木聚糖酶基因xynA在大肠杆菌中的高效表达 被引量：4

1

作者 殷尔康 《现代农业科技》 2011年第12期326-327,共2页

参照Genebank中疏棉状嗜热丝孢菌木聚糖酶A基因序列,以引物拼接方式,人工合成采用大肠杆菌优势密码子的基因xynA,插入pET-20b载体,获得重组表达载体pET-20b-xynA。重组菌在16℃下诱导效果最好,10 h酶活达到42.05 U/mL,重组酶占全细胞蛋... 参照Genebank中疏棉状嗜热丝孢菌木聚糖酶A基因序列,以引物拼接方式,人工合成采用大肠杆菌优势密码子的基因xynA,插入pET-20b载体,获得重组表达载体pET-20b-xynA。重组菌在16℃下诱导效果最好,10 h酶活达到42.05 U/mL,重组酶占全细胞蛋白的47%,粗酶在65℃和pH 5～8条件下很稳定。 展开更多

关键词 木聚糖酶A基因 优势密码子 高效表达

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农杆菌介导的xynB基因转化苜蓿的初步研究 被引量：6

2

作者 苏玉春 陈光 +1 位作者 白晶 韩微微 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2010年第4期113-116,共4页

构建了PBI121-xynB表达载体,利用农杆菌介导法进行紫花苜蓿遗传转化研究,将xynB基因的cDNA序列导入苜蓿。转基因植株生长发育良好,RT—PCR检测xynB基因已经导入到苜蓿中,DNS方法检测转基因植株的木聚糖酶活性为10.5 U/g鲜叶片。

关键词 木聚糖酶xynB基因 紫花苜蓿 转化

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链霉菌Streptomyces olivaceoviridis A1木聚糖酶基因xynA在大肠杆菌及毕赤酵母中的高效表达 被引量：24

3

作者 张红莲 姚斌 +4 位作者 王亚茹 袁铁峥 张王照 伍宁丰 范云六 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期41-45,共5页

从橄榄绿链霉菌StreptomycesolivaceoviridisA1中克隆出木聚糖酶基因xynA ,将带与不带原基因信号肽编码序列的xynA分别以正确的阅读框架克隆到大肠杆菌表达载体pET 2 2b(+)上的pellB信号肽编码序列之后 ,得到 2种构建的重组载体 ,在重... 从橄榄绿链霉菌StreptomycesolivaceoviridisA1中克隆出木聚糖酶基因xynA ,将带与不带原基因信号肽编码序列的xynA分别以正确的阅读框架克隆到大肠杆菌表达载体pET 2 2b(+)上的pellB信号肽编码序列之后 ,得到 2种构建的重组载体 ,在重组大肠杆菌中木聚糖酶得到了表达 ,表达产物具有生物活性。进一步将不带原基因信号肽编码序列的xynA插入到毕赤酵母转移载体pPIC9中 ,转化毕赤酵母得到重组子 ,在重组子中木聚糖酶基因得到了高效分泌表达 ,在摇床培养水平上的表达量达到 2 0 0mg L ,且表达产物具有生物学活性。 展开更多

关键词 链霉素 木聚糖酶基因 xynA 大肠杆菌 毕赤酵母 高效表达

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短小芽孢杆菌木聚糖酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及酶学性质研究 被引量：12

4

作者 江正兵 宋慧婷 马立新 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期50-55,共6页

将短小芽孢杆菌HB0 30的内切 1,4 木聚糖酶基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9k上 ,得到重组质粒pH BM2 2 0 ,将pHBM2 2 0经酶切后分别转化三株毕赤酵母KM71、GS115、SMD116 8,该木聚糖酶基因在三株毕赤酵母中均实现了分泌表达。将重组... 将短小芽孢杆菌HB0 30的内切 1,4 木聚糖酶基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9k上 ,得到重组质粒pH BM2 2 0 ,将pHBM2 2 0经酶切后分别转化三株毕赤酵母KM71、GS115、SMD116 8,该木聚糖酶基因在三株毕赤酵母中均实现了分泌表达。将重组毕赤酵母KM71(pHBM2 2 0 )、GS115 (pHBM2 2 0 )、SMD116 8(pHBM2 2 0 )分别诱导产酶 ,对重组酶进行相关的酶学性质分析表明 ,三者的最适反应pH值约为 5 5 ,最适反应温度约为 6 0℃。在其最适反应条件下测得三者粗酶液酶活分别为 10 80IU mL ,11 6 3IU mL ,9 6 8IU mL。重组毕赤酵母KM71(pHBM2 2 0 )所产酶的热稳定性较好 ,而在pH稳定性方面三者没有太大的差异。 展开更多

