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鼠疫快速诊断技术及其应用研究 被引量：14
1
作者 于国林 王鹏 +8 位作者 尹家祥 杜春红 石丽媛 郭英 陈平 吴明寿 黄鹏 钟佑宏 董珊珊 《地方病通报》 2006年第3期1-10,94,F0003,共12页
目的寻找和确定引起特异性不足的因素,实施科学的对策加以解决,真正实现鼠疫的快速诊断技术并以此为基础构建新一代的检测技术。方法(1)研制高质量的鼠疫F1抗原的单克隆抗体,考虑到位点问题要求尽可能多的、针对不同位点的高效价瘤株,... 目的寻找和确定引起特异性不足的因素,实施科学的对策加以解决,真正实现鼠疫的快速诊断技术并以此为基础构建新一代的检测技术。方法(1)研制高质量的鼠疫F1抗原的单克隆抗体,考虑到位点问题要求尽可能多的、针对不同位点的高效价瘤株,构建稳定的“抗体源;”(2)利用获得的高效瘤株通过纯系小鼠生产抗体或用无蛋白细胞培基生产抗体;(3)对抗体进行纯化并使其达到“免疫纯水平”并建立提取、纯化工艺,最终建立稳定的低成本的无交叉“抗体源;”(4)纯化抗原至“免疫纯水平”或“电泳纯水平”,建立提取、纯化工艺,最终建立稳定低成本的无交叉“抗原源;”(5)对新一代快速检测技术进行实验室和现场评价,对特异性即实验的准确性做出评价。结果(1)确定了影响鼠疫免疫学诊断技术特别是间接红细胞凝集试验(IHA及R IHA)特异性不足的两大因素:a.技术落后,试验中采用的载体不适导致了相当数量的假性凝集;b.技术方法中使用的抗原、抗体严重不纯,尤其是制备抗体时免疫动物“自身抗体”的掺入是造成交叉反应更重要的因素;(2)研制并开发出分泌抗鼠疫F1单克隆抗体(F1-M cAb)的杂交瘤株164株,并从其中筛选出针对不同位点的高效瘤株6株,经活性鉴定及配对试验形成了4个组合,具高效价和高活性;(3)使用制备电泳技术将鼠疫F1抗原提纯至电泳纯水平;(4)将鼠疫F1-M cAb提纯至免疫纯水平;(5)引进、消化了具有先进水平的胶体金标免疫层析技术;(6)使用电泳纯的鼠疫F1抗原及免疫纯的鼠疫F1-M cAb构建了能自人和动物血液中直接检测鼠疫特异抗体的金标免疫层析技术(G ICA)和能自人和动物脏器或穿剌物中直接检测鼠疫F1抗原或鼠疫病原的反向金标免疫层析技术(RG ICA);(7)由于采用了纯化的抗原、抗体,提高了标记效果,其敏感性超过IHA和R IHA,阳性检出率在排除了假� 展开更多
关键词 鼠疫 鼠疫F1抗原(F1-Ag) 鼠疫F1单克隆抗体(F1-McAb) 杂交瘤株 纯化 电泳纯 免疫纯 胶体金标记免疫层析技术(GICA/RGICA) 敏感性 特异性 交叉反应
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猪胸膜肺炎放线杆菌单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：1
2
作者 华芳 韩文瑜 雷连成 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期996-998,共3页
目的:建立抗血清1型猪胸膜肺炎放线杆菌(APP-1)脂多糖(LPS)的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为今后建立该菌的分型诊断技术奠定基础。方法:腹腔注射APP-1标准株的甲醛固定抗原免疫BALB/c小鼠,ELISA检测血清中LPS抗体滴度并选择值最高的小鼠用... 目的:建立抗血清1型猪胸膜肺炎放线杆菌(APP-1)脂多糖(LPS)的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为今后建立该菌的分型诊断技术奠定基础。方法:腹腔注射APP-1标准株的甲醛固定抗原免疫BALB/c小鼠,ELISA检测血清中LPS抗体滴度并选择值最高的小鼠用于细胞融合,且于融合前3天加强免疫1次。常规方法进行融合,HT、HAT培养液选择培养融合后的细胞,ELISA检测细胞培养上清中的LPS抗体,阳性杂交瘤细胞用有限稀释法克隆传代。结果:获得3株稳定分泌抗APP-1LPS抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,其小鼠腹水单克隆抗体效价1∶16000～1∶32000。结论:已成功建立3株稳定分泌抗APP-1LPS抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,其产生的单克隆抗体与呼吸道其它常见致病菌及APP-3,5,7,9,型无交叉反应。 展开更多
关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌 单克隆抗体 杂交瘤株 脂多糖
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猪胸膜肺炎放线杆菌apx Ⅳ表达蛋白单克隆抗体的制备 被引量：1
3
作者 袁秀芳 徐丽华 +2 位作者 王一成 张存 叶伟成 《浙江农业科学》 2008年第6期771-773,共3页
将APP apx Ⅳ N端基因克隆于pET-28a载体中,转化大肠杆菌,并进行诱导表达。收获融合表达的apx Ⅳ蛋白,按50μg/只的剂量与等量弗氏佐剂乳化后,经腹腔接种BALB/C小鼠,免疫3次后,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,用apxⅣ表达蛋白作... 将APP apx Ⅳ N端基因克隆于pET-28a载体中,转化大肠杆菌,并进行诱导表达。收获融合表达的apx Ⅳ蛋白,按50μg/只的剂量与等量弗氏佐剂乳化后,经腹腔接种BALB/C小鼠,免疫3次后,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,用apxⅣ表达蛋白作为包被抗原,通过间接ELISA方法筛选阳性克隆,获得了3株能稳定分泌抗apx Ⅳ蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为4H3,1D11和4C1。亚型鉴定结果显示,3株单克隆抗体为IgG1型。经Western blot分析证实,3株杂交瘤细胞上清液能与apxⅣ表达蛋白特异反应。本研究获得的融合蛋白单克隆抗体为今后建立该菌的免疫胶体金诊断技术,分析apxⅣ蛋白的抗原表位等提供有益价值。 展开更多
