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龙眼胚性培养物蛋白质水平双向电泳技术体系的建立 被引量:11
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作者 王凤华 赖钟雄 +3 位作者 郭志雄 车建美 郑金贵 吕柳新 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2003年第2期196-200,共5页
以龙眼胚性培养物为材料,使用Pharmacia多功能水平电泳仪(Multiphor ),采用滤纸半干电泳与梯度凝胶技术,建立了适合于龙眼胚性培养物的蛋白质水平双向电泳技术体系.使用该技术有望对龙眼体细胞胚胎发生过程中特异蛋白进行研究.
关键词 龙眼 胚性培养物 蛋白质水平双向电泳技术体系 体细胞胚胎发生 滤纸半干电泳 梯度凝胶技术
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应用PCR-DGGE技术研究处理含氨废气的生物滤塔中微生物多样性 被引量:32
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作者 殷峻 陈英旭 +1 位作者 刘和 王远鹏 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第6期11-15,共5页
变性梯度凝胶电泳技术 (DGGE)在微生物生态学领域有着广泛的应用 .本文应用DGGE技术对处理含氨废气的生物滤塔中微生物多样性随时间的变化进行了研究 .在生物滤塔运行的不同时间采集滤塔中的填料样品 ,进行了生物滤塔对氨处理效果的分析... 变性梯度凝胶电泳技术 (DGGE)在微生物生态学领域有着广泛的应用 .本文应用DGGE技术对处理含氨废气的生物滤塔中微生物多样性随时间的变化进行了研究 .在生物滤塔运行的不同时间采集滤塔中的填料样品 ,进行了生物滤塔对氨处理效果的分析和DGGE分析 .结果显示 ,污泥和混合填料生物滤塔氨的出气浓度在经过一段时间后 ,逐渐升高 ,而堆肥生物滤塔的运行情况较好 ,对氨的去除效率始终在 98%以上 .PCR DGGE图谱显示 ,不同时间的相同填料中微生物DGGE图谱有着明显的差异性 .Shannon指数分析表明 ,填料中微生物的多样性都随着反应器运行时间的延长而有所减少 .运行一个月后 ,混合填料的微生物多样性指数最低为 0 389;其次为污泥填料 ,其多样性指数为 0 4 73;堆肥填料的微生物多样性程度最高为0 5 6 9.生物滤塔对氨的去除效果与填料中微生物多样性Shannon指数之间有一定的相关关系 .主成分分析 (PCA)显示对于堆肥和污泥来说 ,填料样品之间微生物群落结构相似性较高 。 展开更多
关键词 生物滤塔 微生物多样性 变性梯度凝胶电脉技术
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加工番茄连作对土壤微生物群落多样性的影响 被引量:15
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作者 孙文庆 康亚龙 +1 位作者 刘建国 蒋桂英 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1099-1110,共12页
通过在石河子大学农学院试验站开展加工番茄连作(种植1 a、连作3 a、5 a和7 a)定点微区试验,于花果期和成熟期采集根际土壤,利用聚合酶链-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术,分析不同连作年限加工番茄根际微生物结构和多样性的变化。结果... 通过在石河子大学农学院试验站开展加工番茄连作(种植1 a、连作3 a、5 a和7 a)定点微区试验,于花果期和成熟期采集根际土壤,利用聚合酶链-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术,分析不同连作年限加工番茄根际微生物结构和多样性的变化。结果表明,随着加工番茄连作年限的延长,根际土壤细菌的丰富度和Shannon-Wiener多样性均有所降低,而真菌的丰富度和多样性有所升高,且成熟期>花果期。连作对土壤细菌和真菌的Pielou均匀度指数影响不明显,说明各处理土壤微生物类群分布比较均匀。连作明显改变了土壤中土著细菌的群落结构,一些土著细菌优势种群数量减少或消失;土壤真菌的优势种群随连作年限的变化较大,某些真菌类群大量富集,而另一些真菌数量明显减少,甚至消失,其中,加工番茄连作5年时土壤中新出现的真菌优势种群最多,且与其他真菌种群的数量差异较大。加工番茄连作后土壤细菌和真菌群落结构失衡可能是产生连作障碍问题的重要因素。