链霉菌Streptomyces olivaceoviridis A1木聚糖酶基因xynA在大肠杆菌及毕赤酵母中的高效表达 被引量：24

1

作者 张红莲 姚斌 +4 位作者 王亚茹 袁铁峥 张王照 伍宁丰 范云六 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期41-45,共5页

从橄榄绿链霉菌StreptomycesolivaceoviridisA1中克隆出木聚糖酶基因xynA ,将带与不带原基因信号肽编码序列的xynA分别以正确的阅读框架克隆到大肠杆菌表达载体pET 2 2b(+)上的pellB信号肽编码序列之后 ,得到 2种构建的重组载体 ,在重... 从橄榄绿链霉菌StreptomycesolivaceoviridisA1中克隆出木聚糖酶基因xynA ,将带与不带原基因信号肽编码序列的xynA分别以正确的阅读框架克隆到大肠杆菌表达载体pET 2 2b(+)上的pellB信号肽编码序列之后 ,得到 2种构建的重组载体 ,在重组大肠杆菌中木聚糖酶得到了表达 ,表达产物具有生物活性。进一步将不带原基因信号肽编码序列的xynA插入到毕赤酵母转移载体pPIC9中 ,转化毕赤酵母得到重组子 ,在重组子中木聚糖酶基因得到了高效分泌表达 ,在摇床培养水平上的表达量达到 2 0 0mg L ,且表达产物具有生物学活性。 展开更多

关键词 链霉素 木聚糖酶基因 xynA 大肠杆菌 毕赤酵母 高效表达

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短小芽孢杆菌木聚糖酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及酶学性质研究 被引量：12

2

作者 江正兵 宋慧婷 马立新 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期50-55,共6页

将短小芽孢杆菌HB0 30的内切 1,4 木聚糖酶基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9k上 ,得到重组质粒pH BM2 2 0 ,将pHBM2 2 0经酶切后分别转化三株毕赤酵母KM71、GS115、SMD116 8,该木聚糖酶基因在三株毕赤酵母中均实现了分泌表达。将重组... 将短小芽孢杆菌HB0 30的内切 1,4 木聚糖酶基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9k上 ,得到重组质粒pH BM2 2 0 ,将pHBM2 2 0经酶切后分别转化三株毕赤酵母KM71、GS115、SMD116 8,该木聚糖酶基因在三株毕赤酵母中均实现了分泌表达。将重组毕赤酵母KM71(pHBM2 2 0 )、GS115 (pHBM2 2 0 )、SMD116 8(pHBM2 2 0 )分别诱导产酶 ,对重组酶进行相关的酶学性质分析表明 ,三者的最适反应pH值约为 5 5 ,最适反应温度约为 6 0℃。在其最适反应条件下测得三者粗酶液酶活分别为 10 80IU mL ,11 6 3IU mL ,9 6 8IU mL。重组毕赤酵母KM71(pHBM2 2 0 )所产酶的热稳定性较好 ,而在pH稳定性方面三者没有太大的差异。 展开更多

关键词 短小芽孢杆菌 木聚糖酶基因 分泌表达 酶学性质 毕赤酵母

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木聚糖酶基因的分子生物学与基因工程 被引量：9

3

作者 方洛云 邹晓庭 许梓荣 《畜禽业》 2002年第2期2-3,共2页

木聚糖是由β-D-1,4木糖苷键连接起来的并带有多种取代基的多聚糖,约占植物干重的20%～30%左右,是一种巨大的生物资源。降解木聚糖的酶主要为木聚糖酶,该酶不仅在降解自然界大量存在的木聚糖起重要作用,同时它还具有潜在应用前景,如在... 木聚糖是由β-D-1,4木糖苷键连接起来的并带有多种取代基的多聚糖,约占植物干重的20%～30%左右,是一种巨大的生物资源。降解木聚糖的酶主要为木聚糖酶,该酶不仅在降解自然界大量存在的木聚糖起重要作用,同时它还具有潜在应用前景,如在饲料工业中可大幅度提高半纤维素类饲料的消化利用率等,因而引起了人们的极大兴趣。本文综述了木聚糖酶的分子生物学及其基因工程研究的最新进展,并展望了其在饲料工业中的研究前景。 展开更多

