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疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达 被引量：8
1
作者 郑艳 周波 +1 位作者 宋宁宁 李多川 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期268-274,共7页
疏棉状嗜热丝孢菌Thermomyces lanuginosus可产生具有重要工业生产价值的脂肪酶。根据已报道的相应序列设计特异引物,综合运用PCR、RT-PCR技术克隆到脂肪酶基因的全长DNA和cDNA序列。其中DNA序列长1071bp,包含876bp的开放阅读框以及3段... 疏棉状嗜热丝孢菌Thermomyces lanuginosus可产生具有重要工业生产价值的脂肪酶。根据已报道的相应序列设计特异引物,综合运用PCR、RT-PCR技术克隆到脂肪酶基因的全长DNA和cDNA序列。其中DNA序列长1071bp,包含876bp的开放阅读框以及3段内含子;cDNA序列长885bp。结构基因编码蛋白包含292个氨基酸,前17个氨基酸构成信号肽。序列提交GenBank,登录号分别为EU022703和EU370914。将脂肪酶基因cDNA序列的开放阅读框克隆到酵母分泌型表达载体pPIC9K中,转化毕赤酵母GS115得到重组子且实现了分泌表达。将重组子诱导产酶,在培养温度30℃、甲醇添加量1%的情况下,小规模发酵量达0.93mg/mL,其分泌表达的最高酶活为7.2U/mL。重组酶最适反应温度和pH分别是60℃和8.0。表达蛋白在60℃保温1h后仍有完全酶活,具有较高的热稳定性。 展开更多
关键词 内含子 成熟蛋白 诱导 分泌表达 重组酶 最适反应温度 最适反应pH 热稳定
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小麦叶绿素酶及脱镁叶绿素水解酶活性测定条件的优化 被引量：5
2
作者 王绘艳 王曙光 +1 位作者 史雨刚 孙黛珍 《山西农业科学》 2019年第4期541-544,共4页
叶绿素降解是植物叶片衰老最明显的标志。为探明小麦叶绿素降解途径中叶绿素酶和脱镁叶绿素水解酶2个关键酶反应的最佳环境条件,对其反应的最佳环境温度及时间进行了探讨。结果表明,小麦叶片叶绿素酶的最适反应温度和最佳反应时间分别... 叶绿素降解是植物叶片衰老最明显的标志。为探明小麦叶绿素降解途径中叶绿素酶和脱镁叶绿素水解酶2个关键酶反应的最佳环境条件,对其反应的最佳环境温度及时间进行了探讨。结果表明,小麦叶片叶绿素酶的最适反应温度和最佳反应时间分别是40℃和80 min,脱镁叶绿素水解酶的最佳反应温度和最佳反应时间分别是35℃和90 min。该研究结果可为2种酶活性的测定提供重要参考。 展开更多
关键词 小麦 叶绿素酶 脱镁叶绿素水解酶 最适反应温度 最佳反应时间
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家蚕5龄幼虫蛋白水解酶的最适反应温度和pH值 被引量：3
3
作者 屠洁 王国基 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期100-102,共3页
调查了家蚕(华峰×雪松)5龄幼虫的血液、消化液以及脂肪体蛋白水解酶的反应条件,发现其最适反应温度均在37 ℃左右,最适反应pH分别为8.0、9.8和6.8左右.血液蛋白水解酶在pH 6.8～9.8之间其活力变化不大.