从条带测序结果看,各连作处理土样中细菌优势种群属于假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、节杆菌属(Arthrobacter ramosu)、α-变形杆菌(Alpha proteobacterium)、不可培养的α-变形杆菌(Uncultured Alpha proteobacterium)和不可培养细菌(Uncultured bacterium),真菌优势种群属于不可培养真菌(Uncultured fungus)、Geosmithia putterillii、淀粉丝菌(Amylomyces rouxii)、热带念珠菌(Candida tropicalis)和漆斑菌属(Myrothecium sp)。总之,加工番茄连作导致根际有益菌数量减少而病原菌大量滋生,从而降低了加工番茄抵御病害的能力。 展开更多
关键词 加工番茄 变性梯度凝胶电泳技术 根际土壤 微生物多样性 连作
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适用于分离人肠道中双歧杆菌的选择性培养基 被引量:13
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作者 霍冬雪 张家超 +2 位作者 白娜 黄卫强 张和平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期433-441,共9页
【目的】比较并评价5种双歧杆菌选择性培养基对人源双歧杆菌的分离效果,试图筛选出一种适用于人肠道中双歧杆菌分离培养的选择性培养基。【方法】采集6份健康人粪便样品稀释涂布于5种选择性培养基上,厌氧培养后计数菌落并挑选单菌落进... 【目的】比较并评价5种双歧杆菌选择性培养基对人源双歧杆菌的分离效果,试图筛选出一种适用于人肠道中双歧杆菌分离培养的选择性培养基。【方法】采集6份健康人粪便样品稀释涂布于5种选择性培养基上,厌氧培养后计数菌落并挑选单菌落进行鉴定。同时提取样品中细菌宏基因组DNA,应用变性梯度凝胶电泳技术(Denaturing Gel Gradient Electrophoresis,DGGE)和荧光定量PCR技术(Quantitative Polymerase Chain Reaction,q-PCR)揭示样品中双歧杆菌种类和数量,并以此为依据,客观评价上述5种选择性培养基的分离效果。【结果】BSM培养基和BLM培养基上双歧杆菌的计数结果与q-PCR的定量结果最为接近,并显著高于其它3种培养基。BLM培养基上分离到双歧杆菌的种类与DGGE图谱多样性分析的结果最为接近。【结论】BLM培养基是一种适用于人肠道中双歧杆菌分离培养的选择性培养基。 展开更多
关键词 双歧杆菌 变性梯度凝胶电泳技术 荧光定量PCR技术 选择性培养
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鲫鱼贮藏过程中微生物菌相PCR-DGGE分析及其防腐保鲜 被引量:11
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作者 李秀秀 曾维伟 +4 位作者 陆兆新 别小妹 赵海珍 张充 吕凤霞 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第5期274-280,共7页
采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(polymerase chain reaction-amplification and denaturing gradient gel electrophorsis,PCR-DGGE)技术,分析4℃冷藏条件下鲫鱼肌肉和鱼鳃的菌相组成及变化,并利用不同浓度(效价分别为67 608、32 ... 采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(polymerase chain reaction-amplification and denaturing gradient gel electrophorsis,PCR-DGGE)技术,分析4℃冷藏条件下鲫鱼肌肉和鱼鳃的菌相组成及变化,并利用不同浓度(效价分别为67 608、32 359、2 239、1 820、1 157 IU/m L)抗菌脂肽溶液对鲫鱼进行浸泡处理,以未处理作为对照,分别测定其菌落总数、挥发性盐基氮(total volatile basic nitrogen,TVB-N)、p H值和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)等指标,评价抗菌脂肽对鲫鱼冷藏保鲜效果。结果表明:鲫鱼贮藏过程中的微生物具有多样性,PCRDGGE技术确定气单胞菌属(Aeromonas sp.)