关键词 短小芽孢杆菌 木聚糖酶基因 分泌表达 酶学性质 毕赤酵母

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木聚糖酶基因的分子生物学与基因工程 被引量：9

5

作者 方洛云 邹晓庭 许梓荣 《畜禽业》 2002年第2期2-3,共2页

木聚糖是由β-D-1,4木糖苷键连接起来的并带有多种取代基的多聚糖,约占植物干重的20%～30%左右,是一种巨大的生物资源。降解木聚糖的酶主要为木聚糖酶,该酶不仅在降解自然界大量存在的木聚糖起重要作用,同时它还具有潜在应用前景,如在... 木聚糖是由β-D-1,4木糖苷键连接起来的并带有多种取代基的多聚糖,约占植物干重的20%～30%左右,是一种巨大的生物资源。降解木聚糖的酶主要为木聚糖酶,该酶不仅在降解自然界大量存在的木聚糖起重要作用,同时它还具有潜在应用前景,如在饲料工业中可大幅度提高半纤维素类饲料的消化利用率等,因而引起了人们的极大兴趣。本文综述了木聚糖酶的分子生物学及其基因工程研究的最新进展,并展望了其在饲料工业中的研究前景。 展开更多

关键词 木聚糖酶 分子生物学 基因工程 酶学特性 木聚糖酶基因 饲料添加剂

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木聚糖酶基因研究进展 被引量：12

6

作者 张世敏 刘寅 +3 位作者 刘新育 陈红歌 王会娟 崔党群 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期61-67,共7页

半纤维素分解微生物在自然界碳素循环中起着重要作用,半纤维素是植物多糖的重要成分之一。木聚糖则是半纤维素的主要成分。木聚糖酶(EC3.2.1.8)可催化木聚糖的水解,在各种各样的生物体里都发现有木聚糖酶,如细菌、放线菌、真菌。在过去... 半纤维素分解微生物在自然界碳素循环中起着重要作用,半纤维素是植物多糖的重要成分之一。木聚糖则是半纤维素的主要成分。木聚糖酶(EC3.2.1.8)可催化木聚糖的水解,在各种各样的生物体里都发现有木聚糖酶,如细菌、放线菌、真菌。在过去几十年里,有超过100个木聚糖酶基因被克隆进同源或异源宿主中,其目的是为了超表达木聚糖酶和改变它们的特性以适应商业应用。木聚糖酶的应用极其广泛,可用于生物转化、造纸、食品、饲料、能源、纺织等行业。尤其是迫切的环境问题将进一步促进木聚糖酶研究的开展。 展开更多

关键词 木聚糖酶基因 信号肽 进化树 二硫桥

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堆肥未培养细菌的宏基因组文库构建及新的木聚糖酶基因的克隆和鉴定 被引量：7

