干扰hENT1表达增加5-FU在胰腺癌SW1990细胞内浓度 被引量：5

1

作者 徐建敏 张红刚 +3 位作者 费晓庆 鞠熀先 郑杰 刘胜利 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1351-1355,共5页

目的明确hENT1在5-FU跨膜转运和返流中的作用,以及返流对5-FU在细胞内浓度的影响。方法将能特异性下调hENT1的重组及对照质粒用脂质体法转染到SW1990细胞内,RT-PCR检测hENT1 mRNA表达情况。分别培养SW1990、pSilence-hENT1Si SW1990、pS... 目的明确hENT1在5-FU跨膜转运和返流中的作用,以及返流对5-FU在细胞内浓度的影响。方法将能特异性下调hENT1的重组及对照质粒用脂质体法转染到SW1990细胞内,RT-PCR检测hENT1 mRNA表达情况。分别培养SW1990、pSilence-hENT1Si SW1990、pSilence-Control SW1990细胞,3组细胞均置于含5-FU100mg·L-1的DMEM中温浴。各组取等量细胞刮取液两份,一份用毛细管区带电泳测定5-FU含量、另一份作平行样本测定蛋白含量,最后计算细胞内5-FU浓度。结果pSilence-hENT1Si SW1990细胞hENT1 mRNA表达水平下调0.5。SW1990组用5-FU温浴后,细胞内5-FU浓度在早期迅速升高,120min后处于平台期。pSilence-hENT1Control-SW1990组与SW1990组相比无差异(P>0.05)。而pSilence-hENT1SiSW1990细胞内5-FU浓度早期上升较慢,但随着时间延长,浓度逐渐升高,120min后细胞内浓度稳定,高于对照组中浓度(P<0.05)。结论干扰hENT1表达可以提高5-FU在SW1990细胞内浓度。hENT1是SW1990细胞向外返流5-FU的主要通道。 展开更多

关键词 核苷转运载体 RNA干扰 5-氟尿嘧啶 胰腺癌细胞株 毛细管区带电泳

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阻断胰腺癌细胞膜hENTs对氟尿嘧啶细胞毒性的影响 被引量：5

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作者 高毅明 刘胜利 《现代医学》 2006年第3期149-153,共5页

目的 研究胰腺癌细胞株中核苷载体（NTs）的表达，以及应用潘生丁（dipyridamole，DP）阻断平衡型核苷转运载体（hENTs）后，5-氟尿嘧啶（5-Fluorouraci，5-FU）对胰腺癌细胞株毒性作用的影响。方法 选择胰腺癌细胞株Panc-1、Sw1990和As... 目的 研究胰腺癌细胞株中核苷载体（NTs）的表达，以及应用潘生丁（dipyridamole，DP）阻断平衡型核苷转运载体（hENTs）后，5-氟尿嘧啶（5-Fluorouraci，5-FU）对胰腺癌细胞株毒性作用的影响。方法 选择胰腺癌细胞株Panc-1、Sw1990和Aspc-1进行实验。RT-PCR法检测细胞株hENT1、hENT2、hCNT1、hCNT2和hCNT3的mRNA表达。根据DP浓度将各细胞株分为4个实验组，即DP空白组，DP浓度为5μmol·L^-1组、10μm01·L^-1组和40μmol·L^-1组，每组细胞分别在含有一定浓度（0-2×10^8ng·L^-1）的5-FU的培养液中培养48h。MTT法检测每组3种细胞株的增殖，并计算各组5-Fu的半数抑制浓度（IC50）。结果hENT1的mRNA在Panc-1和Sw1990中表达较在Aspc-1中高（P〈0．05），hENT2在Aspc-1中未见表达；hCNTs在3种细胞株中均有表达，且无明显差异。DP本身对3种细胞株无毒性作用，而5-FU与其联合后能明显提高5-FU对高表达hENTs细胞（Panc-1和Sw1990）的毒性作用；在DP 10μmol·L^-1时，对Panc-1细胞的毒性作用增强7倍（P〈0．01），对Sw1990细胞增强10倍（P〈0．01）。而在hENT1低表达、hENT2未见表达的细胞（Aspc-1）中，DP对5-FU的毒性作用没有影响。结论在胰腺癌细胞株中，DP阻断细胞膜上hENTs后能显著增强5-FU的作用效果，提示在临床上可能需要依据hENTs的表达情况来选择联合应用hENTs阻断剂增强核苷类抗癌药物作用。 展开更多