关键词 家蚕 蛋白水解酶 最适反应温度 最适反应pH
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微波处理对葡萄糖异构酶性质的影响 被引量：2
4
作者 胡国洲 张甫生 +3 位作者 胡鹏 陈光静 武菁菁 阚建全 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第3期134-138,共5页
研究微波处理对葡萄糖异构酶酶活性、稳定性、动力学参数及构象的影响。结果表明:不同微波处理时间和微波处理功率对葡萄糖异构酶的活力都有着不同的影响。在70℃处理5 min条件下,当微波功率为300、400 W时,葡萄糖异构酶的相对酶活力分... 研究微波处理对葡萄糖异构酶酶活性、稳定性、动力学参数及构象的影响。结果表明:不同微波处理时间和微波处理功率对葡萄糖异构酶的活力都有着不同的影响。在70℃处理5 min条件下,当微波功率为300、400 W时,葡萄糖异构酶的相对酶活力分别增加14.23%、8.42%;而当微波功率为600、800 W时,葡萄糖异构酶的相对酶活力分别降低到95.69%、90.78%;微波处理也对葡萄糖异构酶的最适反应温度和动力学参数K m和V max有影响,但对其最适pH值几乎没有影响。紫外和荧光光谱研究表明微波处理将导致葡萄糖异构酶部分去折叠,分子中赖氨酸和色氨酸残基所处的微环境发生变化,葡萄糖异构酶的三级结构因此可能发生了改变,即微波处理可能通过改变葡萄糖异构酶的构象从而改变酶的性质。 展开更多
关键词 葡萄糖异构酶 微波处理 酶活性 最适反应温度 最适PH值 构象
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动态高压微射流对茎菠萝蛋白酶性质和构象的影响 被引量：2
5
作者 张兆琴 刘伟 +2 位作者 梁瑞红 刘成梅 吴薇 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第7期46-50,共5页
以茎菠萝蛋白酶为原料,研究动态高压微射流(DHPM)对其活性、稳定性和构象的影响。结果显示:DHPM对茎菠萝蛋白酶具有钝化作用,但活力并不随着压力的升高而降低。压力为60、80、100、120MPa时,茎菠萝蛋白酶的相对酶活力分别是94%、93%、98... 以茎菠萝蛋白酶为原料,研究动态高压微射流(DHPM)对其活性、稳定性和构象的影响。结果显示:DHPM对茎菠萝蛋白酶具有钝化作用,但活力并不随着压力的升高而降低。压力为60、80、100、120MPa时,茎菠萝蛋白酶的相对酶活力分别是94%、93%、98%及92%。DHPM不同压力对茎菠萝蛋白酶的最适反应温度的影响不同,但对最适pH值几乎没有影响。然而经DHPM60、120MPa处理后,茎菠萝蛋白酶在pH8.0的稳定性显著增强。在pH8.0保温40min后,60、120MPa处理的茎菠萝蛋白酶相对酶活力分别为85%和82%,分别比未经处理的高14%和11%。可见,DHPM60、120MPa处理极大地提高了茎菠萝蛋白酶在pH8.0时的稳定性。此外,紫外光谱和荧光光谱的结果表明:DHPM导致茎菠萝蛋白酶部分去折叠,分子中赖氨酸和色氨酸残基所处的微环境发生了变化;红外光谱结果显示:DHPM处理后茎菠萝蛋白酶二级或三级结构发生了变化。 展开更多
关键词 动态高压微射流技术 茎菠萝蛋白酶 最适PH值 最适反应温度 pH值稳定性 热稳定性 构象
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黑曲霉尿酸氧化酶基因克隆及在大肠杆菌中的表达
6
作者 卢苇 荣俊 +1 位作者 匡红艳 余知和 《长江大学学报（自科版）（下旬）》 2016年第2期1-6,共6页
目的：为大量生产医用尿酸氧化酶，对一个黑曲霉菌株的尿酸氧化酶基因进行了克隆和在大肠杆菌中的异源表达。方法：基因测序结果显示，克隆的黑曲霉尿酸氧化酶基因全长为909bp，编码302个氨基酸残基。SDS-PAGE和非变性电泳分析结果显示... 目的：为大量生产医用尿酸氧化酶，对一个黑曲霉菌株的尿酸氧化酶基因进行了克隆和在大肠杆菌中的异源表达。方法：基因测序结果显示，克隆的黑曲霉尿酸氧化酶基因全长为909bp，编码302个氨基酸残基。SDS-PAGE和非变性电泳分析结果显示，单体酶分子量在35～37kDa之间；表达过程中酶蛋白分子自我组装成4聚体蛋白，聚合体蛋白的表观分子量为140～150kDa。结果：酶蛋白在大肠杆菌细胞液中表达，产物几乎完全以水溶状态存在，最佳溶解pH为8．0。最佳酶促反应温度为35℃。经过诱导表达后的菌体，按照1：20（质量／体积）比例重悬于最优缓冲液中，进行超声波破碎后，粗酶液活力为67．69IU／mL，比活性为47．00IU／mg。结论：提供了一个微生物来源尿酸氧化酶新的获取方法。 展开更多
