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高灵敏可视化核酸试纸条法快速检测HBV DNA 被引量：12
1
作者 杨贤 黄欢 +2 位作者 殷竹君 武海萍 周国华 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第7期1277-1281,共5页
目的:本研究旨在建立一种基于试纸条的快速、灵敏及可视化检测乙型肝炎病毒核酸的方法。方法:利用聚合酶链反应扩增乙肝病毒的保守区,其中上、下游引物的5'端分别修饰异硫氰酸荧光素和生物素。核酸试纸条上的胶体金以及检测线处分... 目的:本研究旨在建立一种基于试纸条的快速、灵敏及可视化检测乙型肝炎病毒核酸的方法。方法:利用聚合酶链反应扩增乙肝病毒的保守区,其中上、下游引物的5'端分别修饰异硫氰酸荧光素和生物素。核酸试纸条上的胶体金以及检测线处分别标记有链霉亲和素以及抗荧光素抗体。将扩增产物与展开液混合后点样,10 min后即可用肉眼判读结果。在优化了展开液成分、上样体积以及上样浓度之后,对该方法的灵敏度进行了评价。最后收集15例阴性样本及33例HBsAg阳性样本,按血清标志物结果进行分类后使用核酸试纸条进行检测,并与实时荧光PCR的结果进行了比较。结果:试纸条检测乙肝病毒核酸的灵敏度为250copies/mL。在临床样本的测定中,该方法与实时荧光定量PCR的特异性均为100%。且两种方法检测不同血清标志物类型的阳性检出率无差异。结论:核酸试纸条技术能够用于乙肝病毒核酸的可视化检测,与实时荧光PCR相比检测速度快,具有较好的灵敏度和特异性,适合流行病学调查以及在基层医院体检使用。 展开更多
关键词 核酸试纸条法 聚合酶链反应 乙肝病毒DNA
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长引物快速PCR结合核酸试纸条法可视化检测四种病原体 被引量：5
2
作者 黄欢 李朔 +1 位作者 孙丽洲 周国华 《标记免疫分析与临床》 CAS 2013年第6期436-439,共4页
目的建立一种基于病原体核酸分子的血液安全性检定方法,可视化区分血液中乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)、艾滋病毒(HIV)和梅毒螺旋体(TP)。方法利用长引物PCR扩增四种病原体核酸,循环步骤由传统的三步简化为两步。将修饰有小分子抗原的... 目的建立一种基于病原体核酸分子的血液安全性检定方法,可视化区分血液中乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)、艾滋病毒(HIV)和梅毒螺旋体(TP)。方法利用长引物PCR扩增四种病原体核酸,循环步骤由传统的三步简化为两步。将修饰有小分子抗原的扩增产物点样于固定有相应抗体的纳米颗粒试纸条上,肉眼判读显色结果。优化了长引物PCR对于四种病原体扩增的退火和变性温度,并评价了该方法用于病原体阳参及血清样本的检测准确性。结果四种病原体核酸扩增的退火温度分别为76℃、78℃、76℃和78℃;变性温度为84℃、90℃、84℃和88℃;本方法能成功区分四种病原体的阴阳性样本,准确性高;扩增时间仅为40 min/40个循环,检测为10 min。结论该方法能够用于四种病原体核酸的可视化检测,与传统的检测方法相比,检测速度快,成本低,无需昂贵的仪器,易于广大基层医院普及。 展开更多
关键词 长引物聚合酶链反应 核酸试纸条法 病原体核酸
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