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人促甲状腺激素受体A亚单位蛋白在昆虫细胞体系中的分泌性表达
1
作者
张萌
张恺宁
+5 位作者
陈子怡
王玲
伍丽萍
王悦
刘冰
施秉银
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第3期409-414,共6页
目的拟构建昆虫细胞分泌表达体系,在草地夜蛾卵巢细胞分泌性促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor,TSHR)A亚单位蛋白。方法将TSHR A亚单位蛋白(22-289)和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因连接到质粒...
目的拟构建昆虫细胞分泌表达体系,在草地夜蛾卵巢细胞分泌性促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor,TSHR)A亚单位蛋白。方法将TSHR A亚单位蛋白(22-289)和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因连接到质粒,并通过转化、蓝白斑筛选获得重组杆粒,将其转染入sf9昆虫细胞收获重组杆状病毒,扩增并测定滴度。最终通过蛋白印迹实验鉴定重组蛋白的表达并优化表达条件。结果在蛋白表达体系的构建过程中,PCR鉴定和测序均证实了重组质粒和重组杆粒序列的正确性。将重组杆粒转染入细胞后观察到病毒出芽迹象,空斑实验鉴定P1代病毒的滴度为2×10^(7) pfu/m。蛋白印迹显示重组蛋白分子质量为55 ku,主要在培养基中。蛋白表达的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)为1,最佳感染时程为72 h。结论本研究构建了TSHR A亚单位的昆虫细胞杆状病毒表达体系,该体系能够外泌性表达分子质量为55 ku左右的蛋白TSHR 22-289,且蛋白能够成功的糖基化修饰。该系统为其工业化平台的建设及生产提供前期基础,也针对日后TSHR蛋白的研究和Graves病的病因预防提供了有用的工具。
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关键词
人促甲状腺激素受体A亚单位
昆虫
细胞
体系
分泌型表达
SF9
细胞
GRAVES病
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职称材料
猪氨基肽酶在昆虫细胞的分段表达及鉴定
被引量：
3
2
作者
单智夫
唐丽杰
+2 位作者
乔薪媛
葛俊伟
李一经
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第9期12-16,共5页
为研究猪的氨基肽酶(Porcine aminopeptidase,pAPN)的特异性功能区域及作用机制,将除去信号肽的pAPN分为SPA,SPB和SPC三段,利用一对同尾酶XholI和SalI将信号肽分别与SPA,SPB和SPC相连接后再构建到杆状病毒表达载体pFastBacTM1上,通过杆...
为研究猪的氨基肽酶(Porcine aminopeptidase,pAPN)的特异性功能区域及作用机制,将除去信号肽的pAPN分为SPA,SPB和SPC三段,利用一对同尾酶XholI和SalI将信号肽分别与SPA,SPB和SPC相连接后再构建到杆状病毒表达载体pFastBacTM1上,通过杆状病毒-昆虫细胞表达体系进行蛋白表达。结果表明,经SDS-PAGE分析可见获得的目的蛋白与预期大小相一致,即SPA约为42 ku,SPB和SPC相同,约为56 ku的分泌蛋白;经western-blot鉴定三段蛋白均可与天然的pAPN抗血清特异性结合,表明已经成功获得SPA,SPB和SPC三段蛋白,可为进一步研究pAPN特异性功能区域奠定基础。
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关键词
pAPN分段
杆状病毒-
昆虫
细胞
表达
体系
表达与鉴定
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职称材料
可溶性HLA-A2-IgGFc融合蛋白在昆虫细胞的表达及鉴定
3
作者
王丽珩
龚卫娟
+3 位作者
肖炜明
丁岩冰
田芳
季明春
《实用临床医药杂志》
CAS
2009年第12期18-21,31,共5页
目的利用杆状病毒-昆虫细胞表达体系制备可溶性HLA-A2与免疫球蛋白IgGFc段的融合蛋白。方法首先将可溶性HLA-A*0201和IgG3分子Fc段的cDNA基因插入杆状病毒表达载体pFastHTa,形成重组载体pFHT-sHLA-A*0201-IgGFc。将该重组载体转化DH10Ba...
