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应用Nested PCR技术检测柑桔木虱及其寄主九里香的柑桔黄龙病带菌率 被引量：72
1
作者 李韬 柯冲 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期31-35,共5页
应用PCR及Nested PCR技术检测柑桔木虱及其寄主九里香的结果表明:PCR只可检测最低2头带菌木虱,Nested PCR可检测到单个带菌木虱。100头带菌木虱中,单虫检出率为96％。检测田间重、中等、轻病的柑桔园内的木虱,其带菌率依次为87％、53％... 应用PCR及Nested PCR技术检测柑桔木虱及其寄主九里香的结果表明:PCR只可检测最低2头带菌木虱,Nested PCR可检测到单个带菌木虱。100头带菌木虱中,单虫检出率为96％。检测田间重、中等、轻病的柑桔园内的木虱,其带菌率依次为87％、53％和21％。在病芦柑上饲菌不同天数的木虱均能检测出带菌,其饲菌时间最短为1d。城市九里香叶片及在其叶上取食的木虱单虫,均能用Nested PCR检测出病原。饲菌木虱接种九里香及芦柑健苗,在植株尚未表现症状时,常规PCR难检测出病原,但用Nested PCR则能检测到病原,说明九里香不仅是木虱的寄主,而且是黄龙病病原的隐症寄主。 展开更多
关键词 柑桔黄龙病 PCR Nested PCR 木虱 九里香 寄主 带菌率 检测
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柑桔黄龙病综合防治的理论与实践 被引量：40
2
作者 邓明学 《中国农学通报》 CSCD 2006年第6期307-310,共4页
柑桔黄龙病是世界性的毁灭性病害,除原有的亚洲、非洲外,美国、巴西也已发现此病和其传播媒介-柑桔木虱。根据柑桔木虱是黄龙病唯一自然传播媒介和广西柑桔主产区无法实施隔离种植的特点以及柑桔黄龙病已成为广西柑桔发展最大障碍的实... 柑桔黄龙病是世界性的毁灭性病害,除原有的亚洲、非洲外,美国、巴西也已发现此病和其传播媒介-柑桔木虱。根据柑桔木虱是黄龙病唯一自然传播媒介和广西柑桔主产区无法实施隔离种植的特点以及柑桔黄龙病已成为广西柑桔发展最大障碍的实际和柑桔生产现状,提出在黄龙病区建立以柑桔黄龙病为第一重要病害,柑桔木虱为第一重要害虫的柑桔病虫害综合防治体系,实施以控制柑桔木虱为重点的柑桔黄龙病综合防治措施。3年的大面积田间验证试验结果表明,验证区累计发病率为0.72%,对照Ⅰ区达9.42%,对照Ⅱ区达7.14%。 展开更多
关键词 柑桔黄龙病 综合防治 理论和应用
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柑桔黄龙病病原DNA片段的克隆及序列分析 被引量：28
3
作者 孔维文 邓晓玲 +1 位作者 梁志慧 唐伟文 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期71-75,共5页
本研究利用聚合酶链式反应技术 (PCR) ,合成了中国柑桔黄龙病病原的一段 DNA片段。将此片段插入到 p UC18的 Eco RI位点 ,并转化进大肠杆菌 (Escherichia coli)的 DH5α菌株中。通过 PCR鉴定 ,限制性内切酶 (Eco RI)酶切分析及核苷酸序... 本研究利用聚合酶链式反应技术 (PCR) ,合成了中国柑桔黄龙病病原的一段 DNA片段。将此片段插入到 p UC18的 Eco RI位点 ,并转化进大肠杆菌 (Escherichia coli)的 DH5α菌株中。通过 PCR鉴定 ,限制性内切酶 (Eco RI)酶切分析及核苷酸序列分析 ,均表明克隆成功。序列分析结果显示 ,克隆片段与已知相应序列间同源性达 98.6 %。该研究为制备柑桔黄龙病病原 DNA分子探针奠定了基础。 展开更多