关键词 木聚糖酶 分子生物学 基因工程 酶学特性 木聚糖酶基因 饲料添加剂

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木聚糖酶基因研究进展 被引量：12

4

作者 张世敏 刘寅 +3 位作者 刘新育 陈红歌 王会娟 崔党群 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期61-67,共7页

半纤维素分解微生物在自然界碳素循环中起着重要作用,半纤维素是植物多糖的重要成分之一。木聚糖则是半纤维素的主要成分。木聚糖酶(EC3.2.1.8)可催化木聚糖的水解,在各种各样的生物体里都发现有木聚糖酶,如细菌、放线菌、真菌。在过去... 半纤维素分解微生物在自然界碳素循环中起着重要作用,半纤维素是植物多糖的重要成分之一。木聚糖则是半纤维素的主要成分。木聚糖酶(EC3.2.1.8)可催化木聚糖的水解,在各种各样的生物体里都发现有木聚糖酶,如细菌、放线菌、真菌。在过去几十年里,有超过100个木聚糖酶基因被克隆进同源或异源宿主中,其目的是为了超表达木聚糖酶和改变它们的特性以适应商业应用。木聚糖酶的应用极其广泛,可用于生物转化、造纸、食品、饲料、能源、纺织等行业。尤其是迫切的环境问题将进一步促进木聚糖酶研究的开展。 展开更多

关键词 木聚糖酶基因 信号肽 进化树 二硫桥

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堆肥未培养细菌的宏基因组文库构建及新的木聚糖酶基因的克隆和鉴定 被引量：7

5

作者 张鹏 段承杰 +6 位作者 庞浩 封毅 靳振江 许跃强 莫新春 唐纪良 冯家勋 《广西科学》 CAS 2005年第4期343-346,352,共5页

从自制堆肥样品中提取未培养细菌的总DNA,用柯斯质粒pW EB∷TNC为载体构建宏基因组文库,对文库进行筛选获得表达木聚糖酶活性的克隆,再进行亚克隆、测序分析以及B lastx搜索G enB ank分析木聚糖酶基因。结果构建得到一个包含约5万个克... 从自制堆肥样品中提取未培养细菌的总DNA,用柯斯质粒pW EB∷TNC为载体构建宏基因组文库,对文库进行筛选获得表达木聚糖酶活性的克隆,再进行亚克隆、测序分析以及B lastx搜索G enB ank分析木聚糖酶基因。结果构建得到一个包含约5万个克隆的宏基因组文库,文库中外源DNA总容量约为1.8×106kb,获得2个表达木聚糖酶活性的克隆:pGXN 1050和pGXN 1051,鉴定分析表明:pGXN 1050上潜在的木聚糖酶基因um xyn 11A具1个771bp的ORF(Open R ead ing F ram e),可编码含257个氨基酸的蛋白质,所编码产物与混合纤维弧菌(C ellv ibr io m ix tus)的内切-1,4-β-木聚糖酶(G enB ank索引号Z48925.1)的氨基酸序列有46%的一致性和57%的相似性;pGXN 1051上潜在的木聚糖酶基因um xyn 11B具一个723bp的ORF,可编码含241个氨基酸的蛋白质,编码产物与混合纤维弧菌的内切-1,4-β-木聚糖酶(G enB ank索引号Z48925.1)的氨基酸序列有73%的一致性和80%的相似性。木聚糖酶Um xyn11A和Um xyn11B都属于糖基水解酶家族11的成员。 展开更多

关键词 细菌 宏基因组文库 木聚糖酶基因

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欧文氏杆菌CXJZ11-01基因组文库的构建 被引量：5

6

作者 石君 刘正初 +4 位作者 成莉凤 段盛文 郑科 冯湘沅 胡镇修 《湖北农业科学》 北大核心 2008年第6期619-621,共3页

采用改良鸟枪法构建了草本纤维精制高效菌种CXJZ11-01的基因组文库,通过透明圈法筛选到了2个木聚糖酶基因阳性克隆。

关键词 欧文氏杆菌CXJZ11-01 基因组文库 木聚糖酶基因

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As(Ⅲ)胁迫对小麦发芽过程中木聚糖酶活性及基因表达动态变化的影响 被引量：2

