昆虫杆状病毒表达载体系统与疫苗研制的30年回顾 被引量：13

1

作者 于永利 《微生物学免疫学进展》 2015年第4期1-15,共15页

1983年12月,一篇关于用昆虫杆状病毒感染昆虫细胞表达重组人β干扰素文章的发表,标示了杆状病毒表达载体系统(Baculovirus expression vector system,BEVS)的诞生。迄今为止,已采用BEVS表达生产了数千种重组蛋白,其中7种已被成功用于商... 1983年12月,一篇关于用昆虫杆状病毒感染昆虫细胞表达重组人β干扰素文章的发表,标示了杆状病毒表达载体系统(Baculovirus expression vector system,BEVS)的诞生。迄今为止,已采用BEVS表达生产了数千种重组蛋白,其中7种已被成功用于商品化人用或兽用疫苗的抗原。仅对30年来基于BEVS的疫苗研制作一论述。 展开更多

关键词 杆状病毒 昆虫细胞 杆状病毒表达载体系统 疫苗

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牛IL-18成熟蛋白基因在昆虫细胞中的表达及其活性 被引量：6

2

作者 田兆菊 郑玉姝 +1 位作者 胡敬东 赵宏坤 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期277-279,共3页

目的:在杆状病毒表达载体中表达牛白细胞介素-18(bovine interleukine-18,BoIL-18)成熟蛋白基因,并鉴定其生物学活性。方法:设计一对特异性引物,将编码BoIL-18的成熟蛋白基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBac HTb上,构建重组质粒repFas... 目的:在杆状病毒表达载体中表达牛白细胞介素-18(bovine interleukine-18,BoIL-18)成熟蛋白基因,并鉴定其生物学活性。方法:设计一对特异性引物,将编码BoIL-18的成熟蛋白基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBac HTb上,构建重组质粒repFastBac HTb-18,转化至DH10Bac感受态细胞中得到重组Bacmid(Bacmid-BoIL18)。在Cellfectin作用下,将Bacmid-BoIL18转染昆虫细胞sf9获得重组杆状病毒,然后将重组杆状病毒感染sf9,感染后不同时间收获sf9细胞,进行SDS-PAGE电泳,分析表达情况;用BoIL-18的原核表达产物作为抗原制备的兔多克隆抗体进行Western blot分析;将纯化的表达产物对牛外周血单个核细胞(PBMC)进行细胞增殖试验,对健康牛脾进行IFN-γ诱生试验,初步分析表达产物的生物学活性。结果:BoIL-18成熟蛋白基因在昆虫细胞中获得了表达,经薄层凝胶扫描分析证实,表达量占总蛋白的21.3%;Western blot分析证明,在相对分子质量(Mr)约为26 000处有一条特异性条带。生物学活性分析表明,纯化的表达产物可明显增强淋巴细胞增殖,促进IFN-γ的产生。结论:BoIL-18成熟蛋白基因在昆虫细胞中获得了表达,表达产物具有良好的生物学活性。 展开更多

关键词 BoIL-18成熟蛋白基因 杆状病毒表达载体系统 昆虫细胞 生物学活性

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猪生长激素基因在昆虫细胞中的分泌表达 被引量：8

3

作者 欧阳菁 龙綮新 +1 位作者 杨林 王珣章 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期482-485,共4页

将PCR扩增得到的 pGH基因插入到带有 polh启动子和 gp6 7强信号肽序列的杆状病毒转移载体pAcGP6 7 A中 ,构建重组质粒 pGP6 7pGH ,并与线性化致死缺失型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 (AcMNPV OCC-)基因组DNA共转染Sf9细胞 ,构建出重组病毒A... 将PCR扩增得到的 pGH基因插入到带有 polh启动子和 gp6 7强信号肽序列的杆状病毒转移载体pAcGP6 7 A中 ,构建重组质粒 pGP6 7pGH ,并与线性化致死缺失型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 (AcMNPV OCC-)基因组DNA共转染Sf9细胞 ,构建出重组病毒AcMNPV pGP6 7 pGH OCC-。感染重组病毒的Hi5细胞的表达产物的SDS PAGE和Westernblot结果表明 ,细胞可溶蛋白和培养液上清中均有一条分子量约为 2 2kDa的猪生长激素特异性反应带 ,且培养液上清中的目的蛋白分子量比天然pGH略大一些。薄层扫描仪扫描估测可知 ,重组pGH分别占细胞可溶蛋白的 8 98%和培养液上清总蛋白的 3 6 1%。将表达 96h的培养液上清浓缩液进行N 糖基化分析 ,结果显示重组 pGH无N 糖基化加工修饰。 展开更多

