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油酸调节人血管平滑肌细胞TLR4的增殖活性及炎性因子的表达 被引量：6
1
作者 杨海静 陈卫 +3 位作者 权金星 李伟华 刘静 邱明才 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2013年第1期44-48,共5页
目的探讨油酸对人主动脉血管平滑肌细胞TLR4及炎性因子表达的调节作用。方法 MTT法检测细胞增殖活性;实时荧光定量PCR法检测TLR4及炎性因子mRNA的表达;Western blot法检测细胞TLR4蛋白表达,ELISA法检测炎性因子蛋白含量。结果油酸促进... 目的探讨油酸对人主动脉血管平滑肌细胞TLR4及炎性因子表达的调节作用。方法 MTT法检测细胞增殖活性;实时荧光定量PCR法检测TLR4及炎性因子mRNA的表达;Western blot法检测细胞TLR4蛋白表达,ELISA法检测炎性因子蛋白含量。结果油酸促进人主动脉血管平滑肌细胞增殖活性,增加油酸浓度,抑制细胞增殖。油酸上调TLR4、IL-6、IL-8和MCP-1 mRNA表达最大幅度为6.5、7.4、7.4和7.1倍。IL-6、IL-8和MCP-1蛋白表达最大上调幅度为2.16、1.93和2.06倍。200μmol/L组TLR4蛋白表达的吸光度值为(1.70±0.62),与对照组(0.29±0.22)比较P<0.05。LPS组TLR4、IL-6、IL-8和MCP-1的表达明显增加(P<0.05)。结论油酸促进人主动脉血管平滑肌细胞TLR4及炎性因子mRNA及蛋白表达。 展开更多
关键词 人主动脉血管平滑肌细胞 油酸 果蝇样受体4 细胞因子 基因表达
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果蝇样受体4介导游离脂肪酸调节人血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1的表达 被引量：4
2
作者 高啸波 权金星 +4 位作者 杨海静 陈卫 李伟华 李永红 刘静 《中华糖尿病杂志》 CAS CSCD 2013年第2期108-113,共6页
目的探讨软脂酸对人主动脉血管平滑肌细胞（HA—VSMC）单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）基因表达的调节及果蝇样受体4（TLR4）信号通路的作用。方法采用不同剂量的软脂酸（100、200、400μmol/L）处理HA—VSMC6、12、24h，采用实时荧光定量... 目的探讨软脂酸对人主动脉血管平滑肌细胞（HA—VSMC）单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）基因表达的调节及果蝇样受体4（TLR4）信号通路的作用。方法采用不同剂量的软脂酸（100、200、400μmol/L）处理HA—VSMC6、12、24h，采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测细胞MCP．1mRNA表达，酶联免疫吸附实验（ELISA）检测MCP-1蛋白表达，观察软脂酸调节MCP-1表达的剂量依赖关系和时间效应；采用蛋白激酶C（PKC）抑制剂白屈菜红碱、磷脂酰肌醇3激酶（P13K）抑制剂wortmannin、神经酰胺抑制剂myriocin和核因子KB（NF—KB）抑制剂parthenolide分别处理细胞30min，再加入软脂酸（400μmol/L）处理细胞6h后，实时荧光定量PCR检测MCP-1mRNA的表达水平，ELISA检测MCP-1的蛋白表达水平，研究软脂酸调节MCP-1表达依赖的信号通路；构建TLR4短发夹RNA（shRNA）腺病毒pGSadeno-TLR4并感染HA—VSMC沉默TLR4基因表达，实验同时设空白对照组（PBS缓冲液）和对照病毒（pGSadeno-GFP）组。