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利用小肽控制的基于蛋白质内含子非层析标签制备重组蛋白(英文)
1
作者
施长华
孟清
Wood D W
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第2期202-208,共7页
基于蛋白质内含子的蛋白质纯化自我断裂标签已经被广泛使用超过15年之久.但这一系统体内表达过程的提前断裂一直是限制这一技术广泛应用的瓶颈,特别是在需要高温表达和长表达周期的真核表达系统中.本研究介绍了一种利用小肽控制的基于...
基于蛋白质内含子的蛋白质纯化自我断裂标签已经被广泛使用超过15年之久.但这一系统体内表达过程的提前断裂一直是限制这一技术广泛应用的瓶颈,特别是在需要高温表达和长表达周期的真核表达系统中.本研究介绍了一种利用小肽控制的基于蛋白质内含子和非层析标签ELP(elastin-like polypeptide)的自我断裂系统.在这一系统中,蛋白质内含子的体内外活性严格受到其结构互补小肽控制.在体内表达不含有互补小肽时,蛋白质内含子不具有活性;而在体外添加结构互补小肽,蛋白质内含子结构恢复并发生C端断裂反应释放目的蛋白.由于非层析标签ELP的引入,因此整个纯化过程可以简单地通过几步机械沉淀完成.此外,这一系统反应pH、小肽与前体蛋白之间的摩尔比及断裂速率也一并进行了系统的研究.
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关键词
小肽
蛋白质内含子
非层析
标签
生物分离
蛋白质
纯化
标签
纯化
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职称材料
断裂内含肽介导的亲和介质与亲和标签的应用
2
作者
杜夜星
周挺峻
+1 位作者
陈浩然
夏海锋
《高校化学工程学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2020年第2期438-446,共9页
应用Cfa断裂内含肽构建了一种新型的亲和纯化系统,并完成对目的蛋白无标签纯化。首先对Cfa断裂内含肽的IN片段与IC片段进行分子改造,通过研究在自由混合条件下的断裂情况,测定了其断裂速率。其次以改造后的IN片段作为配体与环氧活化的...
应用Cfa断裂内含肽构建了一种新型的亲和纯化系统,并完成对目的蛋白无标签纯化。首先对Cfa断裂内含肽的IN片段与IC片段进行分子改造,通过研究在自由混合条件下的断裂情况,测定了其断裂速率。其次以改造后的IN片段作为配体与环氧活化的琼脂糖微球载体偶联,制备了IN亲和层析介质;IC片段作为亲和标签与目的蛋白GFP融合,并利用IN亲和层析介质实现对目的蛋白进行无标签纯化。结果表明,将IN与IC-GFP片段混合后,30s内即可断裂超过50%,4 h内即可完全断裂;IN亲和层析介质的静态载量为66.78 mg·mL^-1,动态吸附载量约为30 mg·mL^-1;纯化后的绿色荧光蛋白(GFP)纯度达到了96.7%,回收率为29.3%。Cfa断裂内含肽的应用为开发新型亲和纯化技术提供了一种潜在的方法。
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关键词
Cfa断裂内含肽
蛋白
纯化
亲和层析
剪切
无
标签
纯化
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职称材料
题名
利用小肽控制的基于蛋白质内含子非层析标签制备重组蛋白(英文)
1
作者
施长华
孟清
Wood D W
机构
东华大学生物科学与技术研究所
Department of Chemical and Biomolecular Engineering
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第2期202-208,共7页
基金
Supported by National Natural Science Foundation ofChina(No.31070698)
Shanghai Key Projects of Basic Research(No.10JC1400300)
Innovation Foundation of Donghua University for PhD Candidates(No.12D11320)~~
文摘
基于蛋白质内含子的蛋白质纯化自我断裂标签已经被广泛使用超过15年之久.但这一系统体内表达过程的提前断裂一直是限制这一技术广泛应用的瓶颈,特别是在需要高温表达和长表达周期的真核表达系统中.本研究介绍了一种利用小肽控制的基于蛋白质内含子和非层析标签ELP(elastin-like polypeptide)的自我断裂系统.在这一系统中,蛋白质内含子的体内外活性严格受到其结构互补小肽控制.在体内表达不含有互补小肽时,蛋白质内含子不具有活性;而在体外添加结构互补小肽,蛋白质内含子结构恢复并发生C端断裂反应释放目的蛋白.由于非层析标签ELP的引入,因此整个纯化过程可以简单地通过几步机械沉淀完成.此外,这一系统反应pH、小肽与前体蛋白之间的摩尔比及断裂速率也一并进行了系统的研究.
关键词
小肽
蛋白质内含子
非层析
标签
生物分离
蛋白质
纯化
标签
纯化
Keywords
peptide
intein
non-chromatographic bioseparations
protein purification
tag-based methods
分类号
Q819 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
断裂内含肽介导的亲和介质与亲和标签的应用
2
作者
杜夜星
周挺峻
陈浩然
夏海锋
机构
江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室
江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室
出处
《高校化学工程学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2020年第2期438-446,共9页
基金
国家重点研发计划(2018YFC1603202/2018YFC1603200)。
文摘
应用Cfa断裂内含肽构建了一种新型的亲和纯化系统,并完成对目的蛋白无标签纯化。首先对Cfa断裂内含肽的IN片段与IC片段进行分子改造,通过研究在自由混合条件下的断裂情况,测定了其断裂速率。其次以改造后的IN片段作为配体与环氧活化的琼脂糖微球载体偶联,制备了IN亲和层析介质;IC片段作为亲和标签与目的蛋白GFP融合,并利用IN亲和层析介质实现对目的蛋白进行无标签纯化。结果表明,将IN与IC-GFP片段混合后,30s内即可断裂超过50%,4 h内即可完全断裂;IN亲和层析介质的静态载量为66.78 mg·mL^-1,动态吸附载量约为30 mg·mL^-1;纯化后的绿色荧光蛋白(GFP)纯度达到了96.7%,回收率为29.3%。Cfa断裂内含肽的应用为开发新型亲和纯化技术提供了一种潜在的方法。
关键词
Cfa断裂内含肽
蛋白
纯化
亲和层析
剪切
无
标签
纯化
Keywords
Cfa Dna E split intein
protein purification
affinity chromatography
cleavage
none-tagged
分类号
Q819 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用小肽控制的基于蛋白质内含子非层析标签制备重组蛋白(英文)
施长华
孟清
Wood D W
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
下载PDF
职称材料
2
断裂内含肽介导的亲和介质与亲和标签的应用
杜夜星
周挺峻
陈浩然
夏海锋
《高校化学工程学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2020
0
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职称材料
已选择
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