7

作者 张鹏 段承杰 +6 位作者 庞浩 封毅 靳振江 许跃强 莫新春 唐纪良 冯家勋 《广西科学》 CAS 2005年第4期343-346,352,共5页

从自制堆肥样品中提取未培养细菌的总DNA,用柯斯质粒pW EB∷TNC为载体构建宏基因组文库,对文库进行筛选获得表达木聚糖酶活性的克隆,再进行亚克隆、测序分析以及B lastx搜索G enB ank分析木聚糖酶基因。结果构建得到一个包含约5万个克... 从自制堆肥样品中提取未培养细菌的总DNA,用柯斯质粒pW EB∷TNC为载体构建宏基因组文库,对文库进行筛选获得表达木聚糖酶活性的克隆,再进行亚克隆、测序分析以及B lastx搜索G enB ank分析木聚糖酶基因。结果构建得到一个包含约5万个克隆的宏基因组文库,文库中外源DNA总容量约为1.8×106kb,获得2个表达木聚糖酶活性的克隆:pGXN 1050和pGXN 1051,鉴定分析表明:pGXN 1050上潜在的木聚糖酶基因um xyn 11A具1个771bp的ORF(Open R ead ing F ram e),可编码含257个氨基酸的蛋白质,所编码产物与混合纤维弧菌(C ellv ibr io m ix tus)的内切-1,4-β-木聚糖酶(G enB ank索引号Z48925.1)的氨基酸序列有46%的一致性和57%的相似性;pGXN 1051上潜在的木聚糖酶基因um xyn 11B具一个723bp的ORF,可编码含241个氨基酸的蛋白质,编码产物与混合纤维弧菌的内切-1,4-β-木聚糖酶(G enB ank索引号Z48925.1)的氨基酸序列有73%的一致性和80%的相似性。木聚糖酶Um xyn11A和Um xyn11B都属于糖基水解酶家族11的成员。 展开更多

关键词 细菌 宏基因组文库 木聚糖酶基因

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木聚糖酶的研究进展 被引量：7

8

作者 范美霞 孙迅 陶宗娅 《菏泽学院学报》 2009年第2期99-103,共5页

木聚糖是半纤维素的一种重要组成成分，广泛存在于各种植物资源中；木聚糖酶是降解木聚糖为木寡糖和木糖的水解酶．产木聚糖酶微生物主要有细菌、放线菌，真菌等．木聚糖酶相对分子质量一般在8～145ku，具有双功能性和多样性．木聚糖酶... 木聚糖是半纤维素的一种重要组成成分，广泛存在于各种植物资源中；木聚糖酶是降解木聚糖为木寡糖和木糖的水解酶．产木聚糖酶微生物主要有细菌、放线菌，真菌等．木聚糖酶相对分子质量一般在8～145ku，具有双功能性和多样性．木聚糖酶的功能结构域主要有催化结构域和纤维素结合结构域，其酶活受金属离子、糖苷键等的影响．目前，已有上百种木聚糖酶基因被克隆表达．木聚糖酶的应用极其广泛，可用于造纸、饲料、食品、医药等行业． 展开更多

关键词 木聚糖酶 生化 木聚糖酶基因克隆 应用

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BACILLUSSP.BT7木聚糖酶基因的克隆与鉴定 被引量：4

9

作者 汤海妹 曾凡亚 张义正 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 1999年第1期60-63,共4页

报道了从一株有较高半纤维素酶活性的Ｂａｃｉｌｕｓｓｐ．ＢＴ７克隆内切木聚糖酶基因的结果．以大肠杆菌ＸＬ１ｂｌｕｅ为宿主菌，采用水解圈检测法，在含有ＲＢＢ木聚糖（４氧甲基Ｄ葡萄糖苷Ｄ木聚糖Ｒｅｍａｚｏ... 报道了从一株有较高半纤维素酶活性的Ｂａｃｉｌｕｓｓｐ．ＢＴ７克隆内切木聚糖酶基因的结果．以大肠杆菌ＸＬ１ｂｌｕｅ为宿主菌，采用水解圈检测法，在含有ＲＢＢ木聚糖（４氧甲基Ｄ葡萄糖苷Ｄ木聚糖Ｒｅｍａｚｏｌ亮蓝Ｒ）的平板上分离到能水解ＲＢＢ木聚糖的阳性克隆３个，对它们进行的限制酶作图和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析表明。 展开更多

关键词 内切木聚糖酶基因 基因克隆 芽胞杆菌 大肠杆菌

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欧文氏杆菌CXJZ11-01基因组文库的构建 被引量：5