关键词 柑桔黄龙病 克隆 序列分析 PCR技术 病原
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柑桔黄龙病诊断法的研究进展 被引量：26
4
作者 田亚南 柯穗 柯冲 《福建农业学报》 CAS 1998年第1期27-35,共9页
研究柑桔黄龙病的困难，在于它的病原无法人工培养。因此，长期以来对黄龙病的诊断，主要依据典型的黄梢和叶片斑驳症状。在柑桔园管理不良，缺乏营养或其它病虫混合为害时，便难依据症状作出正确的诊断。这是造成对黄龙病认识上种种混... 研究柑桔黄龙病的困难，在于它的病原无法人工培养。因此，长期以来对黄龙病的诊断，主要依据典型的黄梢和叶片斑驳症状。在柑桔园管理不良，缺乏营养或其它病虫混合为害时，便难依据症状作出正确的诊断。这是造成对黄龙病认识上种种混淆的主要原因。７０年代应用电镜观察到黄龙病病原（ＢＬＯ）之后，电镜便成为诊断黄龙病的重要手段。但因病原在病树体内的浓度较低，分布又不均匀，致电镜的检出率偏低。８０年代，应用兔丝子将黄龙病ＢＬＯ转到长春花上增殖、提纯，作为抗原，制备了多抗和单抗的血清，由于多抗血清的效价很低和单抗血清的专化性太狭，均难用于诊断。最近，在病原ＤＮＡ序列测定的基础上，合成了引物Ｐ１及Ｐ２，并在引物Ｐ１及Ｐ２之间合成另一段ＤＮＡ片段Ｐ３作为探针。使ＰＣＲ（多聚酶链式反应）及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术可能用于黄龙病的诊断。研究结果证明ＰＣＲ技术比其他方法具有更大优点，能快速而准确地检测出病原；而Ｑ－ＰＣＲ（竞争性定量多聚酶链式反应）方法则能测定病原在不同样品中的含量，进行定量分析。 展开更多
关键词 柑桔黄龙病 电镜 抗血清 多聚酶链式反应
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防治柑桔木虱是防止柑桔黄龙病蔓延的关键 被引量：20
5
作者 陈又新 朱文灿 《现代园艺》 2008年第9期28-29,共2页
柑桔黄龙病是危害我国广东、广西、福建柑桔产区的主要病害，属国内植物检疫对象。植株一旦受害，树势即逐渐衰退，产量由多到少，由少到无，最后全树死亡，被人们称为柑桔树的“癌症”。曾经被该病摧毁的柑桔树数以百万计。该病在江西... 柑桔黄龙病是危害我国广东、广西、福建柑桔产区的主要病害，属国内植物检疫对象。植株一旦受害，树势即逐渐衰退，产量由多到少，由少到无，最后全树死亡，被人们称为柑桔树的“癌症”。曾经被该病摧毁的柑桔树数以百万计。该病在江西南部，云南部分地区，四川西南部，浙江南部以及湖南南部均有发生。 展开更多
关键词 柑桔黄龙病 柑桔木虱 防治 植物检疫对象 浙江南部 柑桔树 西南部 病害
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国内外柑桔黄龙病研究与防治概况 被引量：19
6
作者 柯冲 《广西柑桔》 1996年第1期6-8,共3页
关键词 柑桔黄龙病 衰退病 单克隆抗体 柑桔树 长春花 电子密度 柑桔木虱 病原性质 人工培养 发病规律
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柑桔黄龙病的可见-近红外光谱特征 被引量：20
7
作者 李修华 李民赞 +2 位作者 Won Suk Lee Reza Ehsani Ashish Ratn Mishra 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1553-1559,共7页