关键词 猪 生长激素基因 昆虫细胞 杆状病毒表达载体系统 基因表达 N-糖基化分析

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杆状病毒及其应用 被引量：3

4

作者 曹建斌 范晓军 梁爱华 《科技情报开发与经济》 2007年第18期131-132,共2页

介绍了杆状病毒的基本概念,阐述了杆状病毒表达载体系统,回顾了杆状病毒生物杀虫剂的研究成果,展望了杆状病毒生物杀虫剂的应用前景。

关键词 杆状病毒 杆状病毒表达载体系统 生物杀虫剂

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Bac-to-Bac系统的研究进展及在家蚕中的应用 被引量：3

5

作者 吴小锋 岳万福 +2 位作者 刘剑梅 李广立 缪云根 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期146-150,共5页

Bac-to-Bac策略是目前昆虫杆状病毒表达系统获取重组杆状病毒最为方便、快捷的途径之一。以Bac-to-Bac系统面向的苜蓿银纹夜蛾杆状病毒(AcMNPV)表达系统、家蚕杆状病毒(BmNPV)表达系统、棉铃虫杆状病毒(HaNPV)表达系统等3个主要子系统... Bac-to-Bac策略是目前昆虫杆状病毒表达系统获取重组杆状病毒最为方便、快捷的途径之一。以Bac-to-Bac系统面向的苜蓿银纹夜蛾杆状病毒(AcMNPV)表达系统、家蚕杆状病毒(BmNPV)表达系统、棉铃虫杆状病毒(HaNPV)表达系统等3个主要子系统为对象,从宿主域逐渐扩大、蛋白的表达水平不断提高、筛选和纯化更为简便高效以及在家蚕中应用的状况等角度,对Bac-to-Bac系统的发展及功能、特点等进行了阐述。 展开更多

关键词 Bac—to-Bac系统 杆状病毒表达载体系统 家蚕

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禽流感病毒NS1蛋白在杆状病毒表达系统中的表达 被引量：3

6

作者 李东卫 郭莹莹 +5 位作者 刘在斯 王世达 沈楠 文辉强 焦同路 王靖飞 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第6期27-31,共5页

为获得纯化的禽流感病毒(AIV)的NS1蛋白,将A/chicken/Guangxi/10/99(H9N2)(CK/GX/10/99)NS1全长核苷酸克隆至杆状病毒转移载体pFastBacHTA中,构建了重组转移载体pFastBacHTA-NS1,然后转化入DH10Bac感受态细胞中制备重组杆粒,在脂质体介... 为获得纯化的禽流感病毒(AIV)的NS1蛋白,将A/chicken/Guangxi/10/99(H9N2)(CK/GX/10/99)NS1全长核苷酸克隆至杆状病毒转移载体pFastBacHTA中,构建了重组转移载体pFastBacHTA-NS1,然后转化入DH10Bac感受态细胞中制备重组杆粒,在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,获得表达NS1基因的重组杆状病毒。用重组杆状病毒转染昆虫细胞sf9进行NS1蛋白的表达,通过SDS-PAGE电泳、Western blot、间接免疫荧光(IFA)对表达的目标蛋白进行分析。结果表明,构建了含NS1基因的重组杆状病毒,分子质量约30ku的重组蛋白得到了表达,为NS1的相关功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒 NS1蛋白 杆状病毒表达载体系统 蛋白纯化

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利用杆状病毒表达载体系统表达重组乙型肝炎病毒核心蛋白 被引量：2

7

作者 高琳琳 王晓燕 +4 位作者 张颖慧 李岩 邓菲 张艳芳 林菊生 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期787-790,共4页

