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香蕉束顶病毒PCR检测技术研究 被引量:21
1
作者 肖火根 胡晋生 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期5-8,共4页
建立了聚合酶链式反应(PCR)扩增技术检测香蕉组织和单头蚜虫内的香蕉束顶病毒(BBTV),并报道了BBTV免疫捕捉PCR(IC-PCR)和直接结合PCR(DB-PCR)检测方法IC-PCR和DB-PCR分别能从4μ... 建立了聚合酶链式反应(PCR)扩增技术检测香蕉组织和单头蚜虫内的香蕉束顶病毒(BBTV),并报道了BBTV免疫捕捉PCR(IC-PCR)和直接结合PCR(DB-PCR)检测方法IC-PCR和DB-PCR分别能从4μg和0. 展开更多
关键词 香蕉 病毒 免疫捕捉PCR 直接结合PCR
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香蕉束顶病毒株系的研究 被引量:5
2
作者 周仲驹 林奇英 +1 位作者 谢联辉 徐平东 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第1期63-68,共6页
采自福建各地蕉区的不同香蕉束顶病毒株类型之间致病性和介体蚜虫的传病率有明显的差异,进一步依其在香蕉品种台湾蕉和Wiliams上的反应、香蕉交脉蚜的传病率、毒株类型之间的交互保护和血清学测定结果等,把香蕉束顶病毒区分为... 采自福建各地蕉区的不同香蕉束顶病毒株类型之间致病性和介体蚜虫的传病率有明显的差异,进一步依其在香蕉品种台湾蕉和Wiliams上的反应、香蕉交脉蚜的传病率、毒株类型之间的交互保护和血清学测定结果等,把香蕉束顶病毒区分为BBTV-S(重型)和BBTV-M(轻型)两个株系。BBTV-M和BBTV-S均能引致香蕉叶片上的青筋症状,两者在血清学上有密切关系,但BBTV-M仅引致植株产生少量青筋,而BBTV-S除引致香蕉植株上有大量青筋之外,还引致严重矮化、束顶以及轻度黄化,BBTV-M的潜育期较BBTV-S明显长,香蕉交脉蚜对BBTV-S的传病率大大高于对BBTV-M的传病率。 展开更多
关键词 香蕉 病毒 株系 病害
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香蕉束顶病毒的提纯 被引量:6
3
作者 叶旭东 杨辉 +2 位作者 吴如健 陈景耀 柯冲 《福建省农科院学报》 1993年第2期1-4,共4页
应用液氮冷冻香蕉束顶病组织,高速粉碎,氯仿—正丁醇澄清,差速离心,沉淀悬浮后经蔗糖垫部分纯化病毒,收集的蔗糖垫浓缩后经0—40%连续蔗糖梯度离心4小时,在离心管上半部形成一个明显的含有大量等径病毒的紫外吸收峰。再经不连续硫酸铯... 应用液氮冷冻香蕉束顶病组织,高速粉碎,氯仿—正丁醇澄清,差速离心,沉淀悬浮后经蔗糖垫部分纯化病毒,收集的蔗糖垫浓缩后经0—40%连续蔗糖梯度离心4小时,在离心管上半部形成一个明显的含有大量等径病毒的紫外吸收峰。再经不连续硫酸铯梯度离心6小时,形成一狭窄的乳白色带,含有高度纯化的直径约18nm的香蕉束顶病毒(BBTV)。用台湾提供的BBTV单克隆抗体,ELISA法可检测到提纯过程中病毒的存在,ISEM法可从粗提物中捕获大量等径病毒。ELISA法也用于检测田间及组织培养原种苗的带毒情况。 展开更多
关键词 香蕉 病毒 提纯