10

作者 石君 刘正初 +4 位作者 成莉凤 段盛文 郑科 冯湘沅 胡镇修 《湖北农业科学》 北大核心 2008年第6期619-621,共3页

采用改良鸟枪法构建了草本纤维精制高效菌种CXJZ11-01的基因组文库,通过透明圈法筛选到了2个木聚糖酶基因阳性克隆。

关键词 欧文氏杆菌CXJZ11-01 基因组文库 木聚糖酶基因

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宇佐美曲霉木聚糖酶基因xynⅡ在不同毕赤酵母中的分泌表达 被引量：5

11

作者 周晨妍 邬敏辰 +2 位作者 李东峰 王瑾 王武 《生物加工过程》 CAS CSCD 2008年第2期38-42,共5页

将宇佐美曲霉E001的内切-1,4-木聚糖酶基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,得到重组质粒pPXY-NII,将其经SalⅠ线性化后分别转化2株毕赤酵母GS115和KM71,xynⅡ基因通过同源重组被整合到毕赤酵母染色体上,并处于酵母α因子的下游,经筛选... 将宇佐美曲霉E001的内切-1,4-木聚糖酶基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,得到重组质粒pPXY-NII,将其经SalⅠ线性化后分别转化2株毕赤酵母GS115和KM71,xynⅡ基因通过同源重组被整合到毕赤酵母染色体上,并处于酵母α因子的下游,经筛选获得阳性重组菌PXGL98(Mut+)和PXKL29(Muts)。该木聚糖酶基因在2株毕赤酵母中均实现了分泌表达。同时对工程菌的发酵条件进行了优化,在甲醇诱导下,PXGL98与PXKL29培养物上清液中的酶活力分别可达1156.92 U/mL和1646.03 U/mL。 展开更多

关键词 宇佐美曲霉 内切-1 4-木聚糖酶基因 毕赤酵母 分泌表达

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As(Ⅲ)胁迫对小麦发芽过程中木聚糖酶活性及基因表达动态变化的影响 被引量：2

12

作者 李丹丹 李春喜 +4 位作者 邵云 冯淑利 张黛静 张蓓蓓 姜丽娜 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期1873-1878,共6页

采用室内水培方法,研究了不同浓度As(Ⅲ)胁迫对小麦发芽过程中籽粒、幼根、幼叶3个部位在培养180h内木聚糖酶活性的动态变化。并以小麦稳定表达的肌动蛋白基因作为对照,利用半定量RT-PCR技术,对小麦木聚糖酶基因的表达进行了研究。结果... 采用室内水培方法,研究了不同浓度As(Ⅲ)胁迫对小麦发芽过程中籽粒、幼根、幼叶3个部位在培养180h内木聚糖酶活性的动态变化。并以小麦稳定表达的肌动蛋白基因作为对照,利用半定量RT-PCR技术,对小麦木聚糖酶基因的表达进行了研究。结果表明,小麦发芽过程中3个部位木聚糖酶活性平均值大小顺序为籽粒>幼芽>幼根。随着As(Ⅲ)浓度升高,籽粒中木聚糖酶活性呈现低促高抑的趋势,幼根和幼叶中木聚糖酶活性呈上升趋势。4个浓度As(Ⅲ)处理后木聚糖酶基因表达强度依次为25mg/L>5mg/L>0mg/L>0.1mg/L。 展开更多

关键词 As(Ⅲ)胁迫 小麦 木聚糖酶 木聚糖酶基因 肌动蛋白基因 半定量RT—PCR

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多粘类芽孢杆菌SC2 xynD和gluB的克隆及序列分析 被引量：4

13

作者 朱辉 丁延芹 +2 位作者 田方 姜远茂 杜秉海 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第4期171-174,184,共5页