柑桔黄龙病是一种以木虱为载体的细菌病原,目前还没有行之有效的治疗方法,对世界柑桔产业构成了严重的威胁。探索快速检测柑桔黄龙病的方法,对该病的诊断、评估及进一步的控制都具有重要意义。该研究采用了快速、无损的光谱方法对该病... 柑桔黄龙病是一种以木虱为载体的细菌病原,目前还没有行之有效的治疗方法,对世界柑桔产业构成了严重的威胁。探索快速检测柑桔黄龙病的方法,对该病的诊断、评估及进一步的控制都具有重要意义。该研究采用了快速、无损的光谱方法对该病害特征进行初步探索。实验针对健康及染病植株的叶片及冠层,分别在实验室条件及田间环境下测量了其可见-近红外光谱反射率,以分析寻找二者的光谱差异。对原始光谱数据进行了平滑、聚类平均等预处理,并求取了一阶微分以确定其红边位置(red edge position,REP)。为了应对一阶微分在REP处的多个波峰现象,采用了线性外插值法及拉格朗日插值法量化REP。研究结果显示,健康及染病样本的反射率在可见光、近红外具有明显的差异。相比于健康样本,染病样本因其呈现的黄化现象,使其反射率在可见光区较高;又因黄龙病菌会明显阻碍叶片对水分的吸收而使其反射率在近红外较低。REP同样显示了潜在的区分能力,其明显随着染病程度的加深逐渐向红波段移动。在染病程度差异较大的数据集中,REP平均值相差达20nm;而在染病程度差异较小的数据集中,阈值分割法的分类精度也高达90%以上,且线性外插值法的分类精度略高于拉格朗日插值法。本研究成果为利用光谱技术快速无损检测柑桔黄龙病提供了可靠的理论依据。 展开更多
关键词 柑桔黄龙病 光谱反射率 一阶微分 红边位置 插值法
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柑桔黄龙病的田间诊断方法 被引量：18
8
作者 罗志达 叶自行 +1 位作者 许建楷 胡桂兵 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期91-93,共3页
简要分析了目前PCR检测法、嫁接传染法及田间诊断法在柑桔黄龙病诊断上的优劣比较。在田间实践的基础上从初发病树的各种特异性黄梢、中后期病树的特征性病状、病树发病程序等方面提出了柑桔黄龙病田间诊断的依据,以及提高田间诊断准确... 简要分析了目前PCR检测法、嫁接传染法及田间诊断法在柑桔黄龙病诊断上的优劣比较。在田间实践的基础上从初发病树的各种特异性黄梢、中后期病树的特征性病状、病树发病程序等方面提出了柑桔黄龙病田间诊断的依据,以及提高田间诊断准确性的辅助措施。 展开更多
关键词 柑桔黄龙病 特异性黄梢 田间诊断
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不同引物对检测柑桔黄龙病菌灵敏度比较 被引量：18
9
作者 丁芳 王国平 +2 位作者 易干军 洪霓 钟云 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期364-368,共5页
对目前常用的5对引物(fOI1/rOI2c、fOI2/r23S1、fA2/rJ5、fP535/rP535、fP400/rP400)检测柑桔黄龙病菌的灵敏度进行了比较。结果发现,不同引物对的检测灵敏度不同,5对引物检测灵敏度由高到低依次为:fP400/rP400>fP535/rP535>fA2/r... 对目前常用的5对引物(fOI1/rOI2c、fOI2/r23S1、fA2/rJ5、fP535/rP535、fP400/rP400)检测柑桔黄龙病菌的灵敏度进行了比较。结果发现,不同引物对的检测灵敏度不同,5对引物检测灵敏度由高到低依次为:fP400/rP400>fP535/rP535>fA2/rJ5>fOI1/rOI2c>fOI2/r23S1;引物对fP400/rP400比广谱引物对fOI2/r23S1的灵敏度高近千倍。半巢式PCR及巢式PCR的检测灵敏度远高于常规PCR,可检测出接近极限浓度10-7ng/μL,二者没有明显的差别。因此,按照不同目的选择合适的检测引物非常重要,特别是当待测样品中的黄龙病菌浓度极低时,应选择高灵敏度的小片段特异性引物对。 展开更多