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香蕉束顶病毒的提纯和血清学研究 被引量:4
4
作者 徐平东 张广志 +5 位作者 周仲驹 李梅 沈春奇 庄西卿 林奇英 谢联辉 《热带作物学报》 CSCD 1996年第2期42-46,共5页
以香蕉交脉蚜(Pentalonianigroncrvosa)人工接种表现典型束顶病症状的香蕉组培苗为材料,预预先经氯仿-正丁醇充分乳化的缓冲液抽提和澄清、差速离心、蔗糖垫部分纯化、蔗糖梯度离心,得到粒体完整的直径约1... 以香蕉交脉蚜(Pentalonianigroncrvosa)人工接种表现典型束顶病症状的香蕉组培苗为材料,预预先经氯仿-正丁醇充分乳化的缓冲液抽提和澄清、差速离心、蔗糖垫部分纯化、蔗糖梯度离心,得到粒体完整的直径约18-20nm的球状病毒。提纯的病毒制剂具典型的核蛋白紫外吸收光谱,最高吸收峰在257nm左右,最低吸收峰在240nm左右,A260/280=1.3,提纯产量最高可达3.4mg/kg组织。用上述提纯病毒作为抗原免疫家兔制备的抗血清,经对流免疫电泳方法测定效价为1:32。用该抗血清建立的A蛋白夹心ELISA(DAS-ELISA)及与单克隆抗体结合使用的异种抗体双夹心ELISA(DAS-ELISA)能检测各种香蕉束顶病样品。 展开更多
关键词 香蕉 病毒 提纯 血清学
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植物抗病毒基因工程与香蕉束顶病毒(BBTV)分子生物学的研究进展 被引量:4
5
作者 朱西儒 张海保 《广西热作科技》 1997年第1期40-41,共2页
关键词 香蕉 病毒 分子生物学 基因工程
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香蕉束顶病毒NSP株系DNA组分5的克隆和序列分析 被引量:2
6
作者 郑耘 李华平 +1 位作者 肖火根 范怀忠 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期289-292,共4页
本文利用PCR技术扩增得到香蕉束顶病毒(BBTV)NSP株系DNA组分5的全基因,该基因全长为1 013 nt,具有一个开放阅读框,编码161个氨基酸.NSP株系与南太平洋组澳大利亚、夏威夷、埃及分离物DNA组分5核苷酸和编码的氨基酸序列相比较,核苷酸序... 本文利用PCR技术扩增得到香蕉束顶病毒(BBTV)NSP株系DNA组分5的全基因,该基因全长为1 013 nt,具有一个开放阅读框,编码161个氨基酸.NSP株系与南太平洋组澳大利亚、夏威夷、埃及分离物DNA组分5核苷酸和编码的氨基酸序列相比较,核苷酸序列同源率介于88%~89%之间,氨基酸序列同源率介于76%~79%之间,借助进化树分析和生物信息学研究方法,发现NSP株系组分5同样含有保守的与植物体内Rb蛋白结合的、能够调节寄主体内DNA复制相关蛋白积累的功能基序--LYCDE;并预测了蛋白质二级结构和性质. 展开更多
关键词 香蕉 病毒 DNA-5组分 序列分析
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DNA探针诊断和追踪香蕉束顶病毒研究 被引量:3
7
作者 赖星华 R.M.Robelt J.L.Dale 《西南农业学报》 CSCD 1991年第4期76-79,共4页
本文报导应用DNA探针诊断、追踪香蕉束顶病的分子杂交技术.鉴于该探针具有高度特异性和灵敏度,香蕉束顶病的分子遗传学诊断可作为检疫依据.