关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌 单克隆抗体 杂交瘤株 apxⅣ
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猪胸膜肺炎放线杆菌单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：1
4
作者 华芳 雷连成 +2 位作者 解殿玉 雷雨 韩文瑜 《吉林畜牧兽医》 2007年第2期5-6,15,共3页
目的:建立抗血清1型猪胸膜肺炎放线杆菌(APP-1)脂多糖(LPS)的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为今后建立该菌的免疫检测技术奠定基础。方法:腹腔注射APP-1标准株的甲醛固定抗原免疫BALB/c小鼠,ELISA检测血清中LPS抗体滴度并选择值最高的小鼠用... 目的:建立抗血清1型猪胸膜肺炎放线杆菌(APP-1)脂多糖(LPS)的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为今后建立该菌的免疫检测技术奠定基础。方法:腹腔注射APP-1标准株的甲醛固定抗原免疫BALB/c小鼠,ELISA检测血清中LPS抗体滴度并选择值最高的小鼠用于细胞融合,且于融合前3天加强免疫1次。常规方法进行融合,HT、HAT培养液选择培养融合后的细胞,ELISA检测细胞培养上清中的LPS抗体,阳性杂交瘤细胞用有限稀释法克隆传代。结果:获得2株稳定分泌抗APP-1LPS抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,其小鼠腹水单克隆抗体效价132000～164000。结论:已成功建立2株稳定分泌抗APP-1LPS抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为今后建立该菌的免疫胶体金分型诊断技术奠定基础。 展开更多
关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌 单克隆抗体 杂交瘤株 脂多糖
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鼠疫F1单克隆抗体杂交瘤株建立过程中几个重要因素的探讨
5
作者 尹家祥 陈平 +3 位作者 杜春红 唐雪 董兴齐 于国林 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2006年第9期1636-1637,共2页
关键词 鼠疫F1单克隆抗体 杂交瘤株
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分泌抗伊氏锥虫单克隆抗体杂交瘤株的建立
6
作者 罗建勋 汪志楷 沈永林 《中国兽医科技》 CSCD 1991年第10期5-6,共2页
本试验以DEAE纤维柱层析法从感染小鼠血液中分离得纯净锥虫,再通过超声乳化,制备锥虫可溶性抗原,用其免疫BALB/c小鼠,再以此BALB/c小鼠脾细胞与SP_2/o骨髓瘤细胞融合,采用Dot-ELISA和间接ELISA法筛选出7株分泌针对伊氏锥虫的单克隆抗体... 本试验以DEAE纤维柱层析法从感染小鼠血液中分离得纯净锥虫,再通过超声乳化,制备锥虫可溶性抗原,用其免疫BALB/c小鼠,再以此BALB/c小鼠脾细胞与SP_2/o骨髓瘤细胞融合,采用Dot-ELISA和间接ELISA法筛选出7株分泌针对伊氏锥虫的单克隆抗体的杂交瘤株(IH_(10)、AE_7、EB_6、BE_5、AG_(11)、BA_5、GB_6),实验结果表明,间接ELISA和Dot-ELISA符合率良好。分泌的7种克隆抗体有5株属于IgG_1,2株属于IgG_(2a);用阴性血清封闭试验及交互抑制试验证实7株单抗都是针对伊氏锥虫的,并证明是针对不同决定簇的。 展开更多
关键词 伊氏锥虫 单克隆抗体 杂交瘤株
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HMG＿（14）单克隆抗体杂交瘤株的建立
7
作者 童苏湘 吴鹤龄 《北京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1994年第6期740-746,共7页
以北京鸭红细胞提取的ＨＭＧｓ（ＨＭＧ＿１，ＨＭＧ＿（２ａ），ＨＭＧ＿（２ｂ），ＨＭＧ＿（１４），ＨＭＧ＿（１７））免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取其脏压细胞与Ｓｐ２／０（小鼠骨髓瘤细胞）融合，经选择培养，阳性筛选，克隆化以及... 以北京鸭红细胞提取的ＨＭＧｓ（ＨＭＧ＿１，ＨＭＧ＿（２ａ），ＨＭＧ＿（２ｂ），ＨＭＧ＿（１４），ＨＭＧ＿（１７））免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取其脏压细胞与Ｓｐ２／０（小鼠骨髓瘤细胞）融合，经选择培养，阳性筛选，克隆化以及冻存复苏，获得了三株稳定分泌抗ＨＭＧ＿（１４）的杂交瘤细胞株（１Ｃ＿（１２），１Ｏ＿３和２Ｆ＿２），经ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ鉴定，与其它几种ＨＭＧ无反应，抗体为ＩｇＧ＿１亚型。腹水ＨＭＧ＿（１４）单克隆抗体经ＳｅｐｈａｄａｘＣＬ－４Ｂ亲和柱得到了纯化。 展开更多
关键词 HMG 单克隆抗体 杂交瘤株 制备 建立
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