β-1,4-木聚糖酶和β-1,3-1,4-葡聚糖酶活性检测结果表明,多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)SC2能同时产生β-1,4-木聚糖酶和β-1,3-1,4-葡聚糖酶。以菌株SC2的基因组DNA为模板,通过TAIL-PCR方法克隆到4 807bp的DNA片段。DNAMAN... β-1,4-木聚糖酶和β-1,3-1,4-葡聚糖酶活性检测结果表明,多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)SC2能同时产生β-1,4-木聚糖酶和β-1,3-1,4-葡聚糖酶。以菌株SC2的基因组DNA为模板,通过TAIL-PCR方法克隆到4 807bp的DNA片段。DNAMAN软件分析,该DNA片段包含2个开放阅读框(ORF),ORF1长度为1 908 bp,编码含635个氨基酸、分子量为67.8kD的蛋白;ORF2长度为714 bp,编码含237个氨基酸、分子量为26.8kD的蛋白。BLAST分析结果表明,ORF1与已报道的P.polymyxa ATCC 842的xynD基因相似性为94%,ORF2与P.polymyxaWY110的gluB基因相似性为99%。基因序列的系统发育分析进一步说明,ORF1和ORF2分别为β-1,4-木聚糖酶基因xynD和β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因gluB。 展开更多

关键词 多粘类芽孢杆菌 β-1 4-木聚糖酶基因 β-1 3-1 4-葡聚糖酶基因 克隆 序列分析

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木聚糖酶基因的体外定向进化 被引量：3

14

作者 杜文 王谦 +1 位作者 王佳堃 刘建新 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期2202-2211,共10页

木聚糖酶在天然材料中基因表达水平低、活性差、生产成本高,严重限制了它的推广应用。宏基因组学通过免培养技术,研究生境中全部微小生物遗传物质的总和,在开发微生物酶资源上具有强劲的优势。体外定向进化技术模拟达尔文的自然进化论,... 木聚糖酶在天然材料中基因表达水平低、活性差、生产成本高,严重限制了它的推广应用。宏基因组学通过免培养技术,研究生境中全部微小生物遗传物质的总和,在开发微生物酶资源上具有强劲的优势。体外定向进化技术模拟达尔文的自然进化论,利用基因的突变和重组,从体外改造酶基因,产生基因多样性,并结合定向的筛选最终获得预期性状的进化酶。宏基因组技术与体外定向进化技术结合必将加速木聚糖酶的开发和产业化应用,推动半纤维类生物能源的利用。为此,本文就木聚糖酶基因的来源、宏基因组学在木聚糖酶基因开发中的应用、体外定向进化进行了系统的综述。 展开更多

关键词 木聚糖酶基因 宏基因组学 体外定向进化

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枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体的构建及木聚糖酶基因的表达 被引量：3

15

作者 段春燕 龚月生 +4 位作者 范鑫 杨明明 张云雁 周煌凯 王新国 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期8-13,共6页

构建枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体并用菌体自身信号肽引导表达外源木聚糖酶基因,为枯草芽孢杆菌木聚糖酶高效分泌表达系统的建立奠定基础。利用基因工程的原理和方法,将壮观霉素抗性基因(spec)与短小芽孢杆菌的木聚糖酶基因(xynA)克隆到... 构建枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体并用菌体自身信号肽引导表达外源木聚糖酶基因,为枯草芽孢杆菌木聚糖酶高效分泌表达系统的建立奠定基础。利用基因工程的原理和方法,将壮观霉素抗性基因(spec)与短小芽孢杆菌的木聚糖酶基因(xynA)克隆到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭表达载体GJ148上,构建枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体pYG,将枯草芽孢杆菌信号肽Epr克隆到已构建载体上,以枯草芽孢杆菌WB700为表达宿主,引导木聚糖酶基因进行表达。最终成功构建枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体pYG,将枯草芽孢杆菌信号肽Epr克隆到pYG上,在WB700中引导并表达木聚糖酶基因。试验证明信号肽筛选载体可以成功构建,在克隆入信号肽后可成功表达木聚糖酶基因,为信号肽的系统性筛选和木聚糖酶高效表达提供依据。 展开更多

关键词 木聚糖酶基因 信号肽 枯草芽孢杆菌

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来源于角毛壳菌的木聚糖酶xyn24基因克隆及特性 被引量：3

