人干扰素IFNα-2b在果蝇细胞中的稳定表达 被引量：3

1

作者 孙浩 梁布锋 《生命科学研究》 CAS CSCD 2007年第2期143-146,共4页

以人干扰素IFNα-2b全长基因的质粒为模板,PCR扩增,PCR产物克隆到表达载体获得重组质粒,经转染和筛选,得到稳定表达的果蝇S2细胞株.经CuSO4诱导表达并对表达产物进行检测,结果显示,在果蝇S2细胞中成功地进行了人干扰素IFNα-2b的蛋白表... 以人干扰素IFNα-2b全长基因的质粒为模板,PCR扩增,PCR产物克隆到表达载体获得重组质粒,经转染和筛选,得到稳定表达的果蝇S2细胞株.经CuSO4诱导表达并对表达产物进行检测,结果显示,在果蝇S2细胞中成功地进行了人干扰素IFNα-2b的蛋白表达,表达产物的大小约为26kD.并且,通过体外的抗病毒活性测定,证明所表达蛋白具有抗病毒活性.该研究为进一步利用该系统表达真核细胞蛋白,研究其结构和功能提供了重要的基础. 展开更多

关键词 人干扰素IFNα-2b 果蝇S2细胞 果蝇表达系统 稳定表达

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运用MTT比色法检测印楝素对果蝇S2细胞的毒力作用 被引量：2

2

作者 徐霖 杨明飞 +1 位作者 冉雪琴 王嘉福 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期72-75,共4页

采用MTT(四甲基偶氮唑蓝,methylthiazolyl-tetrazolium)法测定不同质量浓度印楝素(0.01,0.1,0.5,1.0,2.0 mg.L-1)作用不同时间(24,48,72,96 h)对果蝇S2细胞的抑制率.结果表明,印楝素低质量浓度处理时,对果蝇S2细胞有促进生长的作用,表... 采用MTT(四甲基偶氮唑蓝,methylthiazolyl-tetrazolium)法测定不同质量浓度印楝素(0.01,0.1,0.5,1.0,2.0 mg.L-1)作用不同时间(24,48,72,96 h)对果蝇S2细胞的抑制率.结果表明,印楝素低质量浓度处理时,对果蝇S2细胞有促进生长的作用,表现为低质量浓度促进效应;在质量浓度为0.1～2 mg.L-1处理剂量范围内,表现为明显的时间依赖性,随时间延长,抑制率增加.0.5 mg.L-1处理48 h抑制率达54%,为最佳作用条件. 展开更多

关键词 印楝素 果蝇S2细胞 细胞活性 MTT比色法

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HCV结构蛋白E2在果蝇S2细胞中的稳定表达 被引量：2

3

作者 边奕鑫 何作萍 +2 位作者 杜鹏 王文敬 黎诚耀 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期972-975,共4页

目的获得在果蝇S2(S2)细胞中稳定表达的重组丙型肝炎病毒(HCV)包膜糖蛋白2(rE2)。方法 PCR扩增截短型E2基因,克隆至pCR2.1-T载体,将测序正确的基因亚克隆至表达载体pMT/Bip/V5-HisC,构建重组表达载体pMT-E2。用FuGENE HD转染试剂将pMT-E... 目的获得在果蝇S2(S2)细胞中稳定表达的重组丙型肝炎病毒(HCV)包膜糖蛋白2(rE2)。方法 PCR扩增截短型E2基因,克隆至pCR2.1-T载体,将测序正确的基因亚克隆至表达载体pMT/Bip/V5-HisC,构建重组表达载体pMT-E2。用FuGENE HD转染试剂将pMT-E2转染至S2细胞,并筛选抗性细胞,然后诱导目的蛋白表达;以Western-blotting法鉴定表达产物与HCV感染者血清反应性。结果成功构建截短型HCV E2表达载体pMT-E2,并获得到稳定表达rE2蛋白的S2细胞株,Western-blotting法证明rE2具有良好的免疫学活性。结论在S2细胞成功表达的HCV rE2蛋白可用于HCV感染者血清的鉴定,为HCV诊断性抗原的优化和重组疫苗的研发提供了实验材料。 展开更多

关键词 HCV 包膜糖蛋白E2 果蝇S2细胞 蛋白表达

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SARS-CoVSpike蛋白受体结合区的表达及纯化 被引量：2

