋白组学分析鉴定到5585个蛋白;SmallRNA测序鉴定到miRNA、tRNA、snRNA、rRNA、snoRNA 5种SmallRNA;体外实验结果显示,与对照组相比,模型组细胞活力下降,人参根外泌体给药组呈剂量依赖性地使细胞活力升高,细胞凋亡率降低;Western blotting结果显示凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白水平下降;Bax、Cyt C的蛋白水平升高。结论首次报道了人参根外泌体的提取工艺及表征,并发现人参根外泌体对多柔比星诱导的心肌损伤具有一定的保护作用。 展开更多
关键词 人参 外泌体 多柔比星 H9C2细胞 心肌损伤 细胞凋亡 差速离心法 梯度离心法 Small RNA
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小鼠Kupffer细胞分离及细胞培养 被引量：4
3
作者 朱荣涛 魏思东 +1 位作者 李培志 龚建平 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第6期484-488,共5页
目的 采用在体胶原酶灌注、不连续密度梯度离心、选择性贴壁3步法分离Kupffer细胞（Kupffer cells,KCs）,探讨其在分离小鼠KCs的应用及其对KCs生物活性的影响.方法 根据原位灌注和梯度离心方法不同随机分为4组：无胶原酶原位灌注＋3层... 目的 采用在体胶原酶灌注、不连续密度梯度离心、选择性贴壁3步法分离Kupffer细胞（Kupffer cells,KCs）,探讨其在分离小鼠KCs的应用及其对KCs生物活性的影响.方法 根据原位灌注和梯度离心方法不同随机分为4组：无胶原酶原位灌注＋3层梯度离心组（A）、无胶原酶原位灌注＋双层梯度离心组（B）、胶原酶原位灌注＋3层梯度离心组（C）和胶原酶原位灌注＋双层梯度离心组（D）.采用F4/80（BM8）免疫染色及吞墨实验判断细胞纯度和功能、台盼蓝拒染实验判断细胞的活力,探讨不同方法KCs分离的效果及细胞活性.结果 刚分离的KCs细胞近似圆形,接种l h后收获细胞纯度较高,但细胞得率相对较低.培养4 h后KCs得率相对较高,培养28 d仍能存活.免疫荧光可显示分离的为KCs,台盼蓝染色显示各组细胞的活力均在90 %左右,在体胶原酶灌注和双层梯度离心可以增加KCs的得率,双层梯度离心法可以增加分离KCs的纯度.结论 在体胶原酶灌注对提高KCs得率较为重要,在体胶原酶灌注、不连续密度梯度离心、选择性贴壁3步法分离小鼠KCs的的方法简便、高效、稳定,培养的KCs具有良好的细胞生物学性状. 展开更多
关键词 KUPFFER细胞 细胞分离 梯度离心法 细胞原代培养
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小鼠神经组织线粒体提取方法研究 被引量：4
4
作者 高永超 张龙飞 +1 位作者 楚方旋 王来 《河南大学学报（自然科学版）》 CAS 2018年第2期202-206,共5页
采用两次梯度离心的方法提取原代皮层神经元、皮层和海马组织线粒体,通过健那绿B染色、Western blot方法检测所提取线粒体的纯度.健那绿B染色结果显示,在600g离心力的情况下,经过第一次梯度离心,第二次梯度离心在1 000g离心力的情况下进... 采用两次梯度离心的方法提取原代皮层神经元、皮层和海马组织线粒体,通过健那绿B染色、Western blot方法检测所提取线粒体的纯度.健那绿B染色结果显示,在600g离心力的情况下,经过第一次梯度离心,第二次梯度离心在1 000g离心力的情况下进行,所提取线粒体结构最为完整,纯度最好,几乎不含细胞碎片;而在3 000g离心力情况下,线粒体纯度最低,且含有较多的细胞碎片.Western blot方法检测结果显示,1 000g离心力情况下线粒体的纯度最高.以上研究结果表明,采用梯度离心法提取神经组织线粒体时,第二次梯度离心的离心力越低提取的线粒体纯度越高. 展开更多
关键词 神经组织 线粒体 梯度离心法
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3种精子优化法处理精子行宫腔内人工授精的结局分析 被引量：3
5
作者 闵保华 罗亚宁 +2 位作者 王晓红 杨艳红 李丽 《陕西医学杂志》 CAS 北大核心 2006年第2期148-150,共3页