、假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、不动杆菌属(Acinetobacter sp.)和热杀索丝菌属(Brochothrix thermosphacta)为鲫鱼鱼肉的主要腐败菌群,荧光假单胞菌是鲫鱼贮藏过程中的优势腐败菌。而棉子糖乳球菌属(Lactococcus raffinolactis)、从毛单胞菌属(Comamonas sp.)和气单胞菌属(Aeromonas sp.)为鲫鱼鱼鳃的主要腐败菌群,表明鱼肉和鱼鳃在贮藏过程中,导致腐败的主要腐败菌群有一定差异性。同时,不同浓度的抗菌脂肽对鲫鱼均有明显的防腐保鲜作用,有效抑制了鲫鱼菌落总数、TVB-N值和TBA值的增加以及p H值的升高。其中,高浓度抗菌脂肽(效价为67 608 IU/m L)在4℃贮藏条件下使鲫鱼的货架期延长了6 d,说明抗菌脂肽对鲫鱼具有良好的保鲜作用,能明显延缓鲫鱼的腐败变质。 展开更多
关键词 鲫鱼 腐败微生物 聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳技术 抗菌脂肽 保鲜
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实时定量PCR结合DGGE检测慢性牙周炎患者不同生境中的牙龈卟啉单胞菌和齿垢密螺旋体 被引量:10
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作者 邹岩 刘莹 +4 位作者 唐子圣 漆正楠 尹君 王畅 吴明桃 《临床口腔医学杂志》 2018年第6期326-329,共4页
目的:利用实时定量PCR结合变性梯度凝胶电泳技术(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)检测慢性牙周炎患者不同生境中牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体。方法:选取30名慢性牙周炎志愿者,分别采集龈上菌斑、龈下菌斑及唾液样本,运... 目的:利用实时定量PCR结合变性梯度凝胶电泳技术(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)检测慢性牙周炎患者不同生境中牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体。方法:选取30名慢性牙周炎志愿者,分别采集龈上菌斑、龈下菌斑及唾液样本,运用DGGE技术比较分析各组样本微生物群落结构。通过偏最小二乘法(partial least squares,PLS)分析,得出不同生境相关优势条带,并对其进行克隆、测序分析,确定相应最近邻居。采用实时定量PCR技术对龈下菌斑与龈上菌斑、龈下菌斑与唾液中牙龈卟啉单胞菌及齿垢密螺旋体进行定量检测分析。结果:实时定量PCR定量检测结果显示,龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌及齿垢密螺旋体含量高于龈上菌斑和唾液。结论:实时定量PCR技术结合DGGE技术能更好的诠释微生物群落信息。 展开更多
关键词 实时定量PCR 变性梯度凝胶电泳技术 牙周炎 牙龈卟啉单胞菌 齿垢密螺旋体
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不同原料组成对黏豆包酸面团的真菌菌群及流变学特性的影响 被引量:8
7
作者 韩雨茜 芦淋 郭鸰 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第22期101-108,119,共9页
为探究原料组成对东北地区黏豆包酸面团中的真菌菌群构成及流变学特性的影响,收集东北地区手工制作的黏豆包酸面团16份并依据原料组成不同分为A(江米+大米)、B(江米+黏玉米)、C(黏玉米、黄米和大米)和D(黄米+黏玉米)四组,采用高通量测... 为探究原料组成对东北地区黏豆包酸面团中的真菌菌群构成及流变学特性的影响,收集东北地区手工制作的黏豆包酸面团16份并依据原料组成不同分为A(江米+大米)、B(江米+黏玉米)、C(黏玉米、黄米和大米)和D(黄米+黏玉米)四组,采用高通量测序技术结合聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳技术(PCR-DGGE)研究黏豆包酸面团中真菌菌群构成,并测定酸面团的流变学特性、pH和总滴定酸度(TTA)。结果显示:在属水平上,A和C组检出的菌属除共有菌属[微囊藻属(Cystofilobasidium)、隐球酵母菌(Cryptococcus)、德巴利氏酵母属(Debaryomyces)和丝孢酵母属(Trichosporon)]外,A组中还发现曲霉属(Aspergillus)、青霉属(Penicillium)、附球菌属(Epicoccum)、威克汉姆酵母属(Wickerhamomyces)和根霉属(Rhizopus),而C组中还发现汉逊氏酵母属(Hanseniaspora)。