关键词 细胞毒性 胰腺癌细胞株 核苷转运载体 5-氟尿嘧啶 潘生丁

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阻断胰腺癌平衡型核苷转运载体对5-氟尿嘧啶诱导细胞凋亡及细胞周期改变的影响 被引量：2

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作者 高毅明 周予民 +2 位作者 宋海湖 范自平 刘浩 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2011年第4期396-400,共5页

目的研究应用潘生丁(DP)阻断平衡型核苷转运载体(hENTs)后,5-氟尿嘧啶(5-FU)对胰腺癌细胞株Panc-1凋亡及细胞周期的影响。方法将Panc-1细胞分为hENTs未阻断组和hENTs阻断组,hENTs阻断组再根据DP浓度分为5μmol/L DP组和10μmol/L DP组... 目的研究应用潘生丁(DP)阻断平衡型核苷转运载体(hENTs)后,5-氟尿嘧啶(5-FU)对胰腺癌细胞株Panc-1凋亡及细胞周期的影响。方法将Panc-1细胞分为hENTs未阻断组和hENTs阻断组,hENTs阻断组再根据DP浓度分为5μmol/L DP组和10μmol/L DP组。各组细胞分别在含有1.5×106ng/L 5-FU或不含5-FU的培养液中培养24 h后,流式细胞仪检测细胞的凋亡率和细胞周期改变。结果①各组细胞凋亡检测结果:在含有1.5×106ng/L 5-FU培养液中培养24 h后,5μmol/L及10μmol/L DP组的细胞凋亡率明显高于未阻断组(P<0.05),10μmol/L DP组又明显高于5μmol/L DP组(P<0.05);在不含5-FU的培养液中培养24 h后,各组之间细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。②各组细胞周期检测结果:在含有1.5×106ng/L 5-FU培养液中培养24 h后,未阻断组细胞进入合成期(S期)的比例减少,停滞在合成前期(G1期),5μmol/L DP组及10μmol/L DP组的细胞进入合成期(S期)的比例较未阻断组进一步减少(P<0.05),且随着DP浓度的增加,细胞进入合成期(S期)的比例减少得更多(P<0.05),5μmol/L DP组和10μmol/L DP组进入合成期(S期)的比例分别是未阻断组的87.09%和74.06%。5-FU对细胞合成后期(G2期)的影响较小,除5μmol/L DP组较未阻断组G2期细胞数量增加有统计学意义(P<0.05)外,其余各组之间差异均无统计学意义(P>0.05);在不含5-FU的培养液中培养24 h后,各组细胞周期中各期无明显改变,各组之间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在胰腺癌细胞株Panc-1中,DP阻断细胞膜上hENTs后,能显著增强5-FU对胰腺癌细胞促凋亡作用及抑制胰腺癌细胞分裂增殖的作用,这种增强作用可能与阻断hENTs后细胞内5-FU浓度提高有关,而与DP本身作用无关。 展开更多

关键词 细胞凋亡 细胞周期 核苷转运载体 5氟尿嘧啶 潘生丁

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人平衡型核苷载体在乳腺癌细胞中的表达情况及其对5-FU药效的影响

4

作者 高毅明 赵春英 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2014年第5期599-602,共4页