目的利用杆状病毒表达载体系统制备重组乙型肝炎病毒核心蛋白。方法构建含有HBV C基因的杆状病毒转移载体pFastBac Dual-HBV core,转化大肠埃希菌DH10Bac进行转座,提取重组Bacmid DNA转染昆虫细胞Sf9,获得含有HBV C基因的重组杆状病毒... 目的利用杆状病毒表达载体系统制备重组乙型肝炎病毒核心蛋白。方法构建含有HBV C基因的杆状病毒转移载体pFastBac Dual-HBV core,转化大肠埃希菌DH10Bac进行转座,提取重组Bacmid DNA转染昆虫细胞Sf9,获得含有HBV C基因的重组杆状病毒。用重组杆状病毒感染Sf9细胞进行乙型肝炎病毒核心蛋白表达,然后通过SDS-PAGE电泳和Western blot分析表达情况。结果成功构建了含HBV C基因的重组杆状病毒,而且在昆虫细胞Sf9中表达了乙型肝炎病毒核心蛋白。结论利用Bac to Bac杆状病毒表达系统,成功地表达了乙型肝炎病毒核心蛋白,为进一步研究奠定了基础。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒核心蛋白 杆状病毒表达载体系统 昆虫细胞

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金鱼生长激素Ⅱ基因在杆状病毒中的表达

8

作者 林广云 龙綮新 +2 位作者 黄安林 庞义 余奇理 《中国病毒学》 CSCD 1998年第3期243-250,共8页

以ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３为转移载体，将编码金鱼生长激素Ⅱ的ｃＤＮＡ插入粉纹夜蛾核型多角体病毒（ＴｎＮＰＶ）基因组中，构建了重组病毒株ＴｎＮＰＶＳＸ＋ｇｆＧＨⅡ４６。该毒株能在草地贪夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉ... 以ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３为转移载体，将编码金鱼生长激素Ⅱ的ｃＤＮＡ插入粉纹夜蛾核型多角体病毒（ＴｎＮＰＶ）基因组中，构建了重组病毒株ＴｎＮＰＶＳＸ＋ｇｆＧＨⅡ４６。该毒株能在草地贪夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）离体培养细胞及银纹夜蛾（Ａｇｙｒｏｇｒａｍｍａａｇｎａｔａ）幼虫中表达金鱼生长激素基因。蛋白免疫印迹表明，表达的生长激素蛋白分子量为２２．５ｋＤａ，与理论计算值相符，且表达的生长激素可分泌到感染细胞的培养基及虫体血淋巴中。ＲＩＡ结果表明，表达产物与天然的生长激素有相似的免疫特性，重组病毒在感染细胞９６ｈｐｉ所表达的生长激素达到最高水平，平均每１０５个细胞可在细胞培养基中检测到金鱼生长激素Ⅱ达８６．７４ｎｇ；平均每克干虫可产生金鱼生长激素Ⅱ２１４μｇ。 展开更多

关键词 杆状病毒表达载体系统 金鱼生长激素Ⅱ基因 表达

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鸡白细胞介素18成熟蛋白在昆虫杆状病毒系统中的表达及其活性检测 被引量：1

9

作者 范忠玲 王婷婷 +1 位作者 马凤龙 胡敬东 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2011年第3期438-444,共7页

首先将鸡白细胞介素18成熟蛋白(mature chicken interleukin-18,mChIL-18)基因亚克隆至杆状病毒转移载体pFastBac HTb上,然后转化至含穿梭载体Bacmid的受体菌E.coli DH10BacTM中,构建重组Bacmid(rBacmid)。通过脂质体介导法将纯化的rBac... 首先将鸡白细胞介素18成熟蛋白(mature chicken interleukin-18,mChIL-18)基因亚克隆至杆状病毒转移载体pFastBac HTb上,然后转化至含穿梭载体Bacmid的受体菌E.coli DH10BacTM中,构建重组Bacmid(rBacmid)。通过脂质体介导法将纯化的rBacmid转染sf9细胞,获得完整重组杆状病毒,将达到一定滴度的重组杆状病毒感染sf9,收获感染后不同时间段的培养上清和细胞,经SDS-PAGE分析、Western-blotting和间接免疫荧光(IFA)检测,结果表明,分子量约为23KDa的重组蛋白在昆虫细胞中获得了表达;鸡淋巴细胞转化试验和水疱性口炎病毒(VSV)抑制试验表明,表达产物具有良好的生物学活性。结论:在杆状病毒表达系统中成功表达了有活性的mChIL-18蛋白。 展开更多

关键词 ChIL-18成熟蛋白 杆状病毒表达载体系统 昆虫细胞 生物学活性

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重组人可溶性PDGFRβ/Fc在昆虫细胞Sf9中的表达 被引量：1