关键词 柑桔黄龙病 常规PCR 半巢式PCR 巢式PCR 灵敏度
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柑桔黄龙病研究的回顾与展望 被引量：18
10
作者 刘利华 姚锦爱 +2 位作者 王茂珠 陈玉妹 种藏文 《福建农业学报》 CAS 2006年第4期317-320,共4页
柑桔黄龙病是由一种叫做韧皮部杆菌(Candidatus Liberibacter)的病原引起的,已经确定的病原有亚洲、非洲和美洲3个种。病害通过种苗、嫁接和木虱介体等途径传播。病害可根据田间症状诊断,也可以通过血清学、电镜技术和PCR等分子生物学... 柑桔黄龙病是由一种叫做韧皮部杆菌(Candidatus Liberibacter)的病原引起的,已经确定的病原有亚洲、非洲和美洲3个种。病害通过种苗、嫁接和木虱介体等途径传播。病害可根据田间症状诊断,也可以通过血清学、电镜技术和PCR等分子生物学等技术进行鉴定。目前,柑桔黄龙病主要依靠综合防治的方法。开展病原的人工培养、抗病育种、致病机理和病害防治方法等方面的研究对揭示病原特性和病害防治等都具有十分重要的意义。 展开更多
关键词 柑桔黄龙病 韧皮部杆菌 病原 综合防治
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基于可见与近红外光谱联用的柑桔黄龙病快速无损检测研究 被引量：15
11
作者 刘燕德 肖怀春 +5 位作者 孙旭东 韩如冰 叶灵玉 黄亮 肖禹松 廖小红 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2018年第2期528-534,共7页
黄龙病是柑桔果树的毁灭性病害,对柑桔产业危害巨大。基于模型平均理论,探讨联用可见与近红外光谱技术,提高柑桔黄龙病快速无损检测精度的可行性。采集记录柑桔叶片的可见与近红外光谱,经实时荧光定量PCR鉴别黄龙病叶片为轻度、中度和... 黄龙病是柑桔果树的毁灭性病害,对柑桔产业危害巨大。基于模型平均理论,探讨联用可见与近红外光谱技术,提高柑桔黄龙病快速无损检测精度的可行性。采集记录柑桔叶片的可见与近红外光谱,经实时荧光定量PCR鉴别黄龙病叶片为轻度、中度和重度三类,缺素和正常样品也经PCR鉴定,共五类叶片。基于光谱直接拼接、光谱归一化拼接和模型平均三种不同策略,结合偏最小二乘判别分析(PLS-DA)和多元线性回归(MLR)方法,分别建立了柑桔黄龙病可见与近红外光谱联用无损检测模型。经比较发现,光谱联用模型的检测精度均高于可见或近红外单一检测模型,且经导数处理后的光谱直接拼接PLS-DA模型检测精度最高,模型预测相关系数为0.97,预测均方根误差为0.67,模型总误判率为3%,其原因是导数消除了光谱的基线漂移。光谱归一化拼接的PLS-DA模型检测精度次之,模型总误判率为7%。可见与近红外模型平均的检测精度最低,模型总误判率为7.2%。实验结果表明,联用可见与近红外光谱,结合光谱拼接方法,提高了柑桔黄龙病无损检测模型的检测精度,研究可为其他领域的光谱联用提供参考依据。 展开更多
关键词 柑桔黄龙病 光谱联用 归一化 偏最小二乘判别分析 多元线性回归
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赣南地区柑桔黄龙病发生规律研究 被引量：14
12
作者 陈慈相 张倩 +2 位作者 谢金招 陈辉朗 黄宗俊 《中国南方果树》 北大核心 2015年第6期43-45,共3页