关键词 香蕉 病毒 DNA探针 诊断
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香蕉束顶病毒NS株系DNA组分6的克隆及序列分析 被引量:2
8
作者 何自福 肖火根 +1 位作者 李华平 范怀忠 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期33-36,共4页
通过常规的基因克隆技术 ,对香蕉束顶病毒NS株系代表分离物的DNA组分 6进行了克隆和序列分析 ,并将该分离物这个组分的序列与先前报道的广州天河分离物 (属NSP株系 )的该组分序列进行比较 ,结果表明 :该组分全序列、ORF及其编码的氨基... 通过常规的基因克隆技术 ,对香蕉束顶病毒NS株系代表分离物的DNA组分 6进行了克隆和序列分析 ,并将该分离物这个组分的序列与先前报道的广州天河分离物 (属NSP株系 )的该组分序列进行比较 ,结果表明 :该组分全序列、ORF及其编码的氨基酸序列在 2个分离物间的变异率分别为 3 4%、1 7%和 2 6 % .表明该组分在 2个株系代表分离物间存在较显著差异 ,从而进一步支持了广东BBTV存在 2个株系的结论 .此外 ,NS株系代表分离物DNA组分 6的全序列、ORF及其编码的氨基酸序列与澳大利亚分离物的变异率分别为 14.4%、7.5 %和 7.1% . 展开更多
关键词 香蕉 病毒 NS株系 基因克隆 序列分析 DNA组分
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香蕉试管苗的束顶病毒批量快速检验程序的建立 被引量:2
9
作者 雷光富 朱西儒 张海保 《广西热作科技》 1997年第2期36-38,共3页
关键词 香蕉 试管苗 病毒 检测 ELISA BBTV
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香蕉束顶病毒的电镜观察
10
作者 蔡祝南 张中义 王学英 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 1989年第4期328-329,共2页
1987年在云南河口县采集束顶病株香蕉,苗期症状为:幼苗病株矮缩,新叶变窄变短,束状丛生,部分病株叶片出现深浅不匀的条纹,严重的叶缘黄化,随后焦枯。假茎自上而下逐步焦枯,解剖假茎有时可见褐色条纹,部分出现烂心。香蕉束顶病发病程度... 1987年在云南河口县采集束顶病株香蕉,苗期症状为:幼苗病株矮缩,新叶变窄变短,束状丛生,部分病株叶片出现深浅不匀的条纹,严重的叶缘黄化,随后焦枯。假茎自上而下逐步焦枯,解剖假茎有时可见褐色条纹,部分出现烂心。香蕉束顶病发病程度因品种、地理分布、种植年限及施肥管理水平而有差别。我们采集病叶,进行取材,在戊二醛及锇酸中进行双重固定,水洗后经乙醇梯度脱水,环氧丙烷置换,Epon812包埋,LKB8800超薄切片。切片经醋酸双氧铀-柠檬酸铅双染色,在JEM-100S电镜下观察切片。以健康株为对照。 展开更多
关键词 香蕉 病毒 病毒 电镜观察
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香蕉束顶病毒基因克隆和序列分析 被引量:15
11
作者 肖火根 李华平 范怀忠 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期55-63,共9页
对香蕉束顶病毒(BBTV)中国分离株DNA组份I(DNA1)、外壳蛋白(CP)和运转蛋白(MP)基因进行了克隆和序列分析。BBTVDNA1含有1103个核苷酸,与南太平洋和亚洲分离株分别有87%88%和96%... 对香蕉束顶病毒(BBTV)中国分离株DNA组份I(DNA1)、外壳蛋白(CP)和运转蛋白(MP)基因进行了克隆和序列分析。BBTVDNA1含有1103个核苷酸,与南太平洋和亚洲分离株分别有87%88%和96%98%的核苷酸序列同源性。由DNA1编码的复制酶含有186个氨基酸残基,与南太平洋和亚洲分离株分别有944%958%和976%98.0%的氨基酸序列同源性。外壳蛋白基因由510个核苷酸组成,与澳大利亚分离株有925%的核苷酸序列同源性和988%的氨基酸序列同源性。运转蛋白基因由348个核苷酸组成,与澳大利亚分离株有906%的核苷酸序列同源性和879%的氨基酸序列同源性。通过比较中国分离株和其它国家分离株的DNA1、CP和MP基因的核苷酸序列,进一步证明BBTV分离株明显可分为南太平洋和亚洲两组。但是两组分离株CP基因的氨基酸序列是很相似的。 展开更多
关键词 香蕉病毒 中国分离株 DNA序列
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应用Digoxigenin标记的cDNA探针检测香蕉束顶病毒 被引量:6
12