7

作者 李丹丹 李春喜 +4 位作者 邵云 冯淑利 张黛静 张蓓蓓 姜丽娜 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期1873-1878,共6页

采用室内水培方法,研究了不同浓度As(Ⅲ)胁迫对小麦发芽过程中籽粒、幼根、幼叶3个部位在培养180h内木聚糖酶活性的动态变化。并以小麦稳定表达的肌动蛋白基因作为对照,利用半定量RT-PCR技术,对小麦木聚糖酶基因的表达进行了研究。结果... 采用室内水培方法,研究了不同浓度As(Ⅲ)胁迫对小麦发芽过程中籽粒、幼根、幼叶3个部位在培养180h内木聚糖酶活性的动态变化。并以小麦稳定表达的肌动蛋白基因作为对照,利用半定量RT-PCR技术,对小麦木聚糖酶基因的表达进行了研究。结果表明,小麦发芽过程中3个部位木聚糖酶活性平均值大小顺序为籽粒>幼芽>幼根。随着As(Ⅲ)浓度升高,籽粒中木聚糖酶活性呈现低促高抑的趋势,幼根和幼叶中木聚糖酶活性呈上升趋势。4个浓度As(Ⅲ)处理后木聚糖酶基因表达强度依次为25mg/L>5mg/L>0mg/L>0.1mg/L。 展开更多

关键词 As(Ⅲ)胁迫 小麦 木聚糖酶 木聚糖酶基因 肌动蛋白基因 半定量RT—PCR

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木聚糖酶基因的体外定向进化 被引量：3

8

作者 杜文 王谦 +1 位作者 王佳堃 刘建新 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期2202-2211,共10页

木聚糖酶在天然材料中基因表达水平低、活性差、生产成本高,严重限制了它的推广应用。宏基因组学通过免培养技术,研究生境中全部微小生物遗传物质的总和,在开发微生物酶资源上具有强劲的优势。体外定向进化技术模拟达尔文的自然进化论,... 木聚糖酶在天然材料中基因表达水平低、活性差、生产成本高,严重限制了它的推广应用。宏基因组学通过免培养技术,研究生境中全部微小生物遗传物质的总和,在开发微生物酶资源上具有强劲的优势。体外定向进化技术模拟达尔文的自然进化论,利用基因的突变和重组,从体外改造酶基因,产生基因多样性,并结合定向的筛选最终获得预期性状的进化酶。宏基因组技术与体外定向进化技术结合必将加速木聚糖酶的开发和产业化应用,推动半纤维类生物能源的利用。为此,本文就木聚糖酶基因的来源、宏基因组学在木聚糖酶基因开发中的应用、体外定向进化进行了系统的综述。 展开更多

关键词 木聚糖酶基因 宏基因组学 体外定向进化

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来源于角毛壳菌的木聚糖酶xyn24基因克隆及特性 被引量：3

9

作者 王艳君 杨谦 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期105-107,120,共4页

利用Blastx将角毛壳菌(Chaetomium cupreum)ESTs与GenBank的Nr数据库进行相似性比对,获得1条编码木聚糖酶基因的全长cDNA序列的EST(GenBank Accn:DV547992),依据该序列设计并合成引物,以角毛壳菌基因组为模板进行PCR扩增,获得角毛壳菌xy... 利用Blastx将角毛壳菌(Chaetomium cupreum)ESTs与GenBank的Nr数据库进行相似性比对,获得1条编码木聚糖酶基因的全长cDNA序列的EST(GenBank Accn:DV547992),依据该序列设计并合成引物,以角毛壳菌基因组为模板进行PCR扩增,获得角毛壳菌xyn24的全长DNA序列,该DNA序列全长875 bp,由1个内含子和2个外显子组成;cDNA序列全长690 bp,编码229个氨基酸,蛋白质的相对分子质量为24700,理论等电点为7.83。经BlastP分析,xyn24基因的氨基酸序列的保守性不高,与嗜热革节孢菌(Scytalidium thermophilum AB114442)中的木聚糖酶基因的同源性最高,为78%,故推测该基因可能是1条新发现的木聚糖酶家族基因,该序列已收录于GenBank,登录号为:DQ886937,EF026978。 展开更多