10

作者 谢秋玲 刘兰 +3 位作者 刘秀贵 张玲 徐丽慧 洪岸 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期743-748,共6页

【目的】利用昆虫细胞Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达血小板源性生长因子受体β(PDGFRβ)链膜外区与人IgGFc片段的可溶性受体融合蛋白sPDGFRβ/Fc,并检测重组蛋白的特异性和生物活性。【方法】采用Bac-to-Bac系统,构建重组转移质粒pFas... 【目的】利用昆虫细胞Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达血小板源性生长因子受体β(PDGFRβ)链膜外区与人IgGFc片段的可溶性受体融合蛋白sPDGFRβ/Fc,并检测重组蛋白的特异性和生物活性。【方法】采用Bac-to-Bac系统,构建重组转移质粒pFastbac-sPDGFRβ/Fc,转化到含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,使目的基因与杆状病毒基因组DNA发生位点特异性重组,获得重组病毒DNA,将其通过脂质体转染昆虫细胞Sf9获得重组病毒。将该重组病毒感染Sf9无血清细胞系,在Sf9细胞中表达sPDGFRβ/Fc,对表达产物进行Western blotting检测和Protein A亲合层析纯化,并进一步通过MTT法检测获得的重组蛋白生物学活性。【结果】重组病毒感染Sf9细胞后,经Western blotting分析,能检测到一条分子量约为97kDa的特异性条带,与目的蛋白大小相符。通过ProteinA亲和层析,获得了纯度达75%以上,表达量为1μg/mL细胞培养上清的重组融合蛋白,MTT结果显示该重组融合蛋白sPDGFRβ/Fc具有抑制PDGF刺激的Balb/c3T3细胞增殖的能力。【结论】具有生物活性的重组可溶性受体融合蛋白sPDGFRβ/Fc可在昆虫细胞中成功地得到表达。 展开更多

关键词 血小板源性生长因子受体 杆状病毒表达载体系统 昆虫细胞 重组蛋白 MTT法

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杆状病毒表达载体系统研究进展

11

作者 李青兵 《广东蚕业》 1998年第4期60-64,共5页

昆虫杆状病毒科(Baculoviridae)因包埋于多角体中的病毒粒子呈棒状而得名,迄今为止,用于基因工程的杆状病毒均属核型多角体病毒(nuclear polyhedrosis virus,NPV)。NPV是一类双链DNA病毒,它的DNA是90—230Kb的环状分子。利用NPV作为外... 昆虫杆状病毒科(Baculoviridae)因包埋于多角体中的病毒粒子呈棒状而得名,迄今为止,用于基因工程的杆状病毒均属核型多角体病毒(nuclear polyhedrosis virus,NPV)。NPV是一类双链DNA病毒,它的DNA是90—230Kb的环状分子。利用NPV作为外源基因表达载体的设想最初是由Miller 1981年提出。 展开更多

关键词 杆状病毒表达载体系统 启动子序列 外源基因 昆虫杆状病毒 多角体蛋白 转移载体 研究进展 重组病毒 核型多角体病毒 病毒粒子

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麻痹性贝类毒素受体蛋白Saxiphilin的克隆与表达

12

作者 曹玲 吕敬章 +6 位作者 丁晶 葛丽雅 刘慧玲 张恒 杨凯 汤慕瑾 岳振峰 《食品安全质量检测学报》 CAS 2014年第6期1739-1745,共7页

目的麻痹性贝类毒素受体蛋白Saxiphilin可特异性结合麻痹性贝类毒素,本文采用杆状病毒表达载体系统对Saxiphilin进行体外表达研究。方法从牛蛙肝脏克隆得到ssziphilin基因(N端含有自身分泌信号肽),利用特异引物使其C端带上组氨酸标签。... 目的麻痹性贝类毒素受体蛋白Saxiphilin可特异性结合麻痹性贝类毒素,本文采用杆状病毒表达载体系统对Saxiphilin进行体外表达研究。方法从牛蛙肝脏克隆得到ssziphilin基因(N端含有自身分泌信号肽),利用特异引物使其C端带上组氨酸标签。结果使用杆状病毒表达载体系统构建带有目的基因的重组病毒,用病毒感染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞Sf9以表达Saxiphilin,通过优化细胞培养基中胎牛血清含量及感染时间,确定使用无血清培养基培养,重组病毒感染Sf9细胞72 h时,培养基中可溶性目的蛋白表达量最大。结论通过镍柱纯化得到Saxiphilin蛋白,以期将此蛋白进一步用于麻痹性贝类毒素的检测。 展开更多