作者 孟清 曹先维 张彤 《内蒙古大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1999年第3期367-371,共5页
用非放射性的Digoxigenin标记的11-dUTP取代32P标记的dATP或dCTP,标记克隆的BBTVcDNA-10.5kbcDNA,制备成探针.通过核酸斑点杂交对粗提取的BBTV,BBTV-DNA,感染BBT... 用非放射性的Digoxigenin标记的11-dUTP取代32P标记的dATP或dCTP,标记克隆的BBTVcDNA-10.5kbcDNA,制备成探针.通过核酸斑点杂交对粗提取的BBTV,BBTV-DNA,感染BBTV的香蕉植物的拟茎,球茎处的组织,新生叶片以及成熟后的叶片进行了检测.结果表明:BBTVcDNA-1cDNA探针特异性强,不与CMV—RNA、无毒香蕉组培苗提取的核酸发生杂交反应;仅与粗提BBTV、BBTV-DNA、BBTV侵染的香蕉组织的核酸提取物发生杂交反应.此探针灵敏度高,可检出含有BBTVcDNA-10.5kb的质粒DNA的最小量为10pg;测定感病香蕉植株的拟茎汁液的最高稀释度可达1∶128,相当于0.4mg病蕉组织中的病毒含量.测定同一病株不同部位的结果表明,BBTV在植物体内的分布不均匀,拟茎处组织中病毒含量最高,球茎处的组织以及新生叶片中的病毒含量次之。 展开更多
关键词 香蕉病毒 CDNA探针 非放射性检测 病毒
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利用超低温保存方法脱除香蕉束顶病毒的研究 被引量:14
13
作者 曾继吾 牛王翠 +4 位作者 黄永红 孙中海 黄秉智 易干军 周碧容 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期457-460,共4页
香蕉束顶病毒(BBTV)是香蕉生产中的严重病害之一,主要通过感病材料和香蕉交脉蚜等昆虫进行传播,目前尚无有效防治方法。本研究以感染BBTV的巴西蕉(MusaAAA Cavendish)为材料,研究了感染BBTV的巴西蕉离体再生和超低温保存技术条件,表明... 香蕉束顶病毒(BBTV)是香蕉生产中的严重病害之一,主要通过感病材料和香蕉交脉蚜等昆虫进行传播,目前尚无有效防治方法。本研究以感染BBTV的巴西蕉(MusaAAA Cavendish)为材料,研究了感染BBTV的巴西蕉离体再生和超低温保存技术条件,表明离体茎尖在MS+6-BA4.0 mg/L+NAA0.4 mg/L的培养基上分化不定芽较好;采用玻璃化法超低温保存技术保存带有BBTV的香蕉茎尖,再生后植株BBTV脱除率达到60.6%,而常规的茎尖培养对BBTV的脱除率仅为26.7%。 展开更多
关键词 超低温保存 玻璃化法 香蕉病毒 脱毒
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香蕉束顶病毒单克隆抗体的制备及其应用 被引量:11
14
作者 孙茂林 和春育 +4 位作者 庄俊英 王宪焘 陈利 李迅东 唐恩华 《西南农业学报》 CSCD 1992年第3期75-79,共5页
用纯化的香蕉束顶病毒(BBTV)抗原免疫BALB/C小鼠。取脾脏细胞与骨髓瘤NS-1细胞融合。经HAT培养液选择性培养,间接ELISA方法筛选阳性孔。阳性杂交瘤用有限稀释法克隆,间接ELISA法复筛,最后获得201E_3、302C_4两株稳定分泌抗BBTV单克隆抗... 用纯化的香蕉束顶病毒(BBTV)抗原免疫BALB/C小鼠。取脾脏细胞与骨髓瘤NS-1细胞融合。经HAT培养液选择性培养,间接ELISA方法筛选阳性孔。阳性杂交瘤用有限稀释法克隆,间接ELISA法复筛,最后获得201E_3、302C_4两株稳定分泌抗BBTV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。其免疫球蛋白亚类为IgM。纯化后的腹水抗体,用间接ELISA和斑点法(DIA)检测了采自云南河口、个旧和澳大利亚的BBTV病样样品,表现出特异性反应。最高效价达1:64000,培养上清液效价为1:16。经3个月连续培养,仍能稳定分泌抗BBTV McAb.结果表明,已建立了稳定分泌抗香蕉束顶病毒特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株。制备的McAb能应用于香蕉束顶病的诊断和病毒的研究。 展开更多
关键词 香蕉病毒 单克隆抗体 香蕉
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BBTV两个株系DNA组分1的克隆及序列分析 被引量:8
15
作者 何自福 李华平 +1 位作者 肖火根 范怀忠 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期364-369,共6页