目的研究乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-468、SK-BR-3、MCF-7中人平衡型核苷载体(hENTs)的表达及其对5-氟尿嘧啶(5-FU)细胞毒性的影响。方法 MDA-MB-231、MDA-MB-468、SK-BR-3、MCF-7细胞常规培养于含10%小牛血清的高糖DMEM培养液中... 目的研究乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-468、SK-BR-3、MCF-7中人平衡型核苷载体(hENTs)的表达及其对5-氟尿嘧啶(5-FU)细胞毒性的影响。方法 MDA-MB-231、MDA-MB-468、SK-BR-3、MCF-7细胞常规培养于含10%小牛血清的高糖DMEM培养液中。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测4种细胞株中hENT1 mRNA及hENT2 mRNA的表达。每种细胞分别在含有一定浓度序列(1.28×104 ng/L^2.00×108 ng/L)5-FU的培养液中培养48 h。MTT法检测4种细胞株增殖,并计算其5-FU的半数抑制浓度(IC50)。结果①hENT1及hENT2 mRNA在MDA-MB-231、MDA-MB-468、SK-BR-3细胞中的表达均较其在MCF-7细胞中高(P<0.05),但其表达在MDA-MB-231、MDA-MB-468、SK-BR-3细胞中差异无统计学意义(P>0.05)。hENT2 mRNA表达在4种细胞中均较hENT1 mRNA表达低,差异有统计学意义(P<0.05)。②MTT结果显示,5-FU的IC50在MDAMB-231、MDA-MB-468、SK-BR-3细胞株中均较在MCF-7细胞株中低(P<0.05),在MDA-MB-231、MDA-MB-468、SK-BR-3细胞株之间差异无统计学意义(P>0.05)。③在5-FU的IC50较低的乳腺癌细胞株(MDA-MB-231、MDAMB-468、SK-BR-3)中高表达hENTs,而在5-FU的IC50较高的乳腺癌细胞株(MCF-7)中,低表达hENTs或无表达。结论在乳腺癌细胞株中,细胞膜上hENTs的表达情况能显著影响5-FU的作用效果,其结果提示,在临床上可能需要依据hENTs的表达情况来选择核苷类抗癌药物。 展开更多

关键词 细胞毒性 乳腺癌细胞株 核苷转运载体 5-氟尿嘧啶

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RNAi下调hENT1可增强5-氟尿嘧啶对胰腺癌细胞G0／G1期的阻滞作用

5

作者 陈武强 刘胜利 徐建敏 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期177-181,210,共6页

目的:运用RNAi技术下调平衡型核苷转运蛋白1(hENT1)的表达,观察hENT1下调后5-氟尿嘧啶(5-FU)对胰腺癌Panc-1细胞周期阻滞作用的改变情况。方法:设计并构建能表达特异性针对hENT1的shRNA的重组质粒pSilence-hENT1 4.1-CMV neo,用脂质体Li... 目的:运用RNAi技术下调平衡型核苷转运蛋白1(hENT1)的表达,观察hENT1下调后5-氟尿嘧啶(5-FU)对胰腺癌Panc-1细胞周期阻滞作用的改变情况。方法:设计并构建能表达特异性针对hENT1的shRNA的重组质粒pSilence-hENT1 4.1-CMV neo,用脂质体Lipofectamin 2000将重组质粒转染胰腺癌Panc-1细胞,并以含G418(600μg/ml)的培养液筛选阳性转染细胞(pSilence-hENT1 Panc-1)。RT-PCR检测下调hENT1 mRNA表达的效果及稳定性。用流式细胞仪检测hENT1下调前后Panc-1细胞在相同浓度5-FU(20μmol/L)中24h后的细胞周期。结果:测序显示重组质粒pSilence-hENT1 4.1-CMVneo中插入片段序列正确。RT-PCR结果显示pSilence-hENT1 Panc-1细胞hENT1mRNA表达水平下调,并在2个月内(共传代15次)保持相对稳定。细胞周期检测结果显示在相同浓度5-FU的作用下,hENT1下调组胰腺癌细胞的G0/G1期百分比为未下调组的1.20倍(P<0.01),S期百分比则是未下调组的66.76%(P<0.01)。结论:抑制hENT1的表达可以增强5-FU对胰腺癌细胞的G0/G1期阻滞作用,从而可提高其抗癌效果。 展开更多

关键词 胰腺癌 核苷转运载体 RNA干扰 5-氟尿嘧啶 细胞周期

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胰腺癌RRM1、hENT1蛋白表达及其与吉西他滨化疗效果的相关性

6

作者 徐媛 李艺 徐蔚蔚 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第s2期113-114,共2页

目的 探讨胰腺癌组织中RRM1、hENT1的表达及其与吉西他滨化疗敏感性的关系.方法 对12例胰腺癌患者在化疗前以免疫组化染色法检测核糖核苷酸还原酶M1(RRM1)、核苷转运载体(hENT1)表达,后行吉西他滨化疗,3个月后评价疗效.结果 RRM1阴性患... 目的 探讨胰腺癌组织中RRM1、hENT1的表达及其与吉西他滨化疗敏感性的关系.方法 对12例胰腺癌患者在化疗前以免疫组化染色法检测核糖核苷酸还原酶M1(RRM1)、核苷转运载体(hENT1)表达,后行吉西他滨化疗,3个月后评价疗效.结果 RRM1阴性患者的RR显著优于RRM1阳性者,hENT1阳性患者的RR显著优于阴性者(P＜0.05).结论 胰腺癌患者肿瘤组织中RRM1、hENT1表达可能成为预测吉西他滨化疗效果的指标,为选择最佳化疗方案提供理论依据. 展开更多