16

作者 王艳君 杨谦 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期105-107,120,共4页

利用Blastx将角毛壳菌(Chaetomium cupreum)ESTs与GenBank的Nr数据库进行相似性比对,获得1条编码木聚糖酶基因的全长cDNA序列的EST(GenBank Accn:DV547992),依据该序列设计并合成引物,以角毛壳菌基因组为模板进行PCR扩增,获得角毛壳菌xy... 利用Blastx将角毛壳菌(Chaetomium cupreum)ESTs与GenBank的Nr数据库进行相似性比对,获得1条编码木聚糖酶基因的全长cDNA序列的EST(GenBank Accn:DV547992),依据该序列设计并合成引物,以角毛壳菌基因组为模板进行PCR扩增,获得角毛壳菌xyn24的全长DNA序列,该DNA序列全长875 bp,由1个内含子和2个外显子组成;cDNA序列全长690 bp,编码229个氨基酸,蛋白质的相对分子质量为24700,理论等电点为7.83。经BlastP分析,xyn24基因的氨基酸序列的保守性不高,与嗜热革节孢菌(Scytalidium thermophilum AB114442)中的木聚糖酶基因的同源性最高,为78%,故推测该基因可能是1条新发现的木聚糖酶家族基因,该序列已收录于GenBank,登录号为:DQ886937,EF026978。 展开更多

关键词 角毛壳菌 木聚糖酶基因 生物信息学

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乳糖诱导极耐高温木聚糖酶基因B在大肠杆菌中的表达 被引量：2

17

作者 朱运平 江正强 李里特 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期37-41,共5页

以融合极耐高温木聚糖酶基因B(XynB)的大肠杆菌(E coli)BL2 1(DE3)为研究对象,研究了以IPTG和乳糖作为诱导剂时重组目的产物的诱导表达规律。在摇瓶发酵条件下研究了诱导剂浓度、诱导时机、诱导培养时间、诱导培养温度及初始pH对目标蛋... 以融合极耐高温木聚糖酶基因B(XynB)的大肠杆菌(E coli)BL2 1(DE3)为研究对象,研究了以IPTG和乳糖作为诱导剂时重组目的产物的诱导表达规律。在摇瓶发酵条件下研究了诱导剂浓度、诱导时机、诱导培养时间、诱导培养温度及初始pH对目标蛋白表达的影响。实验结果表明,IPTG诱导时酶活力达到16 18U/ 10 0mL。乳糖诱导的最优发酵条件为:初始培养基pH 7 0 ,当OD60 0 为2 5时加入0 5 %的乳糖,在37℃条件下诱导培养10h ,收获时OD60 0 达3 5 5 ,酶活力为2 5 91U/ 10 0mL。 展开更多

关键词 木聚糖酶基因 大肠杆菌 耐高温 乳糖 IPTG 发酵条件 表达规律 培养时间 蛋白表达 培养温度 诱导培养 诱导剂 酶活力 培养基

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Bacillus halodurans菌株xynM基因的克隆、表达和序列分析(英文) 被引量：1

18

作者 易霞 孙磊 +2 位作者 陶海燕 古丽巴哈尔.沙吾提 艾尔肯.热合曼 《生物技术》 CAS CSCD 2007年第3期11-15,共5页

目的:用2株新分离鉴定的细菌克隆与最近源种(Bacillus halodurans C-125)木聚糖酶基因的同源序列,并对其进行序列分析。方法:根据已发表的近源种(C-125)的保守区序列设计引物,扩增出与其同源的木聚糖酶基因,进而用pQE31载体对该基因进... 目的:用2株新分离鉴定的细菌克隆与最近源种(Bacillus halodurans C-125)木聚糖酶基因的同源序列,并对其进行序列分析。方法:根据已发表的近源种(C-125)的保守区序列设计引物,扩增出与其同源的木聚糖酶基因,进而用pQE31载体对该基因进行表达。同时对表达蛋白的三维空间结构进行网络模拟分析,对蛋白同源性进行比对分析。结果:克隆的木聚糖酶基因片段分别为1284bp和1236bp,而且该基因也成功表达;该蛋白是(α/α)6折叠构象,与C-125三者同属于一个分支上。结论:通过分析、表达蛋白编码外切-1,4-β-木聚糖酶,属于M家族。这该新分离菌株木聚糖酶的研究和应用提供了重要线索。 展开更多