目的:探讨洗涤上游法、Percoll非连续梯度离心法、Isolate密度梯度法三种方法优化处理精液后的临床效果,以期针对不同的不孕原因和精液质量选择合适的优化精子方法,达到较好妊娠率。方法:采用促排卵周期,用阴道B超结合尿LH峰监测卵泡发... 目的:探讨洗涤上游法、Percoll非连续梯度离心法、Isolate密度梯度法三种方法优化处理精液后的临床效果,以期针对不同的不孕原因和精液质量选择合适的优化精子方法,达到较好妊娠率。方法:采用促排卵周期,用阴道B超结合尿LH峰监测卵泡发育及成熟情况,并于优势卵泡直径达18mm,子宫内膜≥8mm,肌注人绒膜性腺激素(HCG)5000～10000IU后34～36h或排卵后12h内用优化处理的精子悬液注入宫腔,黄体期给予黄体酮20mg/d支持治疗。结果:洗涤上游法宫腔内授精52周期,妊娠7例,周期妊娠率13.5%;Percoll非连续梯度离心法57周期,妊娠10例,周期妊娠率17.5%;Isolate密度梯度法56周期,妊娠11例,周期妊娠率19.6%。结论:Percoll非连续梯度离心法和Isolate密度梯度法周期妊娠率明显优于洗涤上游法。 展开更多
关键词 授精 人工 精子荻能 妊娠率 宫腔内人工授精 优化精子 结局分析 PERCOLL 促排卵周期 梯度离心法 密度梯度法
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梯度离心法在肿瘤药物敏感性试验中的应用研究 被引量：3
6
作者 谢晓东 李小民 +1 位作者 蒋芹 刘淑华 《淮海医药》 2002年第2期95-96,共2页
目的　研究梯度离心法在肿瘤细胞药物敏感性试验中的应用。方法　采用淋巴细胞分离液梯度离心法分离纯化癌细胞 ,MTT比色法测定 4 5例体外原代癌细胞对 8种常用化疗药物的敏感性。结果　采用梯度离心法收集纯化癌细胞 ,癌细胞获得百分率... 目的　研究梯度离心法在肿瘤细胞药物敏感性试验中的应用。方法　采用淋巴细胞分离液梯度离心法分离纯化癌细胞 ,MTT比色法测定 4 5例体外原代癌细胞对 8种常用化疗药物的敏感性。结果　采用梯度离心法收集纯化癌细胞 ,癌细胞获得百分率为 94 .6 5± 2 8.4 7,药敏阳性率为 71.11% ,与传统方法相比 ,差异有非常显著性 (P<0 .0 1)。结论　梯度离心法 MTT肿瘤体外药敏试验是一种良好的实验方法 。 展开更多
关键词 肿瘤 微生物敏感性试验 梯度离心法 MTT比色法 药敏试验 抗癌药 化学疗法
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F344大鼠树突状细胞的分离与培养 被引量：2
7
作者 刘红耀 叶章群 +6 位作者 庞东梓 米振国 史天良 李梦强 张旭 王东文 宁松毅 《山西医药杂志》 CAS 2005年第5期362-364,共3页
目的　研究F344大鼠树突状细胞(DC)的分离与培养方法。方法　取大鼠四肢骨骨髓细胞悬液,经梯度离心法得到DC ,加入白细胞介素(IL) - 4、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM CSF) ,全RPMI 16 4 0培养,经倒置显微镜、电镜及流式细胞仪鉴定细... 目的　研究F344大鼠树突状细胞(DC)的分离与培养方法。方法　取大鼠四肢骨骨髓细胞悬液,经梯度离心法得到DC ,加入白细胞介素(IL) - 4、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM CSF) ,全RPMI 16 4 0培养,经倒置显微镜、电镜及流式细胞仪鉴定细胞纯度及成熟度。结果　细胞培养的第8天,经倒置显微镜、电镜观察DC出现典型形态;流式细胞仪检测第4天OX6 2阳性率为8 .92 %、主要组织相容性复合物(MHC) Ⅱ为2 0 . 90 %、CD86为16 98% ;第8天OX6 2阳性率为5 8. 0 7%、MHC Ⅱ为6 0 . 4 9%、CD86为6 2 . 94 % ;第15天OX6 2阳性率为84 . 6 8%、MHC Ⅱ为88 .0 3%、CD86为6 2 . 80 %。结论　用该方法得到的DC纯度可达80 %以上,为进一步研究其在肿瘤研究中的应用打下基础。 展开更多
