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可溶性GS-TrhTRAIL_(55-281)最佳表达条件及凋亡活性研究 被引量：6
1
作者 刘洪波 范学工 +2 位作者 李宁 黄建军 朱才 《生命科学研究》 CAS CSCD 2005年第3期267-271,共5页
将本室构建的重组质粒pGEX-5X-TRAIL55-281转入大肠杆菌JM109和HB101中,鉴定后诱导表达,然后针对培养温度、培养时间及诱导剂IPTG浓度设立梯度试验,发现重组质粒pGEX-5X-TRAIL在JM109与HB101中的表达情况相近,可溶性的人GSTr-hTRAIL55-... 将本室构建的重组质粒pGEX-5X-TRAIL55-281转入大肠杆菌JM109和HB101中,鉴定后诱导表达,然后针对培养温度、培养时间及诱导剂IPTG浓度设立梯度试验,发现重组质粒pGEX-5X-TRAIL在JM109与HB101中的表达情况相近,可溶性的人GSTr-hTRAIL55-281最佳表达条件为26℃,0.06mmol/L IPTG,200r/m in.利用亲和层析法纯化出大量可溶性GSTr-hTRAIL55-281后,通过Western Blot及流式细胞仪检测发现GSTr-hTRAIL55-281有较好的免疫学活性与生物学活性.为今后TRAIL作为抗肿瘤药物的开发做必要的准备. 展开更多
关键词 可溶性GST-rhTRAIL55-281 最佳表达条件 纯化 活性 抗肿瘤药物
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当归咖啡酸-O-甲基转移酶基因的克隆与表达分析 被引量：5
2
作者 张培 侯云龙 +5 位作者 苏敏 孙利 徐登封 宋涛 周璐恒 赵韶华 《中国野生植物资源》 CSCD 2021年第1期20-28,共9页
目的:为了研究当归阿魏酸生物合成途径的功能基因,从当归中克隆了一条当归咖啡酸-O-甲基转移酶基因(AsCOMT),进行生物信息学分析、基因表达模式分析及原核表达。方法:首先依据当归COMT基因的序列(GenBank注册号KP188587),利用PCR的方法... 目的:为了研究当归阿魏酸生物合成途径的功能基因,从当归中克隆了一条当归咖啡酸-O-甲基转移酶基因(AsCOMT),进行生物信息学分析、基因表达模式分析及原核表达。方法:首先依据当归COMT基因的序列(GenBank注册号KP188587),利用PCR的方法克隆该基因的cDNA全长。对AsCOMT基因进行实时荧光定量PCR分析。采用无缝克隆技术构建AsCOMT基因的原核表达载体,通过热击法转化大肠杆菌BL21(DE3)。进一步利用异丙基-β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导大肠杆菌表达重组蛋白,并筛选出最佳IPTG诱导表达条件。结果:AsCOMT基因的开放阅读框为1098 bp,编码365个氨基酸,蛋白分子量约为40.230 kDa,等电点为5.43。AsCOMT蛋白含有1个S-腺苷-L-甲硫氨酸结合位点,属于COMT蛋白家族成员。通过实时荧光定量表达分析表明,AsCOMT基因在当归的不同组织均有表达,根中表达量最高,其次是叶片,叶柄中表达量最低。原核表达载体pGEX-4T-3-AsCOMT在E.coli BL21(DE3)中大量表达当归AsCOMT蛋白,且经SDS-PAGE分析显示其相对分子质量约为40.23 kDa,其最优表达条件为25℃、1.0 mmol/L IPTG终浓度、诱导8 h,得到的当归AsCOMT蛋白主要以可溶性形式存在。结论:本研究成功克隆了AsCOMT基因,且该基因的表达具有组织特异性。构建的AsCOMT原核表达菌株在最适IPTG诱导表达条件下能大量表达当归COMT蛋白,为研究COMT基因在当归阿魏酸生物合成途径中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 当归 COMT 荧光定量PCR 原核表达 最佳表达条件
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