B组有隐球酵母属和德巴利氏酵母属;D组中仅含有汉逊氏酵母属。汉逊氏德巴利酵母(Dabaryomyces hansenii)为优势酵母。此外,添加玉米或黄米能提高酸面团的黏性和弹性。生酸面团的弹性模量、复合黏度与拟威尔酵母(Cyberlindnera)有显著正相关性(P<0.05),拟威尔酵母的发酵作用能增强酸面团的弹性。生酸面团的损耗因子与汉逊氏酵母属呈显著正相关(P<0.05),与隐球酵母菌及Naumovozyma呈显著负相关(P<0.05),即真菌可影响生酸面团的流体性质和固体性质;丝孢酵母属等真菌能加强熟酸面团的流体性质。pH与掷孢酵母属、汉纳酵母属和亚球壳属等真菌之间呈显著正相关(P<0.05),TTA值与微囊藻属、隐球酵母菌和青霉属等8个菌属呈显著负相关性(P<0.05),说明pH低和总酸度高的酸性环境抑制掷孢酵母属和微囊藻属等真菌的生长。因此,原料组成对黏豆包酸面团中真菌菌群构成有影响(江米和大米混合制备酸面团中酵母菌多样性最丰富),对酸面团的流变学特性也有一定的影响,且流变学� 展开更多
关键词 黏豆包酸面团 高通量测序 聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳技术( PCR-DGGE) 真菌菌群 流变学特性
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DGGE法与常规培养法对稻田蓝细菌多态性分析结果比较 被引量:4
8
作者 宋铁英 林智敏 +2 位作者 郑伟文 LOTTA Martensson ULLA Rusmussen 《中国生态农业学报》 CAS CSCD 2005年第3期140-143,共4页
研究运用蓝细菌和硅藻16SrDNA特异引物,将晚季水稻生长后期稻田土壤中提取的总DNA进行PCR扩增后,以DGGE技术对PCR产物进行分析结果表明,14条DGGE带经克隆测序,经NCBI基因库比对得晚季水稻生长后期存在10种蓝细菌,包括4种Leptolyngbya、1... 研究运用蓝细菌和硅藻16SrDNA特异引物,将晚季水稻生长后期稻田土壤中提取的总DNA进行PCR扩增后,以DGGE技术对PCR产物进行分析结果表明,14条DGGE带经克隆测序,经NCBI基因库比对得晚季水稻生长后期存在10种蓝细菌,包括4种Leptolyngbya、1种Chamaesiphon、1种Nostoc、1种Oscillatoria、2种Syne-chococcus和1种Chroococcidiopsis。同层不同位置土壤中蓝细菌种群亦有所不同,但每个取样点都有一些特有的蓝细菌种类。用常规方法对同一稻田土壤样品进行分离培养,根据蓝细菌鉴定图谱观察到类似Lyngbya、Oscillatori-a、Chroococcidiopsis及Nostoc的蓝细菌,但显微镜下无法准确分类。比较结果表明采用DGGE法比常规培养法能更准确进行蓝细菌多态性鉴定。 展开更多
关键词 DGGE法 常规培养法 稻田 蓝细菌 遗传多态性 变性梯度凝胶电泳技术
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恩施市3种泡辣椒样品中细菌多样性研究 被引量:6
9
作者 尚雪娇 折米娜 +3 位作者 邓长阳 廖华 赵楠 郭壮 《中国酿造》 CAS 北大核心 2019年第2期53-57,共5页
以恩施市3种泡辣椒为研究对象,使用MiSeq高通量测序技术与聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术相结合的手段对样品中细菌群落的结构进行解析,并采用传统微生物培养方法及分子生物学技术对其中的乳酸菌进行分离和鉴定。结果表... 以恩施市3种泡辣椒为研究对象,使用MiSeq高通量测序技术与聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术相结合的手段对样品中细菌群落的结构进行解析,并采用传统微生物培养方法及分子生物学技术对其中的乳酸菌进行分离和鉴定。结果表明,硬壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteria)为泡辣椒中的优势细菌门,其平均相对含量分别为85.70%、12.59%;乳酸杆菌属(Lactobacillus)为优势细菌属,其平均相对含量达67.37%。通过传统微生物培养方法共分离鉴定出14株乳酸菌,其中7株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),2株为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum),3株为屎肠球菌(Enterococcus faecium),2株为香肠乳杆菌(Lactobacillus farciminis)。结果表明,泡辣椒中的优势乳酸菌为植物乳杆菌。 展开更多