4

作者 袁彩 叶晓明 黄明东 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1108-1110,共3页

目的获得稳定表达SARS冠状病毒spike蛋白受体结合区的果蝇细胞系,表达spike蛋白受体结合区。方法设计引物扩增spike蛋白受体结合区318-513片段,构建重组表达载体S318-pMT/Bip/V5-his,与pCoBlast质粒共转染果蝇S2细胞,经Blasticidin筛选... 目的获得稳定表达SARS冠状病毒spike蛋白受体结合区的果蝇细胞系,表达spike蛋白受体结合区。方法设计引物扩增spike蛋白受体结合区318-513片段,构建重组表达载体S318-pMT/Bip/V5-his,与pCoBlast质粒共转染果蝇S2细胞,经Blasticidin筛选得到的稳定重组细胞系,用硫酸铜诱导表达,Western-Blot检测表达产物。富集的表达产物用镍柱和RESOURCES阳离子交换树脂纯化,SDS-PAGE和Western-Blot检测纯化产物。结果重组spike蛋白受体结合区可在果蝇S2细胞中分泌表达,且具有特异免疫反应性;经镍柱和RESOURCES纯化可得到纯度达90%以上的重组蛋白。结论克隆并在真核生物中分泌表达出具免疫反应原性的spike蛋白受体结合区,镍柱和RESOURCES两步纯化可得到高纯度蛋白。 展开更多

关键词 sARsCoV ACE2结合区 果蝇S2细胞 表达 纯化

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果蝇S2细胞中高表达荧光素酶重组质粒的构建及活性测定 被引量：2

5

作者 丁洁 周静 袁榴娣 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2006年第6期403-406,共4页

目的:构建果蝇S2细胞中高表达荧光素酶的重组质粒。方法:用PCR方法扩增得到pac启动子的基因片段,经酶切亚克隆至pGL3-Basic的真核表达载体中,转染果蝇S2细胞,通过测定荧光素酶和β-半乳糖苷酶的活性计算荧光素酶的相对活性。结果:构建... 目的:构建果蝇S2细胞中高表达荧光素酶的重组质粒。方法:用PCR方法扩增得到pac启动子的基因片段,经酶切亚克隆至pGL3-Basic的真核表达载体中,转染果蝇S2细胞,通过测定荧光素酶和β-半乳糖苷酶的活性计算荧光素酶的相对活性。结果:构建的重组质粒在S2细胞中荧光素酶的相对活性较pGL3-Control中增加了2.7万倍。结论:成功构建了果蝇S2细胞中高表达荧光素酶的重组质粒pGL3-pac。 展开更多

关键词 果蝇S2细胞 荧光素酶 启动子 报告基因 转染

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家蚕微孢子虫极管蛋白1(NbPTP1)在果蝇S2细胞中的表达与糖基化修饰 被引量：1

6

作者 龙梦娴 谭瑶瑶 +4 位作者 刘柯柯 吴玉娇 吕青 潘国庆 周泽扬 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1460-1468,共9页

极管蛋白(Polar tube protein)是极管的主要成分,能特异性定位于微孢子虫极管,在微孢子虫侵染宿主过程中发挥重要作用。文中分析了家蚕微孢子虫极管蛋白1中潜在的O-、N-糖基化修饰位点,克隆了家蚕微孢子虫极管蛋白1全基因序列,并将其插... 极管蛋白(Polar tube protein)是极管的主要成分,能特异性定位于微孢子虫极管,在微孢子虫侵染宿主过程中发挥重要作用。文中分析了家蚕微孢子虫极管蛋白1中潜在的O-、N-糖基化修饰位点,克隆了家蚕微孢子虫极管蛋白1全基因序列,并将其插入带有V5和His标签的真核表达载体pMT/Bip/V5-His A中,成功构建了pMT/Bip/V5-His A-NbPTP1重组质粒,经转染果蝇S2细胞后,发现NbPTP1基因能在果蝇细胞中高效表达。此外,Lectin blotting和β-消除反应分析结果表明:果蝇S2细胞内表达的NbPTP1具有O-糖基化修饰特征。以上结果为研究NbPTP1的糖基化修饰特征与其功能之间的关系提供了基础,有助于揭示微孢子虫侵染机制,建立可行有效的微孢子虫病诊断和防治措施。 展开更多