根据2013年和2014年赣南各地柑桔黄龙病普查资料,对赣南柑桔黄龙病发病规律进行了分析。结果表明,赣南地区南北纵向不同区域间柑桔黄龙病的病情差异大,北纬25.330°以南为重发病区,北纬25.330°~25.880°之间为中等发病区,... 根据2013年和2014年赣南各地柑桔黄龙病普查资料,对赣南柑桔黄龙病发病规律进行了分析。结果表明,赣南地区南北纵向不同区域间柑桔黄龙病的病情差异大,北纬25.330°以南为重发病区,北纬25.330°~25.880°之间为中等发病区,北纬25.880°以北为轻发病区;同一纬度,东西横向不同经度区域的病情差异不明显。柑桔黄龙病发生为害程度还与果园规模、树龄和柑桔种类有较密切关系,小规模果园病情重,10年以下低龄树和16年以上老龄树发病较重,温州蜜柑比脐橙敏感,脐橙比沙田柚敏感。 展开更多
关键词 柑桔黄龙病 赣南 发生规律
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以控制木虱为重点的柑桔黄龙病综合防治理论的形成过程、依据和技术要点 被引量：13
13
作者 邓明学 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2009年第23期358-363,共6页
以控制木虱为重点的柑桔黄龙病综合防治理论已在广西柑桔主产区大面积推广应用,并取得了显著防治效果,作为试验示范点之一的桂林良丰农场的黄龙病发生率由2002年的25%下降到2008年的1.8%。为了更好地理解和推广应用该理论,加速该理论在... 以控制木虱为重点的柑桔黄龙病综合防治理论已在广西柑桔主产区大面积推广应用,并取得了显著防治效果,作为试验示范点之一的桂林良丰农场的黄龙病发生率由2002年的25%下降到2008年的1.8%。为了更好地理解和推广应用该理论,加速该理论在华南柑桔黄龙病区的推广应用,报道了该理论的形成过程、事实和理论依据以及技术要点。 展开更多
关键词 柑桔黄龙病 综合防治新理论 形成过程 依据 技术要点
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柑桔木虱耐寒性调查研究 被引量：11
14
作者 白先进 邓崇岭 +9 位作者 陆国保 赵小龙 邓光宙 李国刚 陈传武 吴礽超 唐艳 陈国平 付慧敏 莫健生 《中国南方果树》 北大核心 2008年第6期22-24,共3页
关键词 柑桔木虱 耐寒性 柑桔黄龙病 芸香科植物 传播媒介 冬季气温 发生范围 种群数量
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柑桔黄龙病最新研究进展 被引量：10
15
作者 邓明学 陈贵峰 +1 位作者 唐明丽 陈腾土 《广西园艺》 2006年第3期49-51,共3页
本文综述了柑桔黄龙病的最新分布、病原和传播途径、诊断方法、寄主、其传媒昆虫-柑桔木虱的传病特点、耐寒力、生活史和综合防治技术。
关键词 柑桔黄龙病 木虱 研究进展
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试论柑桔木虱的分布消长及综合防治技术 被引量：8
16
作者 孙桂春 《中国南方果树》 1999年第6期17-18,共2页
关键词 柑桔木虱 柑桔黄龙病 生物学特性 综合防治
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柑桔黄龙病病原——类细菌(Bacterium—like organism,BLO)的培养与性质 被引量：8
17
作者 赵鸿燕 周咏芝 +2 位作者 葛宗民 刘瑜 丁达明 《湖北大学学报（自然科学版）》 CAS 1990年第1期6-9,20,共5页
采用体外培养的方法首次从患柑桔黄龙病的柑桔树叶中分离并培养出柑桔黄龙病的病原——类细菌(BLO),测定了BLO最适培养条件及形状、大小和壁膜厚度.将培养出的BLO回接到指示植物长春花,2个月后长春花表现症状,且能重新培养出该BLO。健... 采用体外培养的方法首次从患柑桔黄龙病的柑桔树叶中分离并培养出柑桔黄龙病的病原——类细菌(BLO),测定了BLO最适培养条件及形状、大小和壁膜厚度.将培养出的BLO回接到指示植物长春花,2个月后长春花表现症状,且能重新培养出该BLO。健康柑桔树叶片及长春花均未培养出BLO。 展开更多