关键词 泡辣椒 MiSeq高通量测序 聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳技术 细菌多样性
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污泥发酵液对A^2O脱氮除磷和微生物的影响 被引量:6
10
作者 刘亚利 袁一星 +3 位作者 李欣 詹技灵 康晓荣 董林沛 《哈尔滨工业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第10期42-46,共5页
为研究剩余污泥发酵液作碳源对微生物群落结构的影响,将发酵液与市政污水按流量比1∶35回用于厌氧-缺氧-好氧反应器,在室温下运行90 d.聚类分析表明,发酵液明显改变了微生物群落结构,5~30 d和45~90 d的微生物属于不同的聚集区;微生物多... 为研究剩余污泥发酵液作碳源对微生物群落结构的影响,将发酵液与市政污水按流量比1∶35回用于厌氧-缺氧-好氧反应器,在室温下运行90 d.聚类分析表明,发酵液明显改变了微生物群落结构,5~30 d和45~90 d的微生物属于不同的聚集区;微生物多样性分析表明,发酵液使Shannon-Wiener指数从2.6升高到3.1,系统运行稳定性增强;PCR-DGGE分析表明,发酵液对微生物群落具有一定的选择性,氨氧化菌Nitrosomonas sp.、硝化菌Betaproteobacteria和Nitrospira sp.、反硝化菌Comamonas sp.和聚磷菌Gammaproteobacteria得到富集,TN和TP去除率从64.5%和52.4%提高到84.7%和94.3%. 展开更多
关键词 剩余污泥 脱氮除磷 碳源 生物群落 聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳技术
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生物陶粒反应器中好氧反硝化菌的脱氮研究 被引量:5
11
作者 马放 张佳 +2 位作者 张献旭 魏利 杨基先 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第4期529-533,共5页
采用固定化生物强化技术,研究了生物陶粒反应器中好氧反硝化菌的脱氮效果.运用变性梯度凝胶电泳技术(DGGE)对微生物菌群结构稳定性进行了分析.结果表明,在水力负荷1.5m/h,气水比5:1,水温25~30℃,进水硝氮负荷为0.75-2.8... 采用固定化生物强化技术,研究了生物陶粒反应器中好氧反硝化菌的脱氮效果.运用变性梯度凝胶电泳技术(DGGE)对微生物菌群结构稳定性进行了分析.结果表明,在水力负荷1.5m/h,气水比5:1,水温25~30℃,进水硝氮负荷为0.75-2.87kg/(m^3·d),COD浓度负荷为7.46~10.03kg/(m^3·d)的条件下,反应器稳定运行后,对硝氮的平均去除率可以达到93.10%,并且出水硝氮和亚硝氮的浓度一直保持在很低的水平,COD的平均去除率为97.50%.DO的消耗和硝酸盐还原主要发生在进水端的0-0.5m区域内,反应器中DO浓度始终处于较高的水平.根据DGGE指纹图谱显示.分离得到的4株好氧反硝化菌为假单胞菌属的不同的种,且在整个运行阶段稳定存在,始终为优势菌群. 展开更多
关键词 好氧反硝化 变性梯度凝胶电泳技术 生物陶粒反应器
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变性梯度凝胶电泳技术在海洋微生物分子生态学中的应用 被引量:4
12
作者 王芳 杨季芳 谢和 《浙江万里学院学报》 2009年第2期72-77,共6页
变性梯度凝胶电泳技术是近年来研究微生物分子生态学的有利工具,因其具备可靠、简便、可重复等优势,被广泛应用于海洋微生物群落的多样性和动态性分析。文章综述了基于PCR的变性梯度凝胶电泳技术的基本原理、技术步骤、影响因素及其在... 变性梯度凝胶电泳技术是近年来研究微生物分子生态学的有利工具,因其具备可靠、简便、可重复等优势,被广泛应用于海洋微生物群落的多样性和动态性分析。文章综述了基于PCR的变性梯度凝胶电泳技术的基本原理、技术步骤、影响因素及其在海洋微生物群落多样性和动态性研究的应用现状。 展开更多
关键词 变性梯度凝胶电泳技术 海洋微生物分子生态学 多样性 动态性
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基于宏基因组学技术分析“泡菜老汤”发酵甘蓝原核微生物群落结构 被引量:5