关键词 极管蛋白1 果蝇S2细胞 糖基化 家蚕微孢子虫

原文传递

英诺克李斯特菌侵染果蝇S2细胞后的转录组分析 被引量：1

7

作者 吴坤钟 李荣松 +2 位作者 曹阳 黄志君 田铃 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期17-26,共10页

【目的】英诺克李斯特菌Listeria innocua为李斯特菌属Listeria的一种非致病菌,与致病菌单增李斯特菌L.monocytogenes具有共同的毒力祖先,本文旨在研究英诺克李斯特菌侵染后宿主基因表达的变化情况,为宿主调控、防御单增李斯特菌的危害... 【目的】英诺克李斯特菌Listeria innocua为李斯特菌属Listeria的一种非致病菌,与致病菌单增李斯特菌L.monocytogenes具有共同的毒力祖先,本文旨在研究英诺克李斯特菌侵染后宿主基因表达的变化情况,为宿主调控、防御单增李斯特菌的危害提供参考。【方法】用英诺克李斯特菌侵染果蝇S2细胞,利用转录组测序检测该细菌侵染后果蝇S2细胞的基因表达变化,采用qPCR验证英诺克李斯特菌侵染后果蝇S2细胞中差异表达的基因。【结果】英诺克李斯特侵染3 h后,宿主果蝇S2细胞中Toll/Imd信号通路发生显著上调,吞噬体和霍乱弧菌Vibrio cholerae感染信号通路显著下调;抗菌肽基因DmDef(DmDefensin)、DmDro(DmDrosomycin)、DmDpt A(DmDptericin A)、DmDpt B(DmDptericinB)、 DmMtk(DmMetchnikowin)、 DmCec A2(DmCecropinA2)、 DmAtt A(DmAttacinA)、 DmAtt B(DmAttacin B)、DmAtt D(DmAttacin D)、DmCec B(DmCecropin B)均被显著地诱导表达,其中,上调幅度最大的基因是DmDef,上调了9.805倍。qPCR验证结果显示,DmMtk、DmAtt A、DmDro和DmDef基因表达分别上调了8.180、7.533、7.204和4.569倍。【结论】英诺克李斯特菌侵染果蝇S2细胞后,变化最显著的基因类群为抗菌肽。本研究全面调查了英诺克李斯特菌侵染后宿主基因表达的变化情况,为揭示非致病菌侵染后宿主细胞的反应、细菌与宿主的互作规律提供了参考。 展开更多

关键词 英诺克李斯特菌 果蝇S2细胞 转录组测序 免疫 抗菌肽 信号通路

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Cr(Ⅵ)对果蝇S2细胞凋亡影响及机制的初步研究

8

作者 朱伟 邵敏 +1 位作者 廖业 夏嫱 《环境与健康杂志》 CAS 北大核心 2015年第7期583-586,F0003,共5页

目的研究Cr（Ⅵ）对果蝇S2细胞凋亡的影响,初步探讨其可能的凋亡机制。方法将果蝇S2细胞分别暴露于含Cr（Ⅵ）终浓度为0（对照）、50、100、200、400、800μmol/L的新鲜培养基培养12 h。检测果蝇S2细胞的凋亡情况和凋亡相关基因Debcl、B... 目的研究Cr（Ⅵ）对果蝇S2细胞凋亡的影响,初步探讨其可能的凋亡机制。方法将果蝇S2细胞分别暴露于含Cr（Ⅵ）终浓度为0（对照）、50、100、200、400、800μmol/L的新鲜培养基培养12 h。检测果蝇S2细胞的凋亡情况和凋亡相关基因Debcl、Buffy、Drice、P53 mRNA的表达水平及Drice的相对活化程度。结果 Cr（Ⅵ）处理浓度为400μmol/L时可观察到S2细胞染色质浓染、出现凋亡小体,当Cr（Ⅵ）浓度达到800μmol/L时,可明显观察到细胞崩解及坏死;与对照组比较,各剂量Cr（Ⅵ）染毒组果蝇S2细胞的早期凋亡率均较高,差异有统计学意义（P〈0.05）。当Cr（Ⅵ）浓度为50~400μmol/L时,果蝇S2细胞的早期凋亡率随着Cr（Ⅵ）浓度的上升而升高;当Cr（Ⅵ）浓度达到800μmol/L时,果蝇S2细胞的早期凋亡率下降。与对照组比较,400μmol/L Cr（Ⅵ）染毒组果蝇S2细胞Debcl、Drice mRNA的表达水平均较低,P53 mRNA的表达水平均较高,差异有统计学意义（P〈0.05）;而Buffy mRNA的表达水平无明显改变,Drice相对活化程度降低（P〈0.01）。结论天冬氨酸蛋白水解酶（Caspases）并未参与高浓度下Cr（Ⅵ）诱导果蝇S2细胞的凋亡过程,其凋亡机制可能与P53基因相关。 展开更多