关键词 麻痹性贝类毒素受体蛋白 杆状病毒表达载体系统 镍柱亲和纯化

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利用杆状病毒系统表达重组HBV聚合酶RT区段

13

作者 李晖 王程 +3 位作者 余治健 耿书英 王景玲 侯金林 《山东医药》 CAS 北大核心 2009年第13期73-74,共2页

目的利用杆状病毒表达载体系统制备重组HBV聚合酶RT区段蛋白。方法构建含有HBV P基因RT区段的杆状病毒转移载体pFastBac HT-RT,转化大肠埃希菌DH10B-ac进行重组,提取重组Bacmid DNA质粒,转染昆虫细胞Sf9获得含有HBVP基因RT区段的重组杆... 目的利用杆状病毒表达载体系统制备重组HBV聚合酶RT区段蛋白。方法构建含有HBV P基因RT区段的杆状病毒转移载体pFastBac HT-RT,转化大肠埃希菌DH10B-ac进行重组,提取重组Bacmid DNA质粒,转染昆虫细胞Sf9获得含有HBVP基因RT区段的重组杆状病毒。重组的杆状病毒再感染Sf9细胞进行HBVP基因RT区段蛋白表达,通过Western blot检测表达情况。结果成功构建了含HBV P基因RT区段的重组杆状病毒,昆虫细胞Sf9中能检测到HBV P基因RT区段蛋白的表达。结论利用杆状病毒表达系统能成功地表达HBVP基因RT区段蛋白。 展开更多

关键词 HBV P基因 杆状病毒表达载体系统 昆虫细胞

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猪圆环病毒2型结构蛋白表达及其类病毒颗粒疫苗

14

作者 张莉 邓治邦 《畜牧兽医科技信息》 2013年第4期4-5,共2页

圆环病毒(Porcine Circovirus,PCV)是一类无囊膜、单链环状DNA病毒,能引起多系统衰竭综合征(Postweaning Mμ Ltisystemic Wasting Syndrome,PMWS),给整个养猪业造成严重损失。杆状病毒表达载体系统(Bacμ Lovirus Expression Vector Sy... 圆环病毒(Porcine Circovirus,PCV)是一类无囊膜、单链环状DNA病毒,能引起多系统衰竭综合征(Postweaning Mμ Ltisystemic Wasting Syndrome,PMWS),给整个养猪业造成严重损失。杆状病毒表达载体系统(Bacμ Lovirus Expression Vector System,BEVS)具有表达水平高、能进行翻译后加工修饰等优势,表达的猪圆环病毒2型结构蛋白能自动组装成无基因组、安全、具有免疫原性的类圆环病毒颗粒(Virus-like Particals,VLPs),类圆环颗粒疫苗是一类非常有潜力的圆环病毒候选疫苗。本文对猪圆环病毒2型结构蛋白表达及其类病毒颗粒疫苗研究作以简洁综述。 展开更多

关键词 猪圆环病毒 杆状病毒表达载体系统 类病毒颗粒

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昆虫杆状病毒表达载体系统的研究及应用 被引量：22

15

作者 刘永平 王方海 +2 位作者 苏志坚 李广宏 庞义 《昆虫知识》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期1-5,共5页

昆虫杆状病毒表达载体系统具有表达水平高、表达产物可进行翻译后加工,并可通过感染昆虫幼虫而实现大规模低成本生产基因工程产品,该系统的建立和发展,被誉为20世纪80年代真核表达研究领域的一个重大进展。文章介绍了该系统的产生、发... 昆虫杆状病毒表达载体系统具有表达水平高、表达产物可进行翻译后加工,并可通过感染昆虫幼虫而实现大规模低成本生产基因工程产品,该系统的建立和发展,被誉为20世纪80年代真核表达研究领域的一个重大进展。文章介绍了该系统的产生、发展和技术原理,同时概述了该系统在基础研究、医药和农林业等领域的应用情况。 展开更多