关键词 树突状细胞 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 大鼠 分离 主要组织相容性复合物 流式细胞仪检测 倒置显微镜 MHC-Ⅱ CD86 梯度离心法 白细胞介素 阳性率 培养方法 细胞悬液 细胞培养 电镜观察 肿瘤研究 四肢骨 DC 成熟度 步研究
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Percoll密度梯度离心法分离牛、羊精子试验 被引量：1
8
作者 郭志勤 丁红 +5 位作者 陈静波 孙永新 王绍允 张秀珍 宋晓兰 张华 《草食家畜》 1993年第5期18-21,共4页
试验采用Percoll密度梯度离心法对牛、羊精子进行分离,试验结果表明,当温度为4℃、15℃,用250克离心25分钟,分离牛冻精,精子回收在3-7层较密集,占回收精子总数的85.1％-87.4％,8-9层精子占到8.8％-9.14％,从第6层精子活率明显提高,畸形... 试验采用Percoll密度梯度离心法对牛、羊精子进行分离,试验结果表明,当温度为4℃、15℃,用250克离心25分钟,分离牛冻精,精子回收在3-7层较密集,占回收精子总数的85.1％-87.4％,8-9层精子占到8.8％-9.14％,从第6层精子活率明显提高,畸形率显著降低,第8层低于10％,第9层无畸形精子,两种温度间差异不显著。通过试验选择出牛冻精在室温条件下适宜的分离条件,离心力250克,离心时间15分钟,取8、9层精液给生产母牛及超排供体牛输精,获得6头犊牛,其中4头母犊、2头公犊。 绵羊鲜精在室温15℃-18℃,250克离心15-20分钟分离条件下,得到清晰且较均匀的分离层,分离精子的回收率、畸形率、活力与分离牛冻精结果类同。母羔率75％(18/24)。用注射器作为分离管,直接从底部取第9层精液,母羔率达76.5％(13/17)。 展开更多
关键词 牛 羊 精子 梯度离心法 人工授精
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反义金属蛋白酶抑制因子-1对肝星形细胞的影响 被引量：1
9
作者 刘文滨 王吉耀 +4 位作者 杨长青 王逸青 蒋炜 贺伯明 郭津生 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期7-10,共4页
目的　探讨体外构建的反义金属蛋白酶组织抑制因子 (TIMP 1)表达质粒在大鼠肝星形细胞 (HSC)中的表达情况及对HSC活化后Ⅰ、Ⅲ型胶原量的影响。方法　双酶灌注和梯度离心法分离正常大鼠HSC ,培养 7～ 10d后活化为肌成纤维样母细胞表型... 目的　探讨体外构建的反义金属蛋白酶组织抑制因子 (TIMP 1)表达质粒在大鼠肝星形细胞 (HSC)中的表达情况及对HSC活化后Ⅰ、Ⅲ型胶原量的影响。方法　双酶灌注和梯度离心法分离正常大鼠HSC ,培养 7～ 10d后活化为肌成纤维样母细胞表型。应用巢式RT PCR和基因重组技术构建能在真核细胞中表达的反义TIMP 1质粒并测序鉴定。应用脂质体介导重组质粒和 pcDNA3空质粒转染HSC ,经含 40 0 μg/mlG418的DMEM培养液筛选 3～ 4周 ,另设立空白对照组。Northernblot和Westernblot检测筛选后的HSC中TIMP 1表达情况 ;用FITC标记的Ⅰ型胶原为底物测定培养上清液内间质胶原酶活性 ;应用Westernblot方法对HSC中Ⅰ、Ⅲ型胶原进行半定量分析。结果　外源重组质粒能较大程度地抑制活化HSC中TIMP 1的表达 ,而pcDNA3空质粒和空白对照组则无类似结果。TIMP 1/GAPDH比值分别为 0 .67,2 .41和 2 .97(mRNA水平 ,P <0 .0 5)。TIMP 1/ β actin比值分别为0 .3 1,0 .98和 1.3 2 (蛋白质水平 ,P <0 .0 5)。外源重组质粒转染显著提高了间质胶原酶活性 ,酶活性分别为 0 .3 0 49,0 .14 11和 0 .1196(P <0 .0 5)。HSC中Ⅰ、Ⅲ型胶原量明显减少。Ⅰ型胶原 / β actin比值分别为 0 .63 ,1.78和 1.92 (P <0 .0 5)。Ⅲ型胶原 / β 展开更多
关键词 反义金属蛋白酶抑制因子-1 肝星形细胞 胶原 酶灌注法 梯度离心法 基因重组技术 细胞外基质 肝纤维化
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用硅胶梯度离心法从阴道内容物中分离精子
10