细胞感染96h后更换培养基，再加入软脂酸（400μmoL／L）处理细胞6h，采用实时荧光定量PCR检测MCP-1mRNA表达水平，ELISA检测MCP-1的蛋白表达水平。提取细胞核蛋白，采用ELISA检测NF—KBp65亚基活性，观察TLR4／NF-KB通路在软脂酸调节HA-VSMCMCP-1基因表达中的作用。组间均数比较采用单因素方差分析。结果采用软脂酸处理细胞6h后，对照组及100、200和400μmoVL软脂酸组MCP-1mRNA表达分别为1．00±0．02、3．30±2．84、8．21±4．31和11．25±2．73（F=7．57，P〈0．05）；MCP-1蛋白表达分别为（127±10）、（147±10）、（163±18）和（194±14）ng／L（F=7．81，P〈0．05）。软脂酸可促进HA-VSMCMCP-1mRNA和蛋白表达且具有明显的剂量依赖关系。细胞培养12h和24h后，随着软脂酸浓度的增加，MCP-1mRNA和蛋白表达水平呈逐渐增加趋势，但时间效应则不明显。采用不同� 展开更多
关键词 人主动脉血管平滑肌细胞 软脂酸 果蝇样受体4 单核细胞趋化蛋白-1
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果蝇样受体4介导游离脂肪酸诱导2型糖尿病大血管病变的研究 被引量：2
3
作者 师维雅 何启娟 +6 位作者 左玉琼 高翠霞 李永红 魏莲花 许衍甲 权金星 刘静 《中国现代医药杂志》 2014年第10期1-4,共4页
目的：通过检测2型糖尿病（T2DM）患者外周血果蝇样受体4（TLR4）的表达和血清游离脂肪酸（FFA）水平，探讨TLR4信号在FFA诱导T2DM大血管病变中的作用。方法选取甘肃省人民医院内分泌科2014年3--6月的T2DM住院患者66例，根据颈动脉内膜... 目的：通过检测2型糖尿病（T2DM）患者外周血果蝇样受体4（TLR4）的表达和血清游离脂肪酸（FFA）水平，探讨TLR4信号在FFA诱导T2DM大血管病变中的作用。方法选取甘肃省人民医院内分泌科2014年3--6月的T2DM住院患者66例，根据颈动脉内膜中层厚度（IMT）不同分为T2DM无大血管病变组（IMT〈0.9mm）32例及T2DM合并大血管病变组（IMT≥0.9mm）34例。性别、年龄匹配的健康志愿者40例作为对照组。空腹静脉采血检测空腹血糖（FBG）、血脂、胰岛素和糖化血红蛋白等生化指标，比色法测定血清游离脂肪酸（FFA）水平，流式细胞术检测外周血单个核细胞（PBMCs）TLR4表达水平。结果 T2DM合并大血管病变组TLR4表达水平（19.8±3.9）显著高于T2DM无大血管病变组（15.0±3.9）和健康对照组（12.8±2.6）（均P〈0.05）；T2DM合并大血管病变组血清FFA水平（0.520±0.164）mmol/L较正常对照组（0.349±0.212） mmol/L显著增高（均P〈0.05）。 Pearson相关分析提示TLR4与IMT（r=0.545，P〈0.001）、FFA（r=0.266，P〈0.05）与FBG（r=0.445， P〈0.05）均呈正相关，IMT也与FFA（r=0.295，P〈0.05）和FBG（r=0.490，P〈0.05）呈正相关。多元线性回归分析显示：TLR4、FBG、年龄是影响IMT的独立相关因素。结论 TLR4炎症信号通路参与了游离脂肪酸诱导的T2DM大血管病变。 展开更多
关键词 果蝇样受体4 颈动脉内膜中层厚度 2型糖尿病 游离脂肪酸
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高糖对人脐静脉内皮细胞TLR4表达的影响
4
作者 邓慧慧 汪大望 《江西医药》 CAS 2010年第5期406-409,共4页
