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往复双向电泳法(R-PAGE)检测马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)核酸制备的改进 被引量：2
1
作者 黄元璜 《黑龙江农业科学》 2003年第4期28-30,共3页
双向往返电泳(R-PAGE)法是检测马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)的有效手段,本试验通过对该方法中马铃薯纺锤块茎类病毒核酸提取步骤的改进,提高了核酸纯度,使检测结果更为准确、清晰,且灵敏度高。
关键词 往复双向电泳法 R-PAGE 检测 马铃薯纺锤块茎类病毒 PSTVD 核酸制备
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TTV核酸模板快速制备方法 被引量：1
2
作者 苏明权 冯继红 +5 位作者 于文彬 徐光华 马越云 张建芳 张林 刘家云 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第19期1781-1783,共3页
目的　寻求建立适合大批量临床标本检测 TT病毒(TTV)核酸快速制备方法 ,直接用于 PCR扩增 .方法　应用蛋白酶 K裂解酚氯仿抽取法与直接快速裂解法 ,分别制备TTV核酸做 PCR模板 ,用于 TTV的聚合酶链反应的快速检测 .结果　在 30例非甲～... 目的　寻求建立适合大批量临床标本检测 TT病毒(TTV)核酸快速制备方法 ,直接用于 PCR扩增 .方法　应用蛋白酶 K裂解酚氯仿抽取法与直接快速裂解法 ,分别制备TTV核酸做 PCR模板 ,用于 TTV的聚合酶链反应的快速检测 .结果　在 30例非甲～非庚型肝炎血清和 5 0例慢性乙型肝炎患者血清 ,应用经典的蛋白酶 K裂解酚氯仿抽取法和直接快速裂解法 ,分别制备 TTV核酸模板 ,在相同条件下进行PCR扩增 ,结果两种制备方法的符合率为 89% .结论　 TTV是一种新发现的肝炎病毒 ,目前主要以实验室检测病毒核酸的存在为诊断依据 ,建立了具有快速、简便、适合大批量临床标本中 TTV核酸制备方法 ,对 TTV肝炎的快速诊断 。 展开更多
关键词 TT病毒 聚合酶链反应 核酸制备 诊断 肝炎病毒
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高效阴离子交换色谱法分离不对称PCR产物
3
作者 廖世奇 邵宁生 +1 位作者 曾家豫 孔维宝 《卫生职业教育》 2004年第21期84-85,共2页
目的为分离制备高纯度的DNA单双链提供新的技术方法.方法利用SOURCE15Q强阴离子交换柱分离纯化DNA单双链,并测定回收率.结果SOURCE 15Q柱在紫外检测波长为260nm,流速为1ml/min,流动相为pH9.0时,以20mmol/L Tris-HCl缓冲液+2.0mol/LNaCl... 目的为分离制备高纯度的DNA单双链提供新的技术方法.方法利用SOURCE15Q强阴离子交换柱分离纯化DNA单双链,并测定回收率.结果SOURCE 15Q柱在紫外检测波长为260nm,流速为1ml/min,流动相为pH9.0时,以20mmol/L Tris-HCl缓冲液+2.0mol/LNaCl,线性浓度梯度洗脱的分离条件下,能很好地对85个碱基长度不对称PCR产物的单双链进行分离;对24mer单链样品进行回收率测试,回收率为92.46%.结论利用SOURCE 15Q强阴离子交换柱分离纯化DNA单双链的方法简便、快捷、稳定、分辨率高、纯度高,适合核酸单链和双链样品的分离、纯化、鉴定和制备. 展开更多
关键词 高效阴离子交换色谱法 SOURE 15Q强阴离子交换柱 核酸制备 不对称PCR
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静态核酸制备技术试剂盒在乙型肝炎低病毒载量样本检测中的应用 被引量：1
4
作者 曲人亮 杨勇卫 +2 位作者 张帅 刘静静 刘君玮 《国际检验医学杂志》 CAS 2022年第12期1495-1499,共5页