作者 高取 肖明松 《刑事技术》 1980年第4期66-68,共3页
采用聚乙烯吡咯烷酮硅胶进行密度梯度离心,使人精子与阴道上皮细胞分离。本法系35000g离心1小时,在1.130—1.142克/毫升密度范围内收集精子。
关键词 梯度离心法 密度梯度离心 内容物 密度范围 密度梯度法 PERCOLL 生物学特性 塑料试管 使人 血型物质
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Isolate液处理异常精液行宫腔内人工授精的应用评价 被引量：1
11
作者 陈新华 顾晓琴 +1 位作者 宦叶玫 曾汉东 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2005年第11期864-865,共2页
关键词 异常精液 人工授精 上游法 梯度离心法
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重症肌无力患者胸腺树突状细胞的增殖改变研究 被引量：1
12
作者 赵云平 王如文 +1 位作者 蒋耀光 刘朝普 《中国临床康复》 CSCD 2004年第5期862-863,T002,共3页
目的:比较正常人胸腺和重症肌无力胸腺树突状细胞(thymicdendriticcells,TDC)体外培养的差异,为研究胸腺树突细胞在重症肌无力抗原提呈中作用奠定基础。方法:正常成人、幼儿和重症肌无力(MyastheniaGravis,MG)胸腺组织,采用梯度离心法... 目的:比较正常人胸腺和重症肌无力胸腺树突状细胞(thymicdendriticcells,TDC)体外培养的差异,为研究胸腺树突细胞在重症肌无力抗原提呈中作用奠定基础。方法:正常成人、幼儿和重症肌无力(MyastheniaGravis,MG)胸腺组织,采用梯度离心法获得胸腺低密度细胞,经粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor,GM-CSF)和干细胞因子(stemcellsfactors,SCF)的诱导,使TDC前体细胞生长为成熟TDC,比较正常胸腺组织与MG胸腺组织中TDC细胞生长状况。结果:所有胸腺组织均能诱导TDC,但不同来源胸腺组织中TDC生长状况明显不同,其中正常幼儿有一定程度TDC细胞生长,与成人比较具有显著差异;胸腺增生与胸腺萎缩组TDC细胞数量均明显增加,与正常幼儿组比较具有显著差异;胸腺瘤组TDC数量与正常幼儿组相似,但比正常成人组明显增加。结论:MG患者切除之胸腺组织病理学差异非常明显,但患者TDC细胞数量均明显增加,说明三者在激发自身免疫反应方面可能具有相似之处,其TDC是否具有特异性AchR抗原提呈功能,尚需进一步研究。 展开更多
关键词 重症肌无力 胸腺 树突状细胞 细胞增殖 梯度离心法 粒-巨噬细胞集落刺激因子
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鸡睾丸间质细胞的分离及其鉴定的研究 被引量：1
13
作者 杨淑华 于立辉 +7 位作者 张燚 龙淼 李林 高锋 姜丽莹 韩阳 王雪 何剑斌 《现代畜牧兽医》 2015年第11期6-8,共3页
为了寻找一种快速、高效的体外分离、纯化鸡睾丸间质细胞的方法,本试验采用Ⅱ型胶原酶消化以及PercoⅡ分离液梯度离心,建立鸡睾丸间质细胞分离、纯化方法。结果表明,PercoⅡ分离液梯度离心后,纯化的间质细胞3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-H... 为了寻找一种快速、高效的体外分离、纯化鸡睾丸间质细胞的方法,本试验采用Ⅱ型胶原酶消化以及PercoⅡ分离液梯度离心,建立鸡睾丸间质细胞分离、纯化方法。结果表明,PercoⅡ分离液梯度离心后,纯化的间质细胞3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)染色阳性率可达92.5%±1.7%,且在37℃、5%CO_2条件下培养的细胞生长良好。该提取方法效果良好,可作为研究禽类生殖调控的细胞模型。 展开更多
关键词 鸡 睾丸间质细胞 3β—HSD染色 梯度离心法
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多级梯度离心后X/Y精子浓度分析
14