关键词 角毛壳菌 木聚糖酶基因 生物信息学

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枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体的构建及木聚糖酶基因的表达 被引量：3

10

作者 段春燕 龚月生 +4 位作者 范鑫 杨明明 张云雁 周煌凯 王新国 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期8-13,共6页

构建枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体并用菌体自身信号肽引导表达外源木聚糖酶基因,为枯草芽孢杆菌木聚糖酶高效分泌表达系统的建立奠定基础。利用基因工程的原理和方法,将壮观霉素抗性基因(spec)与短小芽孢杆菌的木聚糖酶基因(xynA)克隆到... 构建枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体并用菌体自身信号肽引导表达外源木聚糖酶基因,为枯草芽孢杆菌木聚糖酶高效分泌表达系统的建立奠定基础。利用基因工程的原理和方法,将壮观霉素抗性基因(spec)与短小芽孢杆菌的木聚糖酶基因(xynA)克隆到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭表达载体GJ148上,构建枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体pYG,将枯草芽孢杆菌信号肽Epr克隆到已构建载体上,以枯草芽孢杆菌WB700为表达宿主,引导木聚糖酶基因进行表达。最终成功构建枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体pYG,将枯草芽孢杆菌信号肽Epr克隆到pYG上,在WB700中引导并表达木聚糖酶基因。试验证明信号肽筛选载体可以成功构建,在克隆入信号肽后可成功表达木聚糖酶基因,为信号肽的系统性筛选和木聚糖酶高效表达提供依据。 展开更多

关键词 木聚糖酶基因 信号肽 枯草芽孢杆菌

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乳糖诱导极耐高温木聚糖酶基因B在大肠杆菌中的表达 被引量：2

11

作者 朱运平 江正强 李里特 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期37-41,共5页

以融合极耐高温木聚糖酶基因B(XynB)的大肠杆菌(E coli)BL2 1(DE3)为研究对象,研究了以IPTG和乳糖作为诱导剂时重组目的产物的诱导表达规律。在摇瓶发酵条件下研究了诱导剂浓度、诱导时机、诱导培养时间、诱导培养温度及初始pH对目标蛋... 以融合极耐高温木聚糖酶基因B(XynB)的大肠杆菌(E coli)BL2 1(DE3)为研究对象,研究了以IPTG和乳糖作为诱导剂时重组目的产物的诱导表达规律。在摇瓶发酵条件下研究了诱导剂浓度、诱导时机、诱导培养时间、诱导培养温度及初始pH对目标蛋白表达的影响。实验结果表明,IPTG诱导时酶活力达到16 18U/ 10 0mL。乳糖诱导的最优发酵条件为:初始培养基pH 7 0 ,当OD60 0 为2 5时加入0 5 %的乳糖,在37℃条件下诱导培养10h ,收获时OD60 0 达3 5 5 ,酶活力为2 5 91U/ 10 0mL。 展开更多

关键词 木聚糖酶基因 大肠杆菌 耐高温 乳糖 IPTG 发酵条件 表达规律 培养时间 蛋白表达 培养温度 诱导培养 诱导剂 酶活力 培养基

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瘤胃枯草芽胞杆菌的分离鉴定及其木聚糖酶基因的克隆和在乳酸球菌中表达的研究 被引量：2

12

作者 苏少锋 呼和 +2 位作者 王超 刘红葵 王蕴华 《畜牧与饲料科学》 2013年第9期5-9,13,共6页

通过形态学和16S rDNA序列分析方法,从绵羊瘤胃内容物中分离得到的细菌中鉴定出枯草芽胞杆菌。根据GenBank中已知Bacillus subtilis木聚糖酶基因序列设计带有酶切位点的引物,克隆到2条不同的木聚糖基因序列。通过酶切和连接等相关分子... 通过形态学和16S rDNA序列分析方法,从绵羊瘤胃内容物中分离得到的细菌中鉴定出枯草芽胞杆菌。根据GenBank中已知Bacillus subtilis木聚糖酶基因序列设计带有酶切位点的引物,克隆到2条不同的木聚糖基因序列。通过酶切和连接等相关分子方法成功构建出以pMG36e为载体的表达木聚糖酶的重组质粒,转化到乳酸球菌粒MG1363后,均能高效表达,酶活性分别为28.29 U/mL和7.11 U/mL,比原枯草芽胞杆菌酶活2.17 U/mL高出13.04倍和3.28倍。 展开更多