关键词 尿酸氧化酶 黑曲霉 表达 最佳溶解pH 最适反应温度
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轮纹大茎点菌葡糖淀粉酶部分酶学性质研究
7
作者 张强 胥九兵 +3 位作者 高永超 迟建国 邱维忠 王加宁 《江西农业学报》 CAS 2010年第9期146-148,共3页
轮纹大茎点菌在液体培养条件下产葡糖淀粉酶酶活很低,而在固态培养条件下酶活相对较高.对粗酶液中葡糖淀粉酶的部分酶学性质进行研究,结果表明,该酶的最适反应温度为50 ℃,30～50 ℃之间有较高活性;40 ℃以下稳定,50 ℃保温1 h酶活性损... 轮纹大茎点菌在液体培养条件下产葡糖淀粉酶酶活很低,而在固态培养条件下酶活相对较高.对粗酶液中葡糖淀粉酶的部分酶学性质进行研究,结果表明,该酶的最适反应温度为50 ℃,30～50 ℃之间有较高活性;40 ℃以下稳定,50 ℃保温1 h酶活性损失60%以上.酶的最适pH为8.0,在pH 7.0～11.0之间有较高的酶活性:pH 5.0以下酶不稳定,活性迅速丧失,5.0～10.0之间酶相对稳定.K+、Fe2+、Ca2+对酶的活性基本没有影响,而Cu2+、Mg2+、Zn2+、Mn2+、Na+对酶的催化活性有激活作用,其中Mn2+激活作用最为强烈. 展开更多
关键词 茎点菌 葡糖淀粉酶 酶学性质 性质研究 酶活性 培养条件 激活作用 最适反应温度 不稳定 催化活性 活性基 高活性 粗酶液 液体 损失 结果 固态 保温 CA2+
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低温果胶酶的纯化及酶学性质的研究 被引量：2
8
作者 王伟 李锋 +1 位作者 张磊 茆军 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期162-165,共4页
进行了低温果胶酶产生菌的筛选,并对低温果胶酶的酶学性质、纯化及动力学常数进行了研究。结果表明:该酶最适酶反应温度25℃,最适酶反应pH为5.8;酶液的pH稳定范围在5～6.4;在25℃保温3h,酶活降至50.5%,在35℃保温2h,酶活降至55.1%,在45... 进行了低温果胶酶产生菌的筛选,并对低温果胶酶的酶学性质、纯化及动力学常数进行了研究。结果表明:该酶最适酶反应温度25℃,最适酶反应pH为5.8;酶液的pH稳定范围在5～6.4;在25℃保温3h,酶活降至50.5%,在35℃保温2h,酶活降至55.1%,在45℃保温1.5h,酶活降至48.7%,在55℃保温1h,酶活降至43.1%;金属离子Mg2+、Ca2+、Mn2+、Zn2+、Fe2+、Na+对低温果胶酶有激活作用,而Ba2+、Hg2+、Cu2+、Fe3+、Pb2+对低温果胶酶有强烈的抑制作用;当以果胶为底物时,该酶的动力学常数Km为27.86mg/mL,Vmax为152.13μmol/(min·mL);采用不同的处理方法均可使低温果胶酶得到纯化,但40%～85%的硫酸铵分级沉淀纯化效果最好。 展开更多
关键词 低温果胶酶 最适酶反应温度 最适酶反应pH 分离纯化
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SHV型β-内酰胺酶动力学及抑酶效应的研究 被引量：3
9
作者 钱元恕 谢友红 《四川生理科学杂志》 1998年第3期29-29,共1页
采用分光光度法研究革兰氏阴性菌产生的2种SHV型β-内酰胺酶的动力学。分别以L-B作图法求取Km和V<sub>max</sub>,以Dixon作图法求取Ki。结果表明:除SHV-1对第三代头孢菌素头孢噻肟没有水解作用外,SHV型β-内酰胺酶对青霉素... 采用分光光度法研究革兰氏阴性菌产生的2种SHV型β-内酰胺酶的动力学。分别以L-B作图法求取Km和V<sub>max</sub>,以Dixon作图法求取Ki。结果表明:除SHV-1对第三代头孢菌素头孢噻肟没有水解作用外,SHV型β-内酰胺酶对青霉素类、第一代、第二代、第三代头孢菌素均有不同程度水解作用。头孢噻肟对SHV-2、有较高的亲和力（低Km）,但V<sub>max</sub>均不超过15％。抑酶实验结果证明头孢噻肟对SHV-2、有抑制作用,β-内酰胺酶抑制剂舒巴坦对SHV-1,2均有抑制作用。SHV型酶的最适pH值为6.6～7.4;最适反应温度是34℃～40℃。 展开更多
关键词 Β-内酰胺酶 酶动力学 抑酶效应 头孢噻肟 第三代头孢 水解作用 抑制作用 革兰氏阴性菌 作图法 最适反应温度
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