关键词 胰腺癌 吉西他滨 核苷转运载体

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非小细胞肺癌吉西他滨药物耐药相关基因研究进展 被引量：8

7

作者 陈莹 钱晓萍 刘宝瑞 《中国肺癌杂志》 CAS 2011年第5期421-428,共8页

随着药物基因组学、药物遗传学的发展,基因指导下个体化治疗成为提高非小细胞肺癌(non-smallcell lung cancer,NSCLC)化疗疗效的有效途径之一。确定药物的相关预测性分子标志物从而指导临床治疗、提高疗效被广泛关注。吉西他滨是目前NS... 随着药物基因组学、药物遗传学的发展,基因指导下个体化治疗成为提高非小细胞肺癌(non-smallcell lung cancer,NSCLC)化疗疗效的有效途径之一。确定药物的相关预测性分子标志物从而指导临床治疗、提高疗效被广泛关注。吉西他滨是目前NSCLC常用化疗药物之一,本文主要阐述了近年来吉西他滨药物耐药相关基因在NSCLC个体化治疗方面的研究进展。 展开更多

关键词 肺肿瘤 吉西他滨 平衡型核苷转运载体1 核糖核苷酸还原酶亚基1 脱氧胞苷激酶

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白细胞介素-28B和平衡性核苷转运载体1基因多态性与HIV／HCV合并感染者HCV自发清除的关系研究 被引量：4

8

作者 彭瑾瑜 陈曦 +3 位作者 贺健梅 郑军 覃碧云 江洋 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期379-382,共4页

目的分析湖南省HIV／HCV合并感染者的白细胞介素-28B（IL-28B）和平衡性核苷转运载体1（ENT1）基因多态性与HCV自发清除的关系。方法对湖南省107例HIV／HCV合并感染者的IL-28B和ENT1基因位点（rs12980275、rsl2979860、rs8099917和rs760... 目的分析湖南省HIV／HCV合并感染者的白细胞介素-28B（IL-28B）和平衡性核苷转运载体1（ENT1）基因多态性与HCV自发清除的关系。方法对湖南省107例HIV／HCV合并感染者的IL-28B和ENT1基因位点（rs12980275、rsl2979860、rs8099917和rs760370）进行分型，比较其在慢性肝炎组和自发清除组的基因多态性分布。结果在HIV／HCV合并感染者中，IL-28B基因rs12980275、rs12979860和rs8099917位点的主要基因型分别为AA、CC和TT型，均占84．1％。3个位点高度连锁不平衡（r2〉0．94），慢性肝炎组和自发清除组基因型分布差异有统计学意义（P〈0．05），携带IL-28B主要基因型的感染者更易发生HCV自发清除。ENT1基因的rs760370位点基因型分布在两组间的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论IL-28B基因AA、CC和TT型与HCV自发清除有关。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 人类免疫缺陷病毒 白细胞介素-28B 平衡性核苷转运载体1 自发清除 单核苷酸多态性

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RRMl、hENT1的表达与胰腺癌吉西他滨化疗疗效相关性研究进展 被引量：2

9

作者 王天朋 刘枭荣 +3 位作者 陈飞 陈敏捷 吴斌 钟征翔 《肝胆胰外科杂志》 CAS 2018年第1期84-86,共3页

胰腺癌预后较差,化疗在胰腺癌的治疗中发挥重要作用。以吉西他滨的主的化疗方案是胰腺癌化疗的标准方案。而吉西他滨耐药仍然是延长患者总生存(overall survival,OS)和无病生存期(disease free survival,DFS)的重要阻碍。目前研究表明,... 胰腺癌预后较差,化疗在胰腺癌的治疗中发挥重要作用。以吉西他滨的主的化疗方案是胰腺癌化疗的标准方案。而吉西他滨耐药仍然是延长患者总生存(overall survival,OS)和无病生存期(disease free survival,DFS)的重要阻碍。目前研究表明,在多种吉西他滨耐药细胞系中RRM1和h ENT1有不同程度表达。而目前通过对RRM1、h ENT1等相关基因的表达预测吉西他滨的化疗效果的研究仍处于初级阶段,有待更进一步的研究。本文对RRM1、h ENT1的表达与吉西他滨化疗的耐药性及预后新进展作一综述。 展开更多