关键词 瘤胃微生物 枯草芽胞杆菌 木聚糖酶基因 基因表达

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不同日粮类型对绵羊瘤胃微生物木聚糖酶基因多样性的影响 被引量：2

13

作者 李晓 杨玉霞 +2 位作者 汪艳 陈勇 武运 《新疆农业大学学报》 CAS 2014年第3期173-180,共8页

选取安装有永久性瘤胃瘘管的中国美利奴绵羊4只,先后饲喂全粗料日粮和精料型日粮(精粗比3∶2),提取微生物宏基因组DNA。通过PCR产物克隆文库构建、DNA测序和序列分析以研究在不同日粮条件下,绵羊瘤胃微生物糖苷水解酶第10家族(GH10)和... 选取安装有永久性瘤胃瘘管的中国美利奴绵羊4只,先后饲喂全粗料日粮和精料型日粮(精粗比3∶2),提取微生物宏基因组DNA。通过PCR产物克隆文库构建、DNA测序和序列分析以研究在不同日粮条件下,绵羊瘤胃微生物糖苷水解酶第10家族(GH10)和第11家族(GH11)木聚糖酶基因的多样性。结果表明,全粗料日粮时分别获得108和137条GH10和GH11家族木聚糖酶基因片段,精料型时分别获得145和235条GH10和GH11家族木聚糖酶基因片段,这些序列分别归属于19、20、53和26个操作分类单元(OUT)。DNA序列分析表明,GH10家族木聚糖酶基因片段与梭菌和拟杆菌来源的木聚糖酶基因有较高的相似性,GH11家族木聚糖酶基因片段与放线菌、麦角真菌来源的木聚糖酶基因有较高的相似性。饲喂全粗料日粮时,有57.9%的GH10家族序列与已知木聚糖酶基因的相似性小于90%;饲喂精料型日粮时,有65.4%的GH11家族序列与已知木聚糖酶基因的相似性小于90%。由此可见,绵羊瘤胃微生物GH10和GH11家族木聚糖酶基因序列具有丰富的多样性,并且大部分为新发现的序列。饲喂全粗料日粮时,更有利于发现瘤胃微生物GH10家族木聚糖酶新序列;饲喂精料型日粮时,更有利于发现GH11家族木聚糖酶新序列。 展开更多

关键词 绵羊 瘤胃微生物 木聚糖酶基因 多样性

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利用宏基因组技术发掘新木聚糖酶基因 被引量：2

14

作者 罗阳 何波 +1 位作者 王佳堃 刘建新 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2015年第11期86-91,共6页

木聚糖酶将日粮中的木聚糖降解成低聚糖。低聚糖及其厌氧发酵产物、短链脂肪酸可促进消化道发育,维持消化道微生物稳态。发掘新高效的木聚糖酶一直是酶工程研究的热点。宏基因组技术为此研究提供了保障。BAC和Fosmid宏基因组文库承载的... 木聚糖酶将日粮中的木聚糖降解成低聚糖。低聚糖及其厌氧发酵产物、短链脂肪酸可促进消化道发育,维持消化道微生物稳态。发掘新高效的木聚糖酶一直是酶工程研究的热点。宏基因组技术为此研究提供了保障。BAC和Fosmid宏基因组文库承载的信息量大,但阳性克隆率低,加大了分析工作量。木聚糖酶功能域由保守区和可变区嵌合构成,这为利用功能域基因研究木聚糖酶基因的多样性及其与微生物菌群的关系提供了条件。为此,本文在总结纯培养技术优缺点的基础上,重点归纳了BAC和Fosmid宏基因组文库及木聚糖酶功能域基因文库在发掘新木聚糖酶基因的应用。 展开更多

关键词 木聚糖酶基因 宏基因组技术 纯培养技术

原文传递

外源木聚糖酶在枯草芽胞杆菌中信号肽筛选 被引量：2

15

作者 范鑫 杨明明 +4 位作者 曹鹏涛 张伟 张雯 宋秀平 龚月生 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期979-983,共5页

