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题名用曲细精管微注射法建立绿色荧光蛋白转基因小鼠
被引量：26
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作者
沈新明
乔贵林
张玲
江培洲
黄华
姚开泰
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机构
第一军医大学肿瘤研究所
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出处
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2002年第3期250-253,共4页
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文摘
目的研究曲细精管微注射法建立转基因小鼠的可行性。方法选取人巨细胞病毒启动子调控的增强型绿色荧光蛋白(pCMV-EGFP)表达载体,应用体视解剖镜和显微注射仪将不同剂量的被脂质体包裹的质粒DNA注射到不同年龄的KM小鼠曲细精管内。在注射后40d左右,雄鼠与雌鼠合笼交配;分娩后3周,剪取仔鼠尾,提取基因组DNA,应用PCR、Southernblotting技术进行整合检测。处死2只首建小鼠,荧光显微镜观察组织冰冻切片中EGFP的表达。结果共注射41只雄性小鼠,存活34只,其中32只具有交配、受精能力,获得仔鼠382只。仔鼠经检测,PCR阳性133只,Southernblotting阳性15只。小鼠的年龄、注射剂量与EGFP的整合率没有明显关系,荧光显微镜观察下没有观察到组织冰冻切片中EGFP明显表达。结论曲细精管微注射法是动物基因转移的一条简便可行的新途径。
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关键词
曲细精管微注射
绿色荧光蛋白
转基因小鼠
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Keywords
seminiferoustubulesmicroinjection
enhancedgreenfluorescentprotein
genetransferrats
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分类号
S814.8
[农业科学—畜牧学]
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