作者 罗熙 李永刚 +2 位作者 李明颖 曾鹏 晏家骢 《昆明医科大学学报》 CAS 2017年第9期15-18,共4页
目的在辅助生殖中,利用多层密度梯度离心的方法来分选X/Y精子,以检验常规IVF-ET中,X/Y精子比例是否失衡.方法使用Sperm Grad TM(Vitrolife,Sweden)与Sperm Rinse TM(Vitrolife,Sweden)配制10层梯度液,分别为100%、95%、90%、85%、80%、... 目的在辅助生殖中,利用多层密度梯度离心的方法来分选X/Y精子,以检验常规IVF-ET中,X/Y精子比例是否失衡.方法使用Sperm Grad TM(Vitrolife,Sweden)与Sperm Rinse TM(Vitrolife,Sweden)配制10层梯度液,分别为100%、95%、90%、85%、80%、75%、70%、65%、60%、55%.在离心管中制成多层梯度后,每层梯度间分界明显.选择液化正常、浓度约50×106/mL、活动率约50%,畸形率正常的5人精液混合后,去除个体差异取3 mL进行梯度离心.分别收集每层梯度底部精子,利用双色X/Y FISH探针(Vysis)进行FISH检测,统计X/Y精子比例.结果 100%、95%、90%、85%、80%五层梯度中X精子含量比例分别为:51.41%、51.41%、52.19%、50.99%、54.10%.结论每层梯度液中X/Y精子含量比例虽有不同,但差异并不明显.现在辅助生殖技术中,利用商品化精子梯度分离液,即使使用多层梯度进行离心分离,也不会造成性别比例失衡. 展开更多
关键词 梯度离心法 X/Y精子分选 FISH 荧光原位杂交
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梯度离心法制备骨髓间充质干细胞胞质体及其鉴定
15
作者 周竹娟 郑健 徐炎 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 2008年第11期1110-1113,1123,共5页
目的建立制备骨髓间充质干细胞胞质体的方法，以用于体细胞核移植研究。方法（1）培养骨髓间充质十细胞，用流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞表面标志物CD44、CD90、CD71、CD11b；（2）用梯度离心法制备骨髓间充质干细胞胞质体，并用HE... 目的建立制备骨髓间充质干细胞胞质体的方法，以用于体细胞核移植研究。方法（1）培养骨髓间充质十细胞，用流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞表面标志物CD44、CD90、CD71、CD11b；（2）用梯度离心法制备骨髓间充质干细胞胞质体，并用HE染色、Giemsa染色、荧光双标染色、透射电镜检查等方法进行鉴定，用台盼蓝染色检测其活性。结果（1）骨髓间充质干细胞呈长梭形、漩涡状生长，骨髓间充质干细胞表面标志物CD44、CD90、CD71表达阳性，CD11b表达阴性；（2）HE染色、Giemsa染色、荧光双标染色和透射电镜检查显示骨髓间充质干细胞经梯度离心后在15％－18％Ficoll400梯度层可收集到大量胞质体，胞质体可快速贴壁，表达CD71，与完整骨髓间充质干细胞相似，体积与完整细胞相比差别不大。有活性的胞质体比例达99．5％。结论用梯度离心法可有效获得骨髓间充质干细胞胞质体。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 梯度离心法 胞质体
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慢性淋巴细胞白血病B淋巴细胞集落的形成(摘要)
16
作者 戴育成 JaroslavF.Prchal 《医学研究杂志》 1990年第5期22-23,共2页
体外B淋巴细胞集落测定(鼠和人类)已在几个实验室开展起来,但是用于研究慢性淋巴细胞白血病(简称慢淋)还未完全成功,虽然有少数作者报道过慢淋病人B细胞集落的形成。本文报道我们所发展的一个改良的B淋巴细胞集落测定系统,能使慢淋外周... 体外B淋巴细胞集落测定(鼠和人类)已在几个实验室开展起来,但是用于研究慢性淋巴细胞白血病(简称慢淋)还未完全成功,虽然有少数作者报道过慢淋病人B细胞集落的形成。本文报道我们所发展的一个改良的B淋巴细胞集落测定系统,能使慢淋外周血的B淋巴祖细胞形成集落。本文测定了8例慢淋患者,其诊断均基于临床和实验室发现。培养方法为,通过Ficoll-Hypaque梯度离心法离心肝素化外周血,分离出淋巴细胞。 展开更多
