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题名亚硝酸还原酶基因克隆、表达与纯化
被引量：2
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作者
魏计东
张庆芳
窦少华
于爽
迟乃玉
王晓辉
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机构
大连大学生命科学与技术学院
辽宁省海洋微生物工程技术研究中心
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出处
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第14期101-105,共5页
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基金
国家自然科学基金项目(31500039)
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文摘
该研究通过聚合酶链反应(PCR)方法从木糖氧化产碱菌(Achromobacter xylosoxidans DL-1)基因组DNA中成功克隆含铜亚硝酸还原酶基因。PCR测序表明该基因全长1083个核苷酸,编码360个氨基酸,预测其理论分子质量约38.924 k Da,等电点(p I)4.83,命名为Cu NiR(Genbank登录号KX674378)。结构域分析该蛋白编码区包含信号肽,1个铜离子结合位点,1个氧化还原酶催化域。将Cu NiR基因构建到p ET22b载体,并转化至大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21(DE3)中诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测显示目的蛋白可溶表达。利用镍柱亲和层析纯化重组蛋白,酶活检测显示比活力为123.82 U/mg,为后期含铜亚硝酸还原酶(Cu NiR)的生化性质表征奠定理论基础。
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关键词
木糖氧化产碱菌dl-1
含铜亚硝酸还原酶(Cu
NiR)
克隆
表达
纯化
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Keywords
Alcaligenes xylosoxidans dl-1
copper nitrite reductase
cloning
expression
purification
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分类号
TS201.2
[轻工技术与工程—食品科学]
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