【目的】本试验旨在筛选引导表达外源木聚糖酶基因高效分泌的信号肽,为枯草芽胞杆菌木聚糖酶高效分泌表达系统提供元件。【方法】构建信号肽筛选载体,载体是以含壮观霉素抗性基因的大肠-枯草穿梭载体为基本骨架,目标蛋白为耐碱性木聚糖... 【目的】本试验旨在筛选引导表达外源木聚糖酶基因高效分泌的信号肽,为枯草芽胞杆菌木聚糖酶高效分泌表达系统提供元件。【方法】构建信号肽筛选载体,载体是以含壮观霉素抗性基因的大肠-枯草穿梭载体为基本骨架,目标蛋白为耐碱性木聚糖酶,可在麦芽糖启动子Pglv诱导下表达。从枯草芽胞杆菌A1747基因组中扩增获得24个Sec途径信号肽,并将其全部链接到至筛选载体上,并在枯草芽胞杆菌WB700中实现表达分泌。重组菌在3%麦芽糖诱导下培养24h后用DNS法测定上清酶活。【结果】成功构建信号肽筛选载体pGPSX及24个表达载体,实现木聚糖酶表达分泌。且不同信号肽对于引导外源木聚糖酶分泌能力不同,其中YnfF信号肽引导分泌目标蛋白效率最高,上清酶活为37.2IU/mL。【结论】试验证明在枯草杆菌中对外源蛋白进行信号肽筛选是提高其分泌的有效途径,并获得了针对木聚糖酶高效分泌信号肽YnfF。 展开更多

关键词 木聚糖酶基因 信号肽 枯草芽胞杆菌

原文传递

一种新型木聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达 被引量：2

16

作者 李琦 成莉凤 +5 位作者 段盛文 冯湘沅 郑科 杨琦 刘志远 彭源德 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期126-130,共5页

为了获得新型木聚糖酶的高效分泌表达,在工程酶项目组前期原核表达了木聚糖酶基因xyn A的基础上,将xyn A基因(Gen Bank登录号:U57819)编码耐热性木聚糖酶成熟蛋白的部分序列克隆到p PICZαA表达载体上,转化毕赤酵母X33,成功构建真核表... 为了获得新型木聚糖酶的高效分泌表达,在工程酶项目组前期原核表达了木聚糖酶基因xyn A的基础上,将xyn A基因(Gen Bank登录号:U57819)编码耐热性木聚糖酶成熟蛋白的部分序列克隆到p PICZαA表达载体上,转化毕赤酵母X33,成功构建真核表达体系,再分批加入0. 5%(V/V)甲醇诱导毕赤酵母工程菌株产胞外木聚糖酶。结合木聚糖酶活力检测、SDS-PAGE电泳和Western Blot分析胞外木聚糖酶表达情况。结果表明,该XynA含有典型的糖苷水解酶11类催化结构域(GH11),成熟蛋白的预测分子量为38. 6 ku,等电点为6. 86; 7个毕赤酵母基因工程菌株X33/p PICZαA-xyn A分泌的木聚糖酶活力均≥300 U/m L,最高达487. 2 U/m L;胞外木聚糖酶在SDS-PAGE和Western Blot检测的特征谱带分子量约为45 ku,均比预期分子量(38. 6 ku)略大。一种新型木聚糖酶获得了高效分泌表达,为进一步分离纯化,研究其性质、结构和功能奠定了基础。 展开更多