对在生物学特性特别是寄主范围上存在明显差异的 NSP株系和 NS株系的代表分离物 (广州天河分离物和高州分离物 )的 DNA组分 1进行了克隆和序列分析 ,结果表明 :2个代表分离物的DNA组分 1全序列、ORF及其编码的氨基酸序列的变异率分别为 ... 对在生物学特性特别是寄主范围上存在明显差异的 NSP株系和 NS株系的代表分离物 (广州天河分离物和高州分离物 )的 DNA组分 1进行了克隆和序列分析 ,结果表明 :2个代表分离物的DNA组分 1全序列、ORF及其编码的氨基酸序列的变异率分别为 3.2 %、3.1%和 2 .8% ,从而进一步确证了可以用寄主范围来作上述 2个株系的鉴定。此外 ,这 2个株系的 DNA组分 1、ORF及其编码的氨基酸序列分别与肖火根等报道的中国 (广东 )分离物、以及亚洲组和南太平洋组各分离物进行比较 ,结果表明 :NS株系与肖火根等报道的中国 (广东 )分离物的亲缘关系很密切 ;这 2个株系与亚洲组各分离物的差异均较小 ,而与南太平洋组各分离物的差异均较大 。 展开更多
关键词 香蕉病毒 株系 基因克隆 序列分析
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香蕉束顶病毒DNA组分2的克隆与序列分析 被引量:8
16
作者 徐春香 肖火根 +1 位作者 李华平 范怀忠 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期189-190,共2页
关键词 香蕉病毒 DNA组分2 克隆 序列分析
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香蕉两种主要病毒多重PCR检测方法的建立 被引量:8
17
作者 彭军 王国芬 +3 位作者 黄俊生 代鹏 谢玉萍 李伟东 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期845-848,共4页
根据香蕉束顶病(Banana bunchy top virus,BBTV)和香蕉花叶心腐病(Cucumber mosaic virus,CMV)的复制酶基因、外壳蛋白基因序列分别设计特异性引物对,在BBTV单一PCR和CMV RT-PCR优化体系的基础上,建立了可同时检测BBTV、CMV的多... 根据香蕉束顶病(Banana bunchy top virus,BBTV)和香蕉花叶心腐病(Cucumber mosaic virus,CMV)的复制酶基因、外壳蛋白基因序列分别设计特异性引物对,在BBTV单一PCR和CMV RT-PCR优化体系的基础上,建立了可同时检测BBTV、CMV的多重PCR检测方法。此方法可以特异地从感染BBTV和CMV的样品中扩增出2条带,BBTV(748bp)和CMV(557bp)。扩增产物序列测定结果表明,BBTV扩增产物与GenBank中其他分离物的核苷酸序列同源性为91%~99%,CMV扩增产物与GenBank中其他分离物的核苷酸序列同源性为93%~98%。 展开更多
关键词 香蕉 香蕉病毒 黄瓜花叶病毒 病毒检测 RT-PCR
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香蕉束顶病毒海口分离物CP基因的原核表达、纯化及其抗血清制备 被引量:8
18
作者 余乃通 冯团诚 +2 位作者 王健华 张雨良 刘志昕 《热带作物学报》 CSCD 2010年第5期767-771,共5页
用PCR方法从感染香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)的香蕉植株幼嫩假茎和叶片总DNA中扩增外壳蛋白(coat protein,CP)基因。回收目的片段,经XhoⅠ和BamHⅠ双酶切后与同样酶切的质粒载体pET30a(+)相连接,酶切验证及测序结果获... 用PCR方法从感染香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)的香蕉植株幼嫩假茎和叶片总DNA中扩增外壳蛋白(coat protein,CP)基因。回收目的片段,经XhoⅠ和BamHⅠ双酶切后与同样酶切的质粒载体pET30a(+)相连接,酶切验证及测序结果获得了含BBTV CP基因的重组质粒pET30a-CP。将重组质粒转化Codon plus表达菌,在25℃、0.4mmol/L IPTG条件下诱导6h或过夜,经12%SDS-PAGE电泳分析可知,该重组菌表达了一个与预期分子量大小一致的His-CP融合蛋白,约为30ku,且主要以包涵体的形式存在。多次洗涤包涵体后得到高纯度的融合蛋白,用其免疫家兔,获得BBTV CP蛋白抗血清。间接ELISA法测定抗血清效价大于51200。Western blot分析表明,抗血清能与融合蛋白特异性结合。 展开更多
关键词 香蕉病毒 CP基因 原核表达 纯化 抗血清