关键词 柑桔黄龙病 类细菌 培养 病原 BLO
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用“红鼻果”诊断黄龙病树好——三谈柑桔黄龙病树田间诊断 被引量：10
18
作者 邱柱石 唐明丽 《广西园艺》 2005年第2期34-35,共2页
关键词 田间诊断 柑桔黄龙病 症状 实际操作 普查 判定 质疑 读者 短文 群众性
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柑桔黄龙病常规PCR检测4对引物的特异性和灵敏度 被引量：9
19
作者 高玉霞 卢占军 +5 位作者 钟八莲 易龙 赖特明 刘志芳 肖珍 夏宜林 《中国南方果树》 北大核心 2014年第1期5-8,共4页
通过荧光定量PCR标定柑桔黄龙病菌核酸浓度的方法,对目前各实验室常规PCR检测中应用较广泛的4对引物(P400f/P400r、P535f/P535r、OI1/OI2和16Sf/16Sr)进行特异性和灵敏度比较。结果表明,4对引物均能排除其他来源核酸的干扰,特异性均强;... 通过荧光定量PCR标定柑桔黄龙病菌核酸浓度的方法,对目前各实验室常规PCR检测中应用较广泛的4对引物(P400f/P400r、P535f/P535r、OI1/OI2和16Sf/16Sr)进行特异性和灵敏度比较。结果表明,4对引物均能排除其他来源核酸的干扰,特异性均强;4对引物灵敏度大小关系为16Sf/16Sr>P400f/P400r>P535f/P535r=OI1/OI2,灵敏度最高的引物16Sf/16Sr可检测的柑桔黄龙病菌核酸浓度低限可达1.87×10-2ng/μL。 展开更多
关键词 柑桔黄龙病 常规PCR检测 引物 灵敏度 特异性
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柚木虱体内韧皮部杆菌亚洲种多基因位点的分子鉴定 被引量：9
20
作者 周汶静 蒲雪莲 +2 位作者 张丽娜 岑伊静 邓晓玲 《中国南方果树》 北大核心 2012年第3期1-5,共5页
利用与柑桔黄龙病相关的韧皮部杆菌("Candidatus Liberibacter sp.",简称Ca.L.sp.)16SrDNA基因、β-操纵子核糖体蛋白基因、外膜蛋白基因以及16S-23SrRNA间隔转录区基因位点的4对特异性引物,对采自云南瑞丽柠檬园的柚木虱(Psy... 利用与柑桔黄龙病相关的韧皮部杆菌("Candidatus Liberibacter sp.",简称Ca.L.sp.)16SrDNA基因、β-操纵子核糖体蛋白基因、外膜蛋白基因以及16S-23SrRNA间隔转录区基因位点的4对特异性引物,对采自云南瑞丽柠檬园的柚木虱(Psylla citrisuga)DNA样品进行PCR扩增,将扩增产物进行纯化、回收,连接至PEASY-T3载体并转化大肠杆菌感受态细胞Trans1-T1,筛选阳性克隆进行测序,利用NCBI Blastn软件以及MEGA5.05软件对所克隆的序列进行同源性分析与聚类分析。结果表明:柚木虱体内韧皮部杆菌亚洲种在这4个基因位点与已报道的Ca.L.asiaticus psy62株系全基因组相应基因位点的同源率均为99%。本研究证实柚木虱能够携带韧皮部杆菌亚洲种,是该菌新的昆虫宿主。 展开更多
关键词 柑桔黄龙病 柚木虱 柠檬 “Candidatus Liberibacter asiaticus”
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