关键词 木聚糖酶基因 毕赤酵母 真核表达 WESTERN BLOT

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水稻内源木聚糖酶osx基因的克隆及表达分析 被引量：2

17

作者 黄莹莹 马明章 +2 位作者 孙仁杰 詹仪花 翁晓燕 《实验室研究与探索》 CAS 北大核心 2013年第11期9-14,18,共7页

为进一步了解植物内源木聚糖酶基因结构及其表达特性,从水稻中克隆和表达了一种内源木聚糖酶基因。通过序列比对分析确定保守区序列,以PCR扩增得到的保守区序列从众多水稻木聚糖酶预测序列中"钓取"可能的目标基因,并以此基因... 为进一步了解植物内源木聚糖酶基因结构及其表达特性,从水稻中克隆和表达了一种内源木聚糖酶基因。通过序列比对分析确定保守区序列,以PCR扩增得到的保守区序列从众多水稻木聚糖酶预测序列中"钓取"可能的目标基因,并以此基因为模板设计引物,通过RT-PCR扩增得到一条长度为1 443 bp的基因片段osx,测序结果与水稻木聚糖酶基因预测序列NM_001061680一致性高达99%,该序列编码480个氨基酸,经预测不存在信号肽序列。构建表达载体pET28-a(+)-osx,导入大肠杆菌BL21进行IPTG诱导表达,该表达产物未检测到木聚糖酶活性。受大麦和玉米内源木聚糖酶基因表达的前体为无活性蛋白需要剪切加工的启示,进一步通过在线蛋白同源建模分析,设计引物去掉蛋白N端约120个氨基酸,C端约40个氨基酸,保留"Glyco-hydro-10"结构域,使其成功实现了原核活性表达,表达蛋白约40 kDa,木聚糖酶活性为11.53 IU/mL。 展开更多

关键词 水稻 木聚糖酶基因 克隆 同源建模 原核表达

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农业其他

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第5期100-103,共4页

910611 碧冬茄原生质体和分离核中激素刺激的转录的直接检测[英]/Perennes,C. …∥Plant Cell Rep.-1990,8(11).-684～686[译自DBA,1990,9(13),90-07669]碧冬茄(Petunia hybrida)原生质体培养在含MS大量元素、Heller微量元素、

关键词 基因克隆 木聚糖酶基因 非选择标记 外源基因 芽抱杆菌 转基因大豆 启动子片段 植物乳杆菌 报道基因 玉米醇溶蛋白

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果胶裂解酶基因与木聚糖酶基因的共表达 被引量：1

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作者 宋立立 顿宝庆 +1 位作者 张亚楠 张兆英 《江苏农业科学》 2018年第17期46-48,共3页

利用重叠引物PCR方法将从海栖热袍杆菌中克隆得到的果胶裂解酶基因和从桔青霉CR-2菌株中克隆得到的木聚糖酶基因做重叠引物PCR扩增,扩增后得到融合基因plyxyl,将其构建载体后转化到大肠杆菌菌株BL21,克隆子经IPTG诱导在原核系统中实现... 利用重叠引物PCR方法将从海栖热袍杆菌中克隆得到的果胶裂解酶基因和从桔青霉CR-2菌株中克隆得到的木聚糖酶基因做重叠引物PCR扩增,扩增后得到融合基因plyxyl,将其构建载体后转化到大肠杆菌菌株BL21,克隆子经IPTG诱导在原核系统中实现了表达,p H值为中性,诱导6 h后最高酶活性分别达30.11 U/m L、2.03 IU/m L。 展开更多

关键词 果胶裂解酶基因 木聚糖酶基因 原核系统 共表达

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木聚糖酶基因umxyn10B的克隆与表达研究

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作者 陈春岚 卢丽玲 冯家勋 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期711-716,共6页

从富集培养物宏基因组文库中筛选获得1个表达木聚糖酶活性的克隆pXYN12。鉴定分析表明:pXYN12上潜在的木聚糖酶基因umxyn10B大小为999 bp,编码产物与嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophi-lus)的木聚糖酶基因(GenBank索引号A... 从富集培养物宏基因组文库中筛选获得1个表达木聚糖酶活性的克隆pXYN12。鉴定分析表明:pXYN12上潜在的木聚糖酶基因umxyn10B大小为999 bp,编码产物与嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophi-lus)的木聚糖酶基因(GenBank索引号AAZ74783)的氨基酸序列有63%的一致性和76%的相似性,属于糖基水解酶家族10的成员。PCR扩增了umxyn10B的含催化功能域编码区的DNA序列并连接到表达载体pET-30a(+)上,构建成表达质粒在大肠杆菌Rosetta(DE3)pLysS中实现了表达,并对表达条件进行研究。 展开更多

关键词 宏基因组文库 木聚糖酶基因 克隆 表达

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