目的利用杆状病毒-昆虫细胞表达体系制备可溶性HLA-A2与免疫球蛋白IgGFc段的融合蛋白。方法首先将可溶性HLA-A*0201和IgG3分子Fc段的cDNA基因插入杆状病毒表达载体pFastHTa,形成重组载体pFHT-sHLA-A*0201-IgGFc。将该重组载体转化DH10Bac大肠杆菌,sHLA-A*0201-IgGFc基因同源重组入菌体内杆粒(Bacmid)中。抽提阳性杆粒,转染昆虫细胞Sf9,72 h收集病毒上清。再将病毒上清感染Sf9细胞,96 h收集细胞并裂解,SDS-PAGE观察其表达。细胞裂解液经Ni+-NTA树脂纯化Western-blot法鉴定其蛋白质序列,间接ELISA法鉴定是否形成正确构象。结果融合蛋白不仅与HLAⅠ类分子的构象特异性抗体(W6/32)结合,还与羊抗人IgG抗体结合。结论所制备可溶性HLA-A2-IgGFc融合蛋白序列正确,并在体外形成正确空间构象。
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关键词
sHLA-A2
IgGFc
融合蛋白
杆状病毒-
昆虫
细胞
表达
体系
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职称材料
题名
人促甲状腺激素受体A亚单位蛋白在昆虫细胞体系中的分泌性表达
1
作者
张萌
张恺宁
陈子怡
王玲
伍丽萍
王悦
刘冰
施秉银
机构
西安交通大学第一附属医院内分泌科
西安交通大学第一附属医院生物样本信息资源中心
出处
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第3期409-414,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.82201238,No.81970679,No.82170805)。
文摘
目的拟构建昆虫细胞分泌表达体系,在草地夜蛾卵巢细胞分泌性促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor,TSHR)A亚单位蛋白。方法将TSHR A亚单位蛋白(22-289)和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因连接到质粒,并通过转化、蓝白斑筛选获得重组杆粒,将其转染入sf9昆虫细胞收获重组杆状病毒,扩增并测定滴度。最终通过蛋白印迹实验鉴定重组蛋白的表达并优化表达条件。结果在蛋白表达体系的构建过程中,PCR鉴定和测序均证实了重组质粒和重组杆粒序列的正确性。将重组杆粒转染入细胞后观察到病毒出芽迹象,空斑实验鉴定P1代病毒的滴度为2×10^(7) pfu/m。蛋白印迹显示重组蛋白分子质量为55 ku,主要在培养基中。蛋白表达的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)为1,最佳感染时程为72 h。结论本研究构建了TSHR A亚单位的昆虫细胞杆状病毒表达体系,该体系能够外泌性表达分子质量为55 ku左右的蛋白TSHR 22-289,且蛋白能够成功的糖基化修饰。该系统为其工业化平台的建设及生产提供前期基础,也针对日后TSHR蛋白的研究和Graves病的病因预防提供了有用的工具。
关键词
人促甲状腺激素受体A亚单位
昆虫
细胞
体系
分泌型表达
SF9
细胞
GRAVES病
Keywords
human thyroid stimulating hormone receptor A subunit
insect cell system
secretory expression
sf9 cell
Graves’disease
分类号
Q962 [生物学—昆虫学]
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职称材料
题名
猪氨基肽酶在昆虫细胞的分段表达及鉴定
被引量：
3
2
作者
单智夫
唐丽杰
乔薪媛
葛俊伟
李一经
机构
东北农业大学动物医学学院
出处
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第9期12-16,共5页
基金
国家自然科学基金(30671574)
文摘
为研究猪的氨基肽酶(Porcine aminopeptidase,pAPN)的特异性功能区域及作用机制,将除去信号肽的pAPN分为SPA,SPB和SPC三段,利用一对同尾酶XholI和SalI将信号肽分别与SPA,SPB和SPC相连接后再构建到杆状病毒表达载体pFastBacTM1上,通过杆状病毒-昆虫细胞表达体系进行蛋白表达。结果表明,经SDS-PAGE分析可见获得的目的蛋白与预期大小相一致,即SPA约为42 ku,SPB和SPC相同,约为56 ku的分泌蛋白;经western-blot鉴定三段蛋白均可与天然的pAPN抗血清特异性结合,表明已经成功获得SPA,SPB和SPC三段蛋白,可为进一步研究pAPN特异性功能区域奠定基础。
关键词
pAPN分段
杆状病毒-
昆虫
细胞
表达
体系
表达与鉴定
Keywords
subsection of pAPN
insect cells expression systems
expression and identifica-tion
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
可溶性HLA-A2-IgGFc融合蛋白在昆虫细胞的表达及鉴定
3
作者
王丽珩
龚卫娟
肖炜明
丁岩冰
田芳
季明春
机构
扬州大学医学院免疫学教研室
扬州大学第二临床医学院消化科
出处
《实用临床医药杂志》
CAS
2009年第12期18-21,31,共5页
基金
国家自然科学基金(30671917)
江苏省自然科学基金(BK2004404
+1 种基金
BK2008215)
江苏省高校自然科学基金(04KJB320162)资助
文摘
目的利用杆状病毒-昆虫细胞表达体系制备可溶性HLA-A2与免疫球蛋白IgGFc段的融合蛋白。方法首先将可溶性HLA-A*0201和IgG3分子Fc段的cDNA基因插入杆状病毒表达载体pFastHTa,形成重组载体pFHT-sHLA-A*0201-IgGFc。将该重组载体转化DH10Bac大肠杆菌,sHLA-A*0201-IgGFc基因同源重组入菌体内杆粒(Bacmid)中。抽提阳性杆粒,转染昆虫细胞Sf9,72 h收集病毒上清。再将病毒上清感染Sf9细胞,96 h收集细胞并裂解,SDS-PAGE观察其表达。细胞裂解液经Ni+-NTA树脂纯化Western-blot法鉴定其蛋白质序列,间接ELISA法鉴定是否形成正确构象。结果融合蛋白不仅与HLAⅠ类分子的构象特异性抗体(W6/32)结合,还与羊抗人IgG抗体结合。结论所制备可溶性HLA-A2-IgGFc融合蛋白序列正确,并在体外形成正确空间构象。
关键词
sHLA-A2
IgGFc
融合蛋白
杆状病毒-
昆虫
细胞
表达
体系
Keywords
sHLA-A2
IgGFc
fusion protein
baculovius expression system
分类号
R392.33 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人促甲状腺激素受体A亚单位蛋白在昆虫细胞体系中的分泌性表达
张萌
张恺宁
陈子怡
王玲
伍丽萍
王悦
刘冰
施秉银
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
下载PDF
职称材料
2
猪氨基肽酶在昆虫细胞的分段表达及鉴定
单智夫
唐丽杰
乔薪媛
葛俊伟
李一经
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
3
下载PDF
职称材料
3
可溶性HLA-A2-IgGFc融合蛋白在昆虫细胞的表达及鉴定
王丽珩
龚卫娟
肖炜明
丁岩冰
田芳
季明春
《实用临床医药杂志》
CAS
2009
0
下载PDF
职称材料
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