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作者 燕平梅 荆雪娇 +4 位作者 李艳琴 柴政 乔宏萍 赵文婧 王琪 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期119-123,共5页
为了改进发酵蔬菜的工艺,研究"泡菜老汤"对发酵甘蓝原核微生物群落结构的影响。通过聚合酶链式反应结合变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术,分离发酵甘蓝体系混合微生物16S r DNA V3区基因片段,采用Quantity One软件分析原核微... 为了改进发酵蔬菜的工艺,研究"泡菜老汤"对发酵甘蓝原核微生物群落结构的影响。通过聚合酶链式反应结合变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术,分离发酵甘蓝体系混合微生物16S r DNA V3区基因片段,采用Quantity One软件分析原核微生物香农指数(Shannon-Wiener index)多样性指数、主成分分析及相似性聚类分析。结果表明,新汤中微生物数量多于老汤;新汤中Shannon-Wiener指数随发酵时间的变化规律为低-高-较低,老汤中香农指数随发酵时间的变化规律为高-低-较高;主成分分析说明甘蓝老汤1~8 d聚合在一起;新汤中除了第1 d,其他的也都聚合在一起;聚类图谱显示新汤第8 d与老汤1~8 d的所有样品微生物群落高度相似,表明老汤的原核微生物群落结构较新汤更稳定,建议发酵蔬菜的工艺采用"泡菜老汤"发酵。 展开更多
关键词 泡菜老汤 甘蓝 变性梯度凝胶电泳技术 微生物群落结构
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固态发酵酒醅中微生物群落的分析鉴定方法浅析 被引量:3
14
作者 郭娟 《中国酿造》 CAS 2013年第9期116-119,共4页
白酒固态发酵环境开放,多种微生物共同作用以决定白酒的香型及好坏。对固态发酵中微生物群落的分析可以进一步了解白酒的形成过程,微生物的分离鉴定方法就显得尤为重要。该文主要介绍了固态发酵酒醅中微生物的主要分离鉴定方法,论述其... 白酒固态发酵环境开放,多种微生物共同作用以决定白酒的香型及好坏。对固态发酵中微生物群落的分析可以进一步了解白酒的形成过程,微生物的分离鉴定方法就显得尤为重要。该文主要介绍了固态发酵酒醅中微生物的主要分离鉴定方法,论述其原理并讨论各自的优缺点。 展开更多
关键词 固态发酵 微生物 Biolog技术 变性梯度凝胶电泳技术 磷脂脂肪酸分析技术
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酸菜中细菌群落结构多样性分析 被引量:4
15
作者 张颖 孙慧君 +2 位作者 姜静 岳媛媛 乌日娜 《食品科技》 CAS 北大核心 2017年第1期34-39,共6页
酸菜是我国东北地区传统发酵食品之一,口感清爽,至今仍是很多北方家庭冬日必备食品。但是各地区酸菜的口感和风味都不相同,这与其中的微生物密切相关。试验通过变性梯度凝胶电泳技术(Denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE),对... 酸菜是我国东北地区传统发酵食品之一,口感清爽,至今仍是很多北方家庭冬日必备食品。但是各地区酸菜的口感和风味都不相同,这与其中的微生物密切相关。试验通过变性梯度凝胶电泳技术(Denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE),对采集自辽宁省沈阳市和内蒙古乌兰浩特市自然发酵酸菜液进行微生物群落组成分析研究。结果显示,植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)广泛存在于发酵酸菜中,清酒乳杆菌(Lactobacillus sakei)和发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)次之;而消化乳杆菌(Lactobacillus alimentarius)只在内蒙古自然发酵酸菜中鉴定出,之前研究利用传统方法和分子生态学方法均未分离到。 展开更多
关键词 变性梯度凝胶电泳技术 酸菜 细菌 多样性
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冬虫夏草促繁地土壤真菌种群结构的变性梯度凝胶电泳技术分析 被引量:4
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作者 李挺 宋斌 +1 位作者 王超群 李泰辉 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期478-481,共4页