关键词 昆虫杆状病毒表达载体系统 基础研究 医药 农林业

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应当引起关注的昆虫细胞中的弹状病毒污染

16

作者 魏佳琪 孙振 +8 位作者 薛秀 孟子燕 于馨 刘洋 张建龙 姜琳琳 张兴晓 朱洪伟 于佳玉 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期432-437,共6页

Sf弹状病毒(Sf-rhabdovirus,Sf-RV)是2014年从雌性草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda,Sf)蛹中分离得到的昆虫细胞系(Sf)中发现的一种弹状病毒,为线性负义单链RNA病毒。在Sf细胞系中发现的新弹状病毒(Sf-RV)使人们对昆虫细胞杆状病毒表... Sf弹状病毒(Sf-rhabdovirus,Sf-RV)是2014年从雌性草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda,Sf)蛹中分离得到的昆虫细胞系(Sf)中发现的一种弹状病毒,为线性负义单链RNA病毒。在Sf细胞系中发现的新弹状病毒(Sf-RV)使人们对昆虫细胞杆状病毒表达载体系统(Insect cell baculovirus expression vector system,IC-BEVS)生产的生物制剂的安全性表示质疑。本文主要对该病毒基因组构成、组成蛋白功能、感染宿主细胞能力宿主细胞对病毒的影响以及病毒带来的潜在安全性问题等方面进行简要阐述,以增加人们的认识。 展开更多

关键词 Sf弹状病毒 Sf细胞系 昆虫细胞杆状病毒表达载体系统

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利用昆虫细胞杆状病毒表达载体系统研制疫苗的研究进展 被引量：6

17

作者 思越 朱一超 +2 位作者 宋曦玉 罗亚妮 程林峰 《热带医学杂志》 CAS 2020年第8期1117-1120,F0003,共5页

灵活、快速和低成本的疫苗开发制造技术可以预防疾病的流行,满足广泛的疫苗接种需要。目前多种疫苗开发平台技术正在涌现,其中昆虫细胞杆状病毒表达载体系统(IC-BEVS)可兼具真核表达系统和原核表达系统的优势,不仅能够大量表达外源蛋白... 灵活、快速和低成本的疫苗开发制造技术可以预防疾病的流行,满足广泛的疫苗接种需要。目前多种疫苗开发平台技术正在涌现,其中昆虫细胞杆状病毒表达载体系统(IC-BEVS)可兼具真核表达系统和原核表达系统的优势,不仅能够大量表达外源蛋白还能对其进行较为完善的翻译后加工修饰。昆虫细胞易于大规模培养,可有效降低生产成本。同时昆虫细胞不能被人类病原体所感染,安全性好。以上这些优点使得IC-BEVS在疫苗研制中被广泛应用。本文就近年来国内外利用IC-BEVS研制疫苗的相关进展做简要综述。 展开更多

关键词 昆虫细胞杆状病毒表达载体系统 疫苗 研制

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日本血吸虫Sj16基因重组杆状病毒的构建和鉴定 被引量：3

18

作者 胡少敏 王海 +2 位作者 阮志燕 余新炳 吴忠道 《热带医学杂志》 CAS 2005年第1期8-11,60,共5页

目的利用杆状病毒-昆虫细胞系统构建日本血吸虫(Schistosomajaponicum,Sj)Sj16基因重组杆状病毒。方法从日本血吸虫尾蚴提取总RNA,通过RT-PCR扩增出Sj16基因全编码区序列,将其克隆到载体pET30a(+)中,通过PCR将Sj16基因连同pET30a(+)多... 目的利用杆状病毒-昆虫细胞系统构建日本血吸虫(Schistosomajaponicum,Sj)Sj16基因重组杆状病毒。方法从日本血吸虫尾蚴提取总RNA,通过RT-PCR扩增出Sj16基因全编码区序列,将其克隆到载体pET30a(+)中,通过PCR将Sj16基因连同pET30a(+)多克隆位点下游的6×His·Tag一起扩增出来,插入donor载体pFastBacHTa中,构建重组杆状病毒donor载体pFastBacHTa-Sj16-His,转化大肠杆菌DH10Bac-GFP进行转座,提取重组Bacmid,用Lipofectin法转染昆虫细胞Sf9使其包装成有感染性的重组杆状病毒。结果构建了含日本血吸虫Sj16基因的重组Bacmid-GFP-Sj16-His,转染Sf9细胞后,获得了有感染力的重组杆状病毒。结论成功构建了日本血吸虫Sj16基因重组杆状病毒,为下一步重组Sj16蛋白表达和Sj16基因功能研究打下了基础。 展开更多