关键词 六价铬 果蝇S2细胞 细胞凋亡 凋亡相关基因

原文传递

剪接体蛋白SmD3在果蝇S2细胞中对U2A的影响

9

作者 栾晓瑾 颜一丹 +7 位作者 陈霞 谢冰 郑倩雯 王敏 陈万银 乔晨 于骏 方杰 《医学研究杂志》 2019年第12期44-49,共6页

目的探讨小核糖核蛋白颗粒蛋白SmD3(small ribonucleoprotein particle protein SmD3,SmD3)表达改变对果蝇Schneider 2(S2)细胞中剪接体成分U2A的影响。方法通过转染构建敲减SmD3基因的S2细胞及其对照模型,并进行干涉效率验证。构建pUAS... 目的探讨小核糖核蛋白颗粒蛋白SmD3(small ribonucleoprotein particle protein SmD3,SmD3)表达改变对果蝇Schneider 2(S2)细胞中剪接体成分U2A的影响。方法通过转染构建敲减SmD3基因的S2细胞及其对照模型,并进行干涉效率验证。构建pUAS-attB-SmD3克隆,通过转染实现SmD3基因在S2细胞中的过表达。采用免疫荧光染色检测各组细胞模型中U2A蛋白的表达水平。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞模型中U2A mRNA的表达水平。结果选择干涉效率最优的SmD3 siRNA-1进行实验,与对照组比较,SmD3基因敲减组U2A蛋白及mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。成功构建pUAS-attB-SmD3克隆并在S2细胞中过表达,与对照组比较,SmD3基因过表达组U2A蛋白及mRNA表达水平降低,差异均有统计学意义(P均=0.000)。结论SmD3基因编码的剪接体核心蛋白与U2A可能在果蝇S2细胞中发挥相互拮抗的作用。 展开更多

关键词 小核糖核蛋白颗粒蛋白SmD3(SmD3) U2A 剪接体 果蝇S2细胞

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IBDV VP2蛋白在果蝇S2细胞中的表达与抗原性分析

10

作者 柳舒航 韦莉 +6 位作者 王菁 朱姗姗 张春燕 阎旭 全荣 李子璇 刘爵 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第2期10-13,共4页

利用果蝇S2细胞表达鸡传染性囊病病毒(IBDV)超强毒株VP2蛋白,并检测其抗原活性。通过扩增IBDV VP2蛋白的编码基因,与果蝇S2细胞表达载体pMT/BiP/V5/HisA连接构建重组表达载体pMT/BiP/V5/HisA-VP2,将重组表达载体与筛选质粒pCoBlast共转... 利用果蝇S2细胞表达鸡传染性囊病病毒(IBDV)超强毒株VP2蛋白,并检测其抗原活性。通过扩增IBDV VP2蛋白的编码基因,与果蝇S2细胞表达载体pMT/BiP/V5/HisA连接构建重组表达载体pMT/BiP/V5/HisA-VP2,将重组表达载体与筛选质粒pCoBlast共转染果蝇S2细胞,表达VP2融合蛋白后纯化目的蛋白,并对表达产物进行抗原性分析。Western-blotting分析表明,融合蛋白相对分子质量为49 kDa,该融合蛋白具有与VP2单抗良好的结合能力。结论 IBDV VP2融合蛋白能在果蝇S2细胞中进行有效地表达,并且能分泌到上清中,融合蛋白具有良好的抗原性,可作为诊断抗原用于该病的诊断检测。 展开更多

关键词 鸡传染性法氏囊病毒 VP2基因 果蝇S2细胞 融合表达

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猪圆环病毒2型结构蛋白Cap在果蝇S2细胞中稳定表达与鉴定的研究

11

作者 马凯凯 张琦 +4 位作者 胡高维 常兴妮 杨建设 丁艳平 李志勇 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第11期164-167,共4页