目的观察高糖对人脐静脉内皮细胞TLR4表达的影响,比较加用脂多糖后不同浓度的高糖培养下对人脐静脉内皮细胞TLR4表达水平变化。方法将体外培养人脐静脉内皮细胞株分对照组(5mmol/LGS)、高糖组(10mmol/LGS、20mmol/LGS、40mmol/LGS)、高... 目的观察高糖对人脐静脉内皮细胞TLR4表达的影响,比较加用脂多糖后不同浓度的高糖培养下对人脐静脉内皮细胞TLR4表达水平变化。方法将体外培养人脐静脉内皮细胞株分对照组(5mmol/LGS)、高糖组(10mmol/LGS、20mmol/LGS、40mmol/LGS)、高糖+LPS组(10mmol/LGS、20mmol/LGS、40mmol/LGS/+100ng/LLPS),培养24h后,用ELISA法检测各组上清IL-6水平,实时定量PCR检测各组细胞TLR4及MyD88基因表达水平。结果 (1)高糖培养能促使人脐静脉内皮细胞产生IL-6水平增加,具有统计学意义(P<0.05),在LPS诱导下高糖能进一步促进该细胞产生IL-6,具有统计学意义(P<0.05)。(2)随着葡萄糖浓度增高,从5mmol/L到20mmol/L,人脐静脉内皮细胞产生的IL-6逐渐增多,具有统计学意义(P<0.05),但再增高糖浓度(到40mmol/L),该细胞产生IL-6水平不再继续增加(P>0.05)。(3)在LPS存在的前提下,高糖能诱导人脐静脉内皮细胞TLR4和MyD88基因表达增加,具有统计学意义(P<0.05),但仅高糖培养对该细胞TLR4和MyD88基因表达无影响(P>0.05)。结论高糖能刺激人脐静脉内皮细胞炎症反应,使炎症因子IL-6产生增多,但对TLR4和MyD88表达无明显增高;而高糖联合LPS培养能诱导人脐静脉内皮细胞TLR4和MyD88表达上调,说明高糖在LPS存在前提下可能激发TLR4信号通路。 展开更多
关键词 果蝇样受体4 髓样分化因子88 高糖 人脐静脉内皮细胞 白介素6 脂多糖 实时聚合酶链反应
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1,25(OH)_2D_3对人血管平滑肌细胞TLR4基因及炎症因子表达的抑制作用
5
作者 杨海静 陈卫 +1 位作者 高啸波 权金星 《中国现代医药杂志》 2012年第3期4-6,共3页
目的探讨1,25（OH）2D3（1,25-dihydroxyvitamin D3）对人主动脉血管平滑肌细胞（human aortic vascular smooth muscle cell,HA-VSMC）果蝇样受体（Toll like receptor 4,TLR4）基因及其下游炎症因子IL-6、IL-8和MCP-1表达的调节作用... 目的探讨1,25（OH）2D3（1,25-dihydroxyvitamin D3）对人主动脉血管平滑肌细胞（human aortic vascular smooth muscle cell,HA-VSMC）果蝇样受体（Toll like receptor 4,TLR4）基因及其下游炎症因子IL-6、IL-8和MCP-1表达的调节作用。方法不同浓度1,25（OH）2D3干预HA-VSMC后,采用实时荧光定量PCR法检测细胞TLR4、IL-6、IL-8、MCP-1mR-NA的表达水平。结果 1,25（OH）2D3在浓度为1-20nmol/L之间抑制TLR4、IL-6、IL-8、MCP-1mRNA水平的表达且具有明显的剂量依赖关系。在浓度为1nmol/L时1,25（OH）2D3下调TLR4和MCP-1mRNA表达的作用最明显,浓度为10nmol/L时,1,25（OH）2D3下调IL-6mRNA表达的作用最明显,浓度为20nmol/L时,1,25（OH）2D3下调IL-8mRNA表达的作用最明显。TLR4、IL-6、IL-8和MCP-1mRNA表达的最大下调幅度分别为对照组的3.08、2.39、3.19、2.23倍（均P〈0.05）。结论 1,25（OH）2D3通过下调TLR-4信号抑制了人主动脉血管平滑肌细胞的炎症反应。 展开更多
关键词 人主动脉血管平滑肌细胞 1 25(OH)2D3 果蝇样受体4 细胞因子 基因表达
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