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香蕉束顶病毒海口分离物Rep基因的克隆、原核表达、抗血清制备及检测 被引量:8
19
作者 余乃通 冯团诚 +2 位作者 王健华 张雨良 刘志昕 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期38-43,共6页
[目的]对香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)海口分离物起始蛋白(replication initiation pro-teins,Rep)基因进行克隆、原核表达、抗血清制备,为BBTV有效的检测及分子流行病学等研究奠定基础。[方法]以海口地区染病香蕉幼嫩... [目的]对香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)海口分离物起始蛋白(replication initiation pro-teins,Rep)基因进行克隆、原核表达、抗血清制备,为BBTV有效的检测及分子流行病学等研究奠定基础。[方法]以海口地区染病香蕉幼嫩假茎和叶片的总DNA为模板,通过PCR技术克隆BBTV海口分离物的起始蛋白基因,连接到表达载体并进行大肠杆菌原核表达,制备高效价特异性抗血清。[结果]应用PCR方法从染毒香蕉幼嫩假茎和叶片总DNA中扩增复制rep基因,回收目的片段后经酶切,获得了含BBTV Rep基因的重组质粒pET32b-Rep。将重组质粒转化E.coliBL21(DE3),经不同的时间、温度及IPTG浓度优化,12%SDS-PAGE电泳分析,在20℃、0.1 mmol/L IPTG条件诱导4h,最终获得大量的可溶性融合蛋白。将可溶性蛋白上清液经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,得到高纯度的融合蛋白。用纯化后的融合蛋白免疫家兔,获得了BBTV Rep蛋白抗血清。以融合蛋白做抗原,间接ELISA法测定抗血清效价大于125 000。以田间样品做抗原时,结果表明抗血清最佳工作浓度为1∶1 000。Western blot鉴定结果表明抗血清能与融合蛋白特异性结合。[结论]利用Rep基因制备的特异性抗血清在BBTV病毒粒体的组装机制研究及病毒病诊断上具有重要的应用价值。 展开更多
关键词 香蕉病毒 Rep基因 原核表达 抗血清制备
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香蕉束顶病毒DNA组分6的克隆和序列分析 被引量:6
20
作者 何自福 李华平 +1 位作者 肖火根 范怀忠 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期185-188,共4页
The DNA component 6 of a Chinese isolate of banana bunchy top virus (BBTV) was cloned and sequenced. It is 1,081 nucleotides in length. Between the component sequences of Chinese and Australian BBTV isolates, there ar... The DNA component 6 of a Chinese isolate of banana bunchy top virus (BBTV) was cloned and sequenced. It is 1,081 nucleotides in length. Between the component sequences of Chinese and Australian BBTV isolates, there are 85.5% nucleotide sequence identity in full length, 92.5% nucleotide sequence identity in predicted open reading frame (ORF) and 94.8% amino acid sequence identity of potentially encoded proteins. The DNA component 6 is present in all BBTV infections tested, so it may have special function in transmission, infection, replication or movement of BBTV. 展开更多
关键词 香蕉病毒 序列分析 基因克隆
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