为了表达猪圆环病毒2型(PCV-2)结构蛋白Cap并检测其表达情况,试验采用果蝇S2细胞真核表达的方法,通过扩增PCV-2 Cap蛋白的编码基因,与昆虫细胞表达载体pMT/Bip/V5-HisA连接构建重组表达载体pMT/Bip/V5-HisA-Cap,用重组表达载体与筛选质... 为了表达猪圆环病毒2型(PCV-2)结构蛋白Cap并检测其表达情况,试验采用果蝇S2细胞真核表达的方法,通过扩增PCV-2 Cap蛋白的编码基因,与昆虫细胞表达载体pMT/Bip/V5-HisA连接构建重组表达载体pMT/Bip/V5-HisA-Cap,用重组表达载体与筛选质粒pCoHygro共转染S2细胞,再使用选择性培养基加压筛选出稳定的细胞株,表达Cap融合蛋白后,利用SDS-PAGE及Western-bolt研究表达产物的抗原性。结果表明:融合蛋白的分子质量约为31 ku,该蛋白能够与带有V5标签的抗体结合,说明PCV-2 Cap蛋白能在S2细胞中正确表达,并具有良好的抗原性。 展开更多

关键词 真核表达系统 果蝇s2细胞 PCV-2 Cap基因 融合表达 亚基因工程疫苗

原文传递

人SNRPN基因在果蝇S2细胞中的功能研究

12

作者 于骏 武云浩 +3 位作者 何辉 李志然 付杨博 陈霞 《交通医学》 2021年第5期437-440,F0002,共5页

目的:构建人SNRPN(hSNRPN)基因过表达质粒,观察在果蝇S2细胞中的作用,为男性不育症的功能保守性研究提供重要工具。方法:构建pUAS-HA-hSNRPN质粒,利用Ub-GAL4质粒在果蝇S2细胞中驱动pUAS-HA-hSNRPN的表达。采用Western blot和免疫荧光... 目的:构建人SNRPN(hSNRPN)基因过表达质粒,观察在果蝇S2细胞中的作用,为男性不育症的功能保守性研究提供重要工具。方法:构建pUAS-HA-hSNRPN质粒,利用Ub-GAL4质粒在果蝇S2细胞中驱动pUAS-HA-hSNRPN的表达。采用Western blot和免疫荧光染色观察HA-hSNRPN融合蛋白的表达情况。通过免疫荧光染色和qRT-PCR检测hSNRPN基因对果蝇RNA剪接体亚基表达水平的影响。结果:本实验成功构建了pUAS-HA-hSNRPN过表达质粒,并利用Ub-GAL4在果蝇S2细胞中驱动HA-hSNRPN融合蛋白的表达。Western blot检测和免疫荧光染色结果均显示HA-hSNRPN融合蛋白在果蝇S2细胞中成功表达。免疫荧光染色结果显示,在果蝇S2细胞中异位表达hSNRPN基因可下调U2A蛋白。qRT-PCR结果提示,异位表达hSNRPN基因可下调果蝇RNA剪接体关键因子的表达水平。结论:本研究成功实现了HA-hSNRPN融合蛋白在果蝇S2细胞中的表达,hSNRPN可竞争性抑制果蝇RNA剪接体亚基的表达水平。 展开更多

关键词 SNRPN 果蝇S2细胞 U2A 剪接体 UAS-Gal4

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基于S2细胞建立钙库调控钙离子通道特异分子的筛选模型

13

作者 陈温纯 倪兵 +3 位作者 施建婷 孙中伟 张慎元 梅兵 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期348-353,共6页

应用FlexStation胞质溶胶钙离子检测技术,研究利用果蝇S2细胞建立钙库调控钙离子通道SOC的特异分子的筛选模型.通过三种已知钙通道拮抗剂的检测,发现培养温度为24℃,细胞密度为2×106个/mL时,利用终浓度为2μmol/L的SOC通道激动剂T... 应用FlexStation胞质溶胶钙离子检测技术,研究利用果蝇S2细胞建立钙库调控钙离子通道SOC的特异分子的筛选模型.通过三种已知钙通道拮抗剂的检测,发现培养温度为24℃,细胞密度为2×106个/mL时,利用终浓度为2μmol/L的SOC通道激动剂TG可建立稳定的细胞筛选模型. 展开更多