目的探讨静态核酸制备技术试剂盒在乙型肝炎低病毒载量样本中的检测能力,及其在临床诊疗中的应用价值。方法采用乙型肝炎病毒(HBV)-DNA阴性血清作为稀释液,稀释世界卫生组织(WHO)标准品至80 IU/mL,依次用阴性血清倍比稀释,制备最低至1.2... 目的探讨静态核酸制备技术试剂盒在乙型肝炎低病毒载量样本中的检测能力,及其在临床诊疗中的应用价值。方法采用乙型肝炎病毒(HBV)-DNA阴性血清作为稀释液,稀释世界卫生组织(WHO)标准品至80 IU/mL,依次用阴性血清倍比稀释,制备最低至1.25 IU/mL样本,采用静态核酸制备技术试剂盒和罗氏COBAS核酸检测系统同步检测。同时采用静态核酸制备技术试剂盒对罗氏COBAS核酸检测系统检测40例结果在20~2.0×10^(7) IU/mL的临床样本、20例结果小于20 IU/mL的样本和20例表面抗原阴性体检人员血清样本进行研究。分析两种方法的一致性。结果对20例表面抗原阴性样本进行4次重复检测,静态核酸制备技术试剂盒的阴性符合率为100.0%;该技术的检测限为1.25 IU/mL,定量限为2.50 IU/mL,低于试剂盒声称的定量限5.00 IU/mL,低于罗氏COBAS核酸检测系统的检测限(20.00 IU/mL)。采用静态核酸制备技术试剂盒检测40.00 IU/mL和80.00 IU/mL样本的变异系数分别为4.28%和4.77%,而罗氏COBAS核酸检测系统分别为6.51%和6.21%。对罗氏COBAS核酸检测系统检测结果小于20.00 IU/mL的临床样本,采用静态核酸制备技术试剂盒进行复测,45%的样本检测结果大于5.00 IU/mL。对罗氏COBAS核酸检测系统检测结果在20.0~2.0×10^(7) IU/mL临床样本进行检测,两种方法测定值lg差值均未超过±0.5,二者相关系数为0.9949。两种方法可操作性比较,静态核酸制备技术试剂盒在操作时间、成本、检测通量等方面均优于罗氏COBAS核酸检测系统。结论静态核酸制备技术试剂盒检测HBV-DNA样本的定量限为2.50 IU/mL,其精密度明显优于罗氏COBAS核酸检测系统。该方法操作简单、快速,可作为临床抗病毒治疗疗效观察的首选检测方法。 展开更多
关键词 静态核酸制备技术试剂盒 罗氏COBAS核酸检测系统 乙型肝炎病毒 病毒载量
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指数线性聚合酶链式反应法制备焦磷酸测序反应的单链模板 被引量：8
5
作者 杨会勇 奚涛 +3 位作者 梁超 陈之遥 徐定邦 周国华 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第4期489-494,共6页
建立了一种简单的焦磷酸测序用单链模板制备方法,以包含SNP6位点一段78bp序列为对象,采用非热启动Taq酶进行指数线性PCR扩增,通过加入甘油、BSA等PCR增强剂增加反应的效率和特异性,设计反应液A和B处理PCR产物中干扰焦测序的限制性引物... 建立了一种简单的焦磷酸测序用单链模板制备方法,以包含SNP6位点一段78bp序列为对象,采用非热启动Taq酶进行指数线性PCR扩增,通过加入甘油、BSA等PCR增强剂增加反应的效率和特异性,设计反应液A和B处理PCR产物中干扰焦测序的限制性引物、未完全反应的产物、焦磷酸和dNTPs等杂质,处理后1～2μLPCR产物就可直接用于焦测序检测。测定了BRCA1基因中5个乳腺癌相关的SNP位点,获得的图谱无非特异性信号,测得序列与参考序列一致,能够进行SNP分析,表明本方法可以制备高质量焦测序单链模板,且使焦测序的成本显著降低,操作更为简便,减少了操作过程中样本间的交叉污染,有利于焦测序样品预处理的自动化。 展开更多
关键词 焦测序 指数线性扩增 单链核酸模板的制备 单核苷酸多态性
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兽医领域病毒宏基因组非序列依赖性单引物扩增方法的研究现状 被引量：1
6
作者 徐利军 王晓泉 刘秀梵 《中国家禽》 北大核心 2017年第12期1-4,共4页
新一代测序技术的出现和不断完善,极大地推动了宏基因组学的发展。宏基因组学研究的路线主要包括核酸样本制备、高通量测序及生物信息学分析,而核酸样本的质量直接影响后续环节。目前有多种方法可以用于低浓度样本的扩增,其中非序列依... 新一代测序技术的出现和不断完善,极大地推动了宏基因组学的发展。宏基因组学研究的路线主要包括核酸样本制备、高通量测序及生物信息学分析,而核酸样本的质量直接影响后续环节。目前有多种方法可以用于低浓度样本的扩增,其中非序列依赖性单引物扩增(SISPA)法因其经济高效性,越来越受到研究者的青睐。文章就兽医领域病毒宏基因组学研究过程中广泛使用的相关SISPA方法进行概述,包括核酸样本的预处理及扩增方案等,为相关研究提供参考。 展开更多
关键词 病毒 宏基因组 非序列依赖性单引物扩增 核酸样本制备
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