关键词 B淋巴细胞 慢淋 细胞集落 梯度离心法 淋巴祖细胞 FICOLL 玫瑰花结 肝素化 外周血有核细胞 半乳糖氧化酶
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鳗鱼鳃的氯细胞和呼吸细胞的研究:细胞分离及生化功能和特征(英文)
17
作者 黄港住 陈熇安 《中山大学学报论丛》 1995年第3期187-189,共3页
硬骨鱼的鳃，除了用作呼吸之外，也用作钠氯离子的转运，钙离子的转运，酸碱平衡，氮废物的排泄等功用．可是鱼鳃的构造很复杂，表皮组织含有多种细胞，如氯细胞，呼吸细胞等．为此，设计了一套新的梯度离心法，用以分离鱼鳃的氯细胞和... 硬骨鱼的鳃，除了用作呼吸之外，也用作钠氯离子的转运，钙离子的转运，酸碱平衡，氮废物的排泄等功用．可是鱼鳃的构造很复杂，表皮组织含有多种细胞，如氯细胞，呼吸细胞等．为此，设计了一套新的梯度离心法，用以分离鱼鳃的氯细胞和呼吸细胞．主要的技术是先使用clooaginase和hyaluronidase将细胞分开，再用三层的discontinuousPercollgradient用低速离心转数，将两种细胞分隔，所得的是完整的活细胞．在laserconfocalmicroscope下，经过fluo-3萤光染色，可以显示分离的细胞含钙离子的浓度很低，加入ionomycin之后，细胞内含的钙离子浓度很快提升，证明细胞是活的．氯细胞和呼吸细胞的酵素含量是很不相同的．海鳗的氯细胞含有高浓度的Na－KATPase，和低密度的glutaminase，AMPase它的主要功能是作Napump．而氮排泄物则是气体NK3淡水鳗鱼的氯细胞含有大量glutaminase，glutamatedehydrogenase，而AMPase则很低．因此可制造NH4离子，籍助Na－NH4离子交替，吸取水中的Na离子．呼吸细胞含有大量的AMPase，glutamateaspartatetransamlnase，glutamlnase，u的功能是制造气体N几．海鳗的呼吸细胞含较大量的glutaminase．淡水鳗的呼吸细胞则含较大量的AMPase． 展开更多
关键词 细胞分离 氯细胞 生化功能 鳗鱼 英文 钙离子浓度 淡水鳗 梯度离心法 离子交替 KATPase
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梯度离心法在肿瘤药敏试验中的应用及临床相关性研究
18
作者 刘海红 谢晓东 +2 位作者 蒋芹 匡久树 李小民 《现代肿瘤医学》 CAS 2004年第6期527-529,共3页
目的　研究梯度离心法在肿瘤药敏试验中的应用及肿瘤药敏试验与临床个体化化疗的相关性。方法　取 4 6例肿瘤患者新鲜癌细胞 ,梯度离心后用MTT法检测癌细胞对 8种常用抗癌药的敏感性 ;根据药敏结果对患者进行化疗 ,无敏感药物者按经验... 目的　研究梯度离心法在肿瘤药敏试验中的应用及肿瘤药敏试验与临床个体化化疗的相关性。方法　取 4 6例肿瘤患者新鲜癌细胞 ,梯度离心后用MTT法检测癌细胞对 8种常用抗癌药的敏感性 ;根据药敏结果对患者进行化疗 ,无敏感药物者按经验方案化疗 ,观察实验与临床疗效的相关性。结果　改良法癌细胞获得百分率为 94 6 5± 2 8 4 7,与传统方法比较差异有显著性 (P <0 0 1) ;药敏试验阳性者 2 5例 ,阴性者2 1例。实验提示敏感药物化疗者的有效率为 76 % (19/ 2 5 ) ;耐药者按经验方案化疗 ,有效率为 2 8 6 % (6 /2 1)。P <0 0 1,差异有显著性 ;实验与临床符合率达 73 9% (34/ 4 6 )。结论　梯度离心MTT法体外癌细胞药敏试验能更好的指导临床个体化治疗 ,具有预见癌症患者临床个体化化疗疗效的重要价值。 展开更多
关键词 梯度离心法 药物敏感试验 癌细胞 化疗
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组织工程骨在颅颌面骨缺损临床修复中的应用 被引量：68
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作者 柴岗 张艳 +2 位作者 刘伟 崔磊 曹谊林 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第19期1676-1681,共6页