关键词 果蝇S2细胞 SOC通道 FlexStation钙检测技术 筛选模型

原文传递

dRASSF在果蝇细胞中负调控Dmp53的蛋白水平

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作者 陈颜 李超杰 +2 位作者 王萍 林晓惠 吴世安 《南开大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期36-41,共6页

从果蝇细胞cDNA文库克隆得到基因Dmp53,将该基因插入到pAc-HisB载体中,得到的重组DNA成功在果蝇S2细胞中表达.通过免疫荧光对dRASSF和Dmp53亚细胞定位进行了分析,确定了两者均是典型细胞核定位且共转染时存在共定位现象.免疫共沉淀和wes... 从果蝇细胞cDNA文库克隆得到基因Dmp53,将该基因插入到pAc-HisB载体中,得到的重组DNA成功在果蝇S2细胞中表达.通过免疫荧光对dRASSF和Dmp53亚细胞定位进行了分析,确定了两者均是典型细胞核定位且共转染时存在共定位现象.免疫共沉淀和western blotting分析未检测到dRASSF和Dmp53之间存在相互结合作用,但是dRASSF过表达可以有效地降低Dmp53的蛋白量.为深入阐释dRASSF和Dmp53间的相互关系提供有益的线索. 展开更多

关键词 dRASSF Dmp53 果蝇S2细胞

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灭多威对果蝇胚胎S2和人肝癌HepG2细胞的遗传毒性研究 被引量：2

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作者 李荻秋 吴鸿杰 +2 位作者 项光刚 徐白雪 陶黎明 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期517-522,共6页

灭多威对环境中非靶标生物的毒性作用广受关注。选用果蝇胚胎S2细胞和人肝癌HepG2细胞为研究对象,采用噻唑蓝(MTT)细胞活力测定、单细胞彗星电泳和磷酸化组蛋白(γH2AX)免疫荧光印迹等方法研究了灭多威的细胞毒性。结果表明:随着灭多威... 灭多威对环境中非靶标生物的毒性作用广受关注。选用果蝇胚胎S2细胞和人肝癌HepG2细胞为研究对象,采用噻唑蓝(MTT)细胞活力测定、单细胞彗星电泳和磷酸化组蛋白(γH2AX)免疫荧光印迹等方法研究了灭多威的细胞毒性。结果表明:随着灭多威浓度的升高,S2和HepG2细胞活力均呈逐渐下降趋势;两种细胞均出现显著的彗星现象,且彗星尾长增加,尾部面积增大;γH2AX阳性细胞百分率逐渐增大。表明果蝇S2和人HepG2细胞DNA受损程度随着灭多威剂量的增大而加重,灭多威可诱导细胞DNA双链断裂,最终导致细胞凋亡。灭多威具有潜在的基因毒性,长时间接触会损害人类健康。 展开更多

关键词 灭多威 果蝇胚胎S2细胞 人肝癌HEPG2细胞 细胞活力 DNA损伤

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CG5844基因沉默、过表达果蝇S2胚胎细胞中的剪接体组分表达观察

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作者 颜一丹 栾晓瑾 +7 位作者 陈霞 谢冰 郑倩雯 王敏 陈万银 乔晨 于骏 方杰 《山东医药》 CAS 2019年第18期1-5,共5页

目的 观察沉默、过表达CG5844基因的果蝇S2胚胎细胞中的剪接体组分(U2A)表达变化。方法 ①沉默CG5844基因表达的果蝇S2胚胎细胞CG5844基因及U2A表达观察 取S2细胞分为观察A、对照A组,分别转染siCG5844-1(CG5844 siRNA,可沉默CG5844基因... 目的 观察沉默、过表达CG5844基因的果蝇S2胚胎细胞中的剪接体组分(U2A)表达变化。方法 ①沉默CG5844基因表达的果蝇S2胚胎细胞CG5844基因及U2A表达观察 取S2细胞分为观察A、对照A组,分别转染siCG5844-1(CG5844 siRNA,可沉默CG5844基因表达)、空白质粒。转染48 h时采用qRT-PCR法检测细胞CG5844基因,免疫荧光法检测细胞U2A。②CG5844过表达的果蝇S2胚胎细胞CG5844基因及U2A表达观察 取S2细胞分为观察B、对照B组,分别转染pUAS-attB-CG5844(可过表达CG5844基因)、载体pUAS-attB。转染48 h时采用qRT-PCR法检测 细胞CG5844基因,免疫荧光法检测细胞U2A。结果 观察A、对照A组CG5844基因相对表达量分别为0.29±0.04、1.00± 0,二者比较, P <0.05;观察A、对照A组U2A相对表达量分别为11.34± 0.58 、1.65±0.23,二者比较, P <0.05。观察B、对照B组CG5844基因相对表达量分别为18.87±2.44、1±0,二者比较, P <0.05;观察B、对照B组U2A相对表达量分别为1.30±0.07、2.17±0.06 ,二者比较, P <0.05。结论 沉默CG5844基因的S2细胞中的U2A表达升高,过表达CG5844基因的S2细胞U2A的表达降低。CG5844可能通过调控U2A的表达,影响剪接体的功能,从而调控果蝇生殖干细胞的发生。 展开更多