关键词 B.halodurans XJU-1 B.halodurans XJU-80 克隆 表达 木聚糖酶基因序列

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瘤胃枯草芽胞杆菌的分离鉴定及其木聚糖酶基因的克隆和在乳酸球菌中表达的研究 被引量：2

19

作者 苏少锋 呼和 +2 位作者 王超 刘红葵 王蕴华 《畜牧与饲料科学》 2013年第9期5-9,13,共6页

通过形态学和16S rDNA序列分析方法,从绵羊瘤胃内容物中分离得到的细菌中鉴定出枯草芽胞杆菌。根据GenBank中已知Bacillus subtilis木聚糖酶基因序列设计带有酶切位点的引物,克隆到2条不同的木聚糖基因序列。通过酶切和连接等相关分子... 通过形态学和16S rDNA序列分析方法,从绵羊瘤胃内容物中分离得到的细菌中鉴定出枯草芽胞杆菌。根据GenBank中已知Bacillus subtilis木聚糖酶基因序列设计带有酶切位点的引物,克隆到2条不同的木聚糖基因序列。通过酶切和连接等相关分子方法成功构建出以pMG36e为载体的表达木聚糖酶的重组质粒,转化到乳酸球菌粒MG1363后,均能高效表达,酶活性分别为28.29 U/mL和7.11 U/mL,比原枯草芽胞杆菌酶活2.17 U/mL高出13.04倍和3.28倍。 展开更多

关键词 瘤胃微生物 枯草芽胞杆菌 木聚糖酶基因 基因表达

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不同日粮类型对绵羊瘤胃微生物木聚糖酶基因多样性的影响 被引量：2

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作者 李晓 杨玉霞 +2 位作者 汪艳 陈勇 武运 《新疆农业大学学报》 CAS 2014年第3期173-180,共8页

选取安装有永久性瘤胃瘘管的中国美利奴绵羊4只,先后饲喂全粗料日粮和精料型日粮(精粗比3∶2),提取微生物宏基因组DNA。通过PCR产物克隆文库构建、DNA测序和序列分析以研究在不同日粮条件下,绵羊瘤胃微生物糖苷水解酶第10家族(GH10)和... 选取安装有永久性瘤胃瘘管的中国美利奴绵羊4只,先后饲喂全粗料日粮和精料型日粮(精粗比3∶2),提取微生物宏基因组DNA。通过PCR产物克隆文库构建、DNA测序和序列分析以研究在不同日粮条件下,绵羊瘤胃微生物糖苷水解酶第10家族(GH10)和第11家族(GH11)木聚糖酶基因的多样性。结果表明,全粗料日粮时分别获得108和137条GH10和GH11家族木聚糖酶基因片段,精料型时分别获得145和235条GH10和GH11家族木聚糖酶基因片段,这些序列分别归属于19、20、53和26个操作分类单元(OUT)。DNA序列分析表明,GH10家族木聚糖酶基因片段与梭菌和拟杆菌来源的木聚糖酶基因有较高的相似性,GH11家族木聚糖酶基因片段与放线菌、麦角真菌来源的木聚糖酶基因有较高的相似性。饲喂全粗料日粮时,有57.9%的GH10家族序列与已知木聚糖酶基因的相似性小于90%;饲喂精料型日粮时,有65.4%的GH11家族序列与已知木聚糖酶基因的相似性小于90%。由此可见,绵羊瘤胃微生物GH10和GH11家族木聚糖酶基因序列具有丰富的多样性,并且大部分为新发现的序列。饲喂全粗料日粮时,更有利于发现瘤胃微生物GH10家族木聚糖酶新序列;饲喂精料型日粮时,更有利于发现GH11家族木聚糖酶新序列。 展开更多

关键词 绵羊 瘤胃微生物 木聚糖酶基因 多样性

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