目的采用变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术对冬虫夏草促繁地土壤真菌多样性进行初步研究。方法利用PCR方法选择特异性引物ITS3-GC和ITS4扩增ITS rDNA基因的ITS2片段,结合DGGE分离技术,并借助生物信息学软件进行分析。结果所测的土壤样品中真... 目的采用变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术对冬虫夏草促繁地土壤真菌多样性进行初步研究。方法利用PCR方法选择特异性引物ITS3-GC和ITS4扩增ITS rDNA基因的ITS2片段,结合DGGE分离技术,并借助生物信息学软件进行分析。结果所测的土壤样品中真菌ITS2基因序列与GenBank已报道的丝盖伞属Inocybe(Fr.)Fr.、口蘑属Tricholoma(Fr.)Staude、根肿黑粉菌属Entorrhiza C.A.Weber及未确定的子囊菌Ascomycota、土壤真菌等的序列相似性较高,土壤真菌种群结构相似性仅有19.4%~50.1%。结论冬虫夏草促繁地土壤真菌多样性丰富。 展开更多
关键词 冬虫夏草 土壤 真菌 多样性 变性梯度凝胶电泳技术
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幽门螺杆菌感染蒙古沙鼠模型胃黏膜菌群多样性研究 被引量:4
17
作者 宋阳 胡琳琳 +6 位作者 黄薇薇 余抒 廖亚玲 顾江 任莉 邹全明 郭刚 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期805-808,共4页
目的对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染蒙古沙鼠模型胃黏膜菌群多样性进行研究,探讨Hp感染与胃内菌群的关系。方法建立Hp感染的蒙古沙鼠模型,空白对照组、阴性对照组、直接感染组和预处理感染组各15例,4周后采集胃黏膜样本,同... 目的对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染蒙古沙鼠模型胃黏膜菌群多样性进行研究,探讨Hp感染与胃内菌群的关系。方法建立Hp感染的蒙古沙鼠模型,空白对照组、阴性对照组、直接感染组和预处理感染组各15例,4周后采集胃黏膜样本,同时检测HP定植率,并提取细菌基因组DNA,采用聚合酶链反应-变性梯度凝胶电泳技术(PCR-DGGE)对黏膜局部菌群进行指纹图谱分析,并对特异性条带进行测序鉴定分析。结果预处理感染组感染率(93.3%)与直接感染组感染率(26.7%)有明显差异(P<0.05);各实验组PCR-DGGE指纹图谱分析显示条带数量,空白对照组(21.6±2.5)、阴性对照组(3.3±1.1)、直接感染组(14.6±2.4)和预处理感染组(7.2±2.2),经统计学分析,各组间均有明显差异(P<0.05),提示蒙古沙鼠各组间菌群多样性存在显著的差异性。结论 Hp感染与胃黏膜菌群结构的变化密切相关。 展开更多
关键词 胃内菌群 幽门螺杆菌感染 聚合酶链反应-变性梯度凝胶电泳技术
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肉鸭养殖过程中发酵床垫料菌群结构变化的研究 被引量:3
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作者 章小婷 郑卫江 +2 位作者 林勇 袁婧 姚文 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1263-1270,共8页
【目的】探究发酵床使用时间和肉鸭粪便微生物对发酵床垫料菌群结构、总菌和大肠杆菌数量的影响。【方法】采集江苏某肉鸭发酵床养殖场内刚制作完成的发酵床垫料样品,及其饲养4批次、8批次后的垫料样品,同时采集各批次34日龄肉鸭粪便样... 【目的】探究发酵床使用时间和肉鸭粪便微生物对发酵床垫料菌群结构、总菌和大肠杆菌数量的影响。【方法】采集江苏某肉鸭发酵床养殖场内刚制作完成的发酵床垫料样品,及其饲养4批次、8批次后的垫料样品,同时采集各批次34日龄肉鸭粪便样品,采用变性梯度凝胶电泳技术(Denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)、16S r RNA基因序列分析和实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR)技术对发酵床使用过程中垫料菌群结构进行定性和定量研究。【结果】0批次(D0)与4批次(D4)、8批次(D8)垫料菌群相似性分别为68.81%、70.82%,而4批次与8批次间垫料菌群的相似性则达81.93%,显著高于D4、D8与D0间相似性(P<0.05)。