目的　探索人自体骨髓基质干细胞 (hBMSC)为种子细胞的组织工程骨在治疗临床颅颌面骨缺损中的可行性。方法　自 1999到 2 0 0 2年间 ,选择颅颌面骨缺损病 11例 (外伤性颅骨缺损 4例 ,先天性梨状孔周围骨凹陷畸形 7例 )进行治疗研究。从... 目的　探索人自体骨髓基质干细胞 (hBMSC)为种子细胞的组织工程骨在治疗临床颅颌面骨缺损中的可行性。方法　自 1999到 2 0 0 2年间 ,选择颅颌面骨缺损病 11例 (外伤性颅骨缺损 4例 ,先天性梨状孔周围骨凹陷畸形 7例 )进行治疗研究。从患者髂前上棘穿刺取骨髓 ,密度梯度离心法分离hBMSC ,经体外成骨诱导和扩增至第 3代。将诱导的hBMSC ,与部分脱钙骨 (partlydemineralizedbonematrix,pDBM)复合 ,并于体外培养一周后 ,手术回植骨缺损区。选择 3例梨状孔凹陷畸形患者 ,在凹陷明显侧植入hBMSC/pDBM复合物 ,对侧轻度凹陷区仅植入单纯pDBM。分别于术后 1,3,6 ,12 ,2 4 ,4 8,5 0个月进行临床外形和三维CT检查随访。 2例患者在Ⅱ期手术时 ,取少量植入物活检 ,行组织学 (HE染色 ) ,免疫组织化学 (骨桥蛋白、骨粘连蛋白 )检测。结果　患者三维CT检查结果示术后 3～ 6月能形成组织工程化骨 ,并修复骨组织缺损。术后 1～ 2 .5年的随访表明组织工程骨稳定存在 ,无明显骨吸收现象 ,临床治疗效果稳定。组织工程骨活检标本HE染色显示其组织学结构与正常松质骨相同 ,并有典型软骨内化骨现象。免疫组织化学显示有骨桥蛋白、骨粘连蛋白阳性表达。而植入的单纯部分脱钙骨于术后 3～ 6月吸收 ,组织学显示为脱钙骨降解碎片和? 展开更多
关键词 骨髓基质干细胞 骨缺损 组织工程 颅颌面部 密度梯度离心法 免疫组织化学
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四种常用的人中性粒细胞分离方法的比较 被引量：27
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作者 李金凤 刘文礼 +4 位作者 史小娟 刘伟 汉建忠 万静 罗自强 《国际病理科学与临床杂志》 CAS 2008年第4期277-281,共5页
目的:比较Percoll非连续密度梯度离心法、Ficoll-Hypaque密度梯度离心法、裂解红细胞法和Dextran作用下红细胞自然沉降法四种常用的人中性粒细胞分离方法。方法:取健康人外周静脉血,分别采用以上四种方法进行中性粒细胞分离,对其细胞纯... 目的:比较Percoll非连续密度梯度离心法、Ficoll-Hypaque密度梯度离心法、裂解红细胞法和Dextran作用下红细胞自然沉降法四种常用的人中性粒细胞分离方法。方法:取健康人外周静脉血,分别采用以上四种方法进行中性粒细胞分离,对其细胞纯度、回收率、存活率进行比较。结果:Percoll非连续密度梯度离心法与Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离得到的细胞纯度均大于90%,两者间比较无统计学差异(P>0.05);裂解红细胞法和Dextran作用下红细胞自然沉降法分离得到的细胞纯度略低于Percoll非连续密度梯度离心法(P<0.01)与Ficoll-Hypaque密度梯度离心法(P<0.05)。Dextran作用下红细胞自然沉降法的回收率低于Percoll非连续密度梯度离心法(P<0.01)、Ficoll-Hypaque密度梯度离心法(P<0.01)和裂解红细胞法(P<0.05);Percoll非连续密度梯度离心法回收的中性粒细胞存活率明显高于Ficoll-Hypaque密度梯度离心法(P<0.05),裂解红细胞法(P<0.01)和Dextran作用下红细胞自然沉降法(P<0.01)。结论:Percoll非连续密度梯度离心法分离中性粒细胞,纯化程度好,回收率高,是一种简单、高效的中性粒细胞分离方法,适于临床和科研中广泛应用。 展开更多
关键词 中性粒细胞 Percoll非连续密度梯度离心法 Ficoll—Hypaque密度梯度离心法 裂解红细胞法 Dextran红细胞沉降法
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