关键词 CG5844基因 剪接体组分 剪接体 果蝇S2胚胎细胞 生殖干细胞微环境 生殖干细胞

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利用果蝇细胞研究基因表达转录后调控的双报告基因系统的建立

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作者 张婷 肖强海 +2 位作者 韦有恒 刘勇 马维骏 《现代检验医学杂志》 CAS 2010年第4期22-24,27,共4页

目的 构建能够在果蝇S2＊细胞中检测转录后调控元件对基因表达调控影响的双报告基因系统.方法 首先利用pAc5.1/V5-His c,pGL3-basic和pRL-SV40载体,构建能在果蝇体系中表达萤火虫荧光素酶的报告基因质粒pAc-Fluc,以及用作内参照表达海... 目的 构建能够在果蝇S2＊细胞中检测转录后调控元件对基因表达调控影响的双报告基因系统.方法 首先利用pAc5.1/V5-His c,pGL3-basic和pRL-SV40载体,构建能在果蝇体系中表达萤火虫荧光素酶的报告基因质粒pAc-Fluc,以及用作内参照表达海洋腔肠荧光素酶的质粒pAc-Rluc.将TNF-α基因mRNA的3＇UTR连接至pAc-Fluc的Luc编码区下游构建pAc-Fluc-TNF-α质粒,并与pAc-Rluc共转至果蝇S2＊细胞,检测两种荧光素酶的相对活性.结果 成功构建了能够在果蝇S2＊细胞中组成型表达的双报告基因系统;在TNF-α mRNA 3＇UTR控制下表达的荧光素酶活性比对照有显著下降.结论 可以利用该双报告基因系统在果蝇细胞中研究转录后调控元件对基因的表达调控. 展开更多

关键词 转录后调控元件 双报告基因 荧光素酶 果蝇S2＊细胞

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猪流行性腹泻病毒S1蛋白的免疫原性评估

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作者 陈维聪 刘运超 +4 位作者 周川杰 杨苏珍 魏蔷 柴书军 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2022年第11期127-134,共8页

为了评估猪流行性腹泻病毒(PEDV)S1蛋白的免疫原性,利用果蝇胚胎S2细胞表达重组S1蛋白,将纯化的S1蛋白免疫4周龄昆明小鼠,收集免疫血清及脾淋巴细胞,通过ELISA、病毒中和试验和流式细胞术等方法分析表达的重组S1蛋白的免疫原性。结果显... 为了评估猪流行性腹泻病毒(PEDV)S1蛋白的免疫原性,利用果蝇胚胎S2细胞表达重组S1蛋白,将纯化的S1蛋白免疫4周龄昆明小鼠,收集免疫血清及脾淋巴细胞,通过ELISA、病毒中和试验和流式细胞术等方法分析表达的重组S1蛋白的免疫原性。结果显示,与对照组(PBS)相比,重组PEDV S1蛋白免疫组小鼠血清中特异性IgG抗体水平显著提升;二免后14 d,果蝇细胞重组PEDV S1蛋白免疫组小鼠的中和抗体效价达到1∶320;免疫后小鼠脾脏淋巴细胞具有更强的增殖能力;外周血CD3^(+)T细胞百分比显著增加,CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比值高于对照组;小鼠血清中IL-4、IFN-γ水平显著上升。综上,成功表达了重组PEDV S1蛋白,其可以诱导小鼠产生高效价的中和抗体,促进细胞免疫应答。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 S1蛋白 果蝇胚胎S2细胞 免疫原性 中和性抗体

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