条带6、8(最相似菌分别为Leqionella tunisiensis、Pedobacte bauzanensis)在3个时间点垫料菌群中均表现优势,且含量较为稳定;条带10(最相似菌为Rummeliibacillus suwonesis)仅在2个重复使用垫料菌群中表现优势;条带12、13(最相似菌分别是Psychrobacter sp.PRwf-1、Iamia majanohamensis)共同存在于垫料样和粪便样。肉鸭粪便中大肠杆菌的数量显著高于4批次、8批次垫料中的数量(P<0.05),与0批次垫料间差异不显著(P>0.05)。【结论】使用时间和肉鸭粪便微生物共同影响了发酵床垫料菌群结构和数量,菌群结构随使用时间的延长而趋于稳定。 展开更多
关键词 发酵床 肉鸭 细菌种群 变性梯度凝胶电泳技术 实时荧光定量PCR
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幽门螺杆菌感染对小鼠食道下端菌群的影响 被引量:3
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作者 田志颖 杨致邦 +3 位作者 黄微微 高继业 周雪 朱黎黎 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1241-1247,共7页
目的通过小鼠动物模型,检测幽门螺杆菌感染后食道下端菌群的变化,探讨其与食道下端疾病发生的关系。方法将30只BALB/C小鼠随机均分为阴性对照组和感染组。感染组通过灌喂幽门螺杆菌菌液建立动物感染模型,两组小鼠均在末次灌喂菌液4周后... 目的通过小鼠动物模型,检测幽门螺杆菌感染后食道下端菌群的变化,探讨其与食道下端疾病发生的关系。方法将30只BALB/C小鼠随机均分为阴性对照组和感染组。感染组通过灌喂幽门螺杆菌菌液建立动物感染模型,两组小鼠均在末次灌喂菌液4周后同时处死,取食道下端组织提取细菌的DNA,以原核生物16S rDNAV6区通用引物采用聚合酶链反应-变性梯度凝胶技术(PCR-DGGE)对V6区进行扩增,用Quantity-One 1-DAnalysis software.对DGGE图谱进行菌群分析,并将DGGE图谱上的组间差异条带用16S rDNAV6区引物分别扩增后,DNA测序,BLAST比对分析。结果 DGGE指纹图谱分析显示,实验组DNA条带数量极显著高于对照组(P<0.01),多样性指数、丰富度指数均显著高于对照组(0.01<P<0.05);菌群聚类分析能很好地在相似性系统树中分开,主成分分析不同组的菌群分别聚集在不同的位置,BLAST比对分析感染组出现特有细菌。结论食道下端定植着以乳杆菌、拟杆菌为优势菌的稳定菌群,幽门螺杆菌感染后菌群结构变化为以葡萄球菌、不动杆菌、无芽胞杆菌为优势菌的菌群。 展开更多
关键词 食道下端 菌群 幽门螺杆菌 感染 聚合酶链反应-变形梯度凝胶电泳技术
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PCR-DGGE技术鉴定高含盐生物脱硫反应器中的优势菌种 被引量:2
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作者 王桂萍 杨金生 +1 位作者 刘卫国 梁存珍 《中国沼气》 北大核心 2012年第5期10-13,共4页
为鉴定高含盐废水生物脱硫反应器中的优势菌种,从连续运行一年的生物脱硫反应器中获取微生物样品,用试剂盒提取微生物总DNA。使用细菌通用引物(GC341F/534R)从总DNA中成功扩增出16S rDNA片段,扩增的16S rDNA进行DGGE分离,对DGGE条带进... 为鉴定高含盐废水生物脱硫反应器中的优势菌种,从连续运行一年的生物脱硫反应器中获取微生物样品,用试剂盒提取微生物总DNA。使用细菌通用引物(GC341F/534R)从总DNA中成功扩增出16S rDNA片段,扩增的16S rDNA进行DGGE分离,对DGGE条带进行切胶和测序。测得的16S rDNA序列在GenBank数据库进行检索和同源性分析。结果表明,系统中有4种优势菌株:硫杆菌属的Thiobacillus sp.ISA11,盐生硫杆菌属的Halothiobacil-lus sp.ST15,Marine bacterium HB-5,Uncultured bacterium clone J69-151C-2A。其中,Thiobacillus sp.ISA11和Halothio-bacillus sp.ST15是主要的脱硫细菌。 展开更多
关键词 生物脱硫 变性梯度凝胶电泳技术 无色硫细菌 高盐度含硫废水
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