关键词 胰腺癌 核苷酸还原酶亚单位M1(RRM1) 人平衡型核苷转运载体1(h ENT1) 吉西他滨 耐药机制

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hENT1蛋白和RRM1蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

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作者 张吉 刘志良 +1 位作者 哈敏文 朱志图 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第3期48-49,共2页

目的探讨人类平衡型核苷转运载体1(hENT1)及核糖核苷酸还原酶M1(RRM1)在非小细胞肺癌(NSCLC)发病、预后中的作用及机制。方法应用免疫组化方法检测54份NSCLC组织及癌旁正常组织中hENT1、RRM1蛋白表达情况,并分析其与NSCLC临床病理特征... 目的探讨人类平衡型核苷转运载体1(hENT1)及核糖核苷酸还原酶M1(RRM1)在非小细胞肺癌(NSCLC)发病、预后中的作用及机制。方法应用免疫组化方法检测54份NSCLC组织及癌旁正常组织中hENT1、RRM1蛋白表达情况,并分析其与NSCLC临床病理特征及接受含吉西他滨方案化疗患者生存时间的相关性。结果hENT1蛋白及RRM1蛋白在NSCLC组织中的阳性表达率均显著高于癌旁正常肺组织(P<0.05),但均与年龄、性别、生存时间等临床特征无显著相关性;hENT1蛋白阳性表达、RRM1蛋白阴性表达者生存时间显著高于RRM1蛋白表达阴性、hENT1蛋白表达阳性者(P<0.05)。结论hENT1蛋白和RRM1蛋白在NSCLC发病中具有一定作用,二者可通过调节化疗药物敏感性影响患者预后;联合检测上述两种蛋白表达有利于为患者制订个体化治疗方案。 展开更多

关键词 人类平衡型核苷转运载体1 核糖核苷酸还原酶M1 肺癌 非小细胞性 化疗敏感性

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Mdivi-1对匹鲁卡品致痫大鼠海马神经元保护作用及其机制研究

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作者 甘露 周弟弥 +1 位作者 张磊 陈琳 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第5期751-756,共6页

目的研究线粒体分裂蛋白抑制剂(Mdivi-1)对癫痫大鼠行为学及海马区线粒体动力相关蛋白1(DRP1)、平衡型核苷转运载体1(ENT1)蛋白的影响。方法20只雄性SD大鼠随机均分为正常组、模型组、DMSO组、Mdivi-1组。观察各组大鼠行为学改变,透射... 目的研究线粒体分裂蛋白抑制剂(Mdivi-1)对癫痫大鼠行为学及海马区线粒体动力相关蛋白1(DRP1)、平衡型核苷转运载体1(ENT1)蛋白的影响。方法20只雄性SD大鼠随机均分为正常组、模型组、DMSO组、Mdivi-1组。观察各组大鼠行为学改变,透射电镜观察脑组织结构变化;免疫组化及免疫荧光法检测各组大鼠海马区DRP1表达;Western blot检测各组大鼠海马区DRP1、ENT1蛋白变化。结果与模型组或DMSO组相比,Mdivi-1组大鼠癫痫发作潜伏期明显增加而发作频率下降(P<0.05);电镜观察结果显示,模型组部分内外膜崩解,线粒体明显破坏、肿胀而Mdivi-1组损伤情况减轻;免疫组化结果显示,模型组大鼠脑组织海马区DRP1阳性细胞数增多,而Mdivi-1组阳性细胞数下降(P<0.05);免疫荧光显示,DRP1在海马神经元中有表达;Western blot结果显示,与正常组相比,DMSO和模型组中ENT1、DRP1蛋白表达升高,而Mdivi-1组中ENT1、DRP1蛋白表达下降(P<0.05)。结论Mdivi-1能靶向阻断DRP1,调控线粒体动力学平衡,从而影响ENT1表达,对海马神经元具有神经保护的作用。 展开更多

关键词 癫痫 海马神经元 平衡型核苷转运载体-1 线粒体分裂蛋白抑制剂-1 动力相关蛋白1

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