关键词 日本血吸虫 Sj16 杆状病毒 Bac—to-Bac杆状病毒表达载体系统

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人血小板因子Ⅳ在家蚕杆状病毒表达载体系统中的表达 被引量：1

19

作者 于威 金勇丰 +1 位作者 吴玉澄 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 2001年第2期100-103,共4页

将人血小板因子Ⅳ (HumanPlateletFactorⅣ ,简称hPF4)基因重组于家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK8中 ,获得重组转移载体pBacPAK PF4,并与线性化病毒Bm BacPAK6DNA共转染家蚕培养细胞 ,在细胞内发生同源重组 ,获得重组病毒BacPAK PF4。Sout... 将人血小板因子Ⅳ (HumanPlateletFactorⅣ ,简称hPF4)基因重组于家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK8中 ,获得重组转移载体pBacPAK PF4,并与线性化病毒Bm BacPAK6DNA共转染家蚕培养细胞 ,在细胞内发生同源重组 ,获得重组病毒BacPAK PF4。Southern杂交结果表明重组病毒基因组中含有hPF4基因。重组病毒以MOI=10感染家蚕培养细胞 (2× 10 6个细胞 )和家蚕 5龄幼虫 ,表达产物用体外培养的血管内皮细胞测定其生物活性 ,测得表达量在家蚕培养细胞中第 3天达到最高值为 6 0 88μg/ 2× 10 6个细胞 ;在蚕体内表达第 5天达到最高值 。 展开更多

关键词 人血小板因子Ⅳ 家蚕杆状病毒表达载体系统 基因表达 生物活性

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基于昆虫细胞-杆状病毒表达系统的SARS-CoV-2 S1蛋白的高效表达

20

作者 张如悦 高耀荣 +6 位作者 王建超 曹磊 张艳敏 张炜坚 彭雯娟 谭文松 赵亮 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2023年第1期1-5,11,共6页

目的 设计、构建表达新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2) S1蛋白的重组杆状病毒,建立并优化其在昆虫细胞中的生产工艺,为新型冠状病毒肺炎(COVID-19)血清学诊断方法的建立及疫苗开发奠定基础。... 目的 设计、构建表达新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2) S1蛋白的重组杆状病毒,建立并优化其在昆虫细胞中的生产工艺,为新型冠状病毒肺炎(COVID-19)血清学诊断方法的建立及疫苗开发奠定基础。方法 利用分子克隆技术将S1基因插入pFastBac^(TM)1质粒,获得重组质粒pFastBac-S1,经转座获得重组杆粒rbacmid-S1,转染Sf9细胞后包装获得重组杆状病毒rBV-S1,通过rBV-S1感染High Five^(TM)(Hi5)细胞表达S1蛋白,使用Western blot分析鉴定S1蛋白的表达。在此基础上,建立优化rBV-S1扩增和蛋白表达的工艺,以实现S1蛋白的高效表达。结果 通过特异性引物PCR扩增重组质粒pFastBac-S1与重组杆粒rbacmid-S1,获得大小分别为2 367 bp、4 370 bp的基因片段,表明S1基因成功克隆入pFastBac^(TM)1质粒与bacmid;采用Western blot分析细胞培养上清液,在78 ku处有特异性反应条带,证明在昆虫细胞-杆状病毒表达载体系统(Insect cell-baculovirus expression vector system, IC-BEVS)中成功表达有反应原性的S1蛋白。Sf9细胞以1.5×10^(6)cells/mL接种,MOI=0.01接毒,96 hpi可收获最大病毒滴度为(8.40±0.16)lgTCID_(50)/mL;Hi5细胞以0.8×10^(6)cells/mL接种后培养36 h,以MOI=1接毒,48 hpi可获得最大S1蛋白产量为(4.33±0.09) mg/L。结论 利用IC-BEVS成功表达了S1蛋白,并建立了优化的S1蛋白生产工艺,实现了S1蛋白的高效表达,对COVID-19临床诊断方法的建立及疫苗开发具有重要意义。 展开更多

关键词 新型冠状病毒(SARS-CoV-2) 新型冠状病毒肺炎(COVID-19) S1蛋白 昆虫细胞-杆状病毒表达载体系统

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