目的本实验探讨miR-191对人恶性脑膜瘤IOMM-Lee细胞增殖的影响及其可能作用机制。方法采用RealtimePCR法检测恶性脑膜瘤组织、癌旁正常组织和人恶性脑膜瘤细胞系IOMM-Lee及CH157-MN细胞中miR-191的表达。在IOMM-Lee细胞中转染miR-191抑...目的本实验探讨miR-191对人恶性脑膜瘤IOMM-Lee细胞增殖的影响及其可能作用机制。方法采用RealtimePCR法检测恶性脑膜瘤组织、癌旁正常组织和人恶性脑膜瘤细胞系IOMM-Lee及CH157-MN细胞中miR-191的表达。在IOMM-Lee细胞中转染miR-191抑制剂,MTT检测细胞增殖能力。通过生物信息学软件分析miR-191的下游靶基因,用莹光素酶报告基因法进行验证。观察抑制EGR1的表达对细胞增殖能力影响。使用蛋白质相互作用数据库分析可与EGR1作用的蛋白,检测抑制EGR1的表达对TP53蛋白表达的影响,观察抑制miR-191的表达对EGR1和TP53蛋白表达的影响。结果miR-191在恶性脑膜瘤组织中的表达(0.933±0.144),明显高于癌旁正常组织(0.459±0.104,P<0.05)。人恶性脑膜瘤细胞系IOMM-Lee(1.25±0.07)中miR-191的表达明显高于CH157-MN细胞系(0.50±0.14,P<0.05)。抑制miR-191表达后,IOMM-Lee细胞的增殖能力明显降低(0.53±0.02 vs 0.74±0.01,P<0.05)。EGR1是miR-191的靶基因,抑制EGR1表达可促进IOMM-Lee细胞的增殖(0.83±0.02 vs 0.71±0.01,P<0.05)。EGR1可正调控TP53蛋白表达(13758.17±57.22 vs 10239.00±71.30,P<0.001),抑制miR-191后EGR1(14663.00±80.08 vs 11184.33±153.90,P<0.001)及TP53蛋白表达明显下降(15206.17±102.08 vs 11400.17±97.00,P<0.001)。结论沉默miR-191可有效抑制恶性脑膜瘤细胞增殖,其作用机制可能与上调EGR1/TP53信号通路有关。展开更多
早期生长反应蛋白1(early growth response protein 1,Egr1)作为转录因子在细胞增殖、分化及凋亡等许多生物学过程中都扮演着重要角色,但是其对小鼠成肌细胞C2C12分化的影响尚不明确。该研究采用Western blot和免疫荧光技术检测Egr1在C2...早期生长反应蛋白1(early growth response protein 1,Egr1)作为转录因子在细胞增殖、分化及凋亡等许多生物学过程中都扮演着重要角色,但是其对小鼠成肌细胞C2C12分化的影响尚不明确。该研究采用Western blot和免疫荧光技术检测Egr1在C2C12细胞分化过程中的表达规律及定位。利用CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas9技术分别激活和抑制Egr1的表达,进而探讨Egr1对C2C12细胞分化的影响。结果显示,随着C2C12细胞分化的进行,Egr1的表达量在分化的第5 d达到峰值,随后呈下降趋势。Egr1表达定位于C2C12的细胞核与细胞质中,随着分化的进行,其在细胞核和细胞质中的表达量均显著升高。分别激活或抑制Egr1后,C2C12细胞肌管融合率以及肌肉分化标志分子肌细胞生成蛋白(myogenin,MYOG)和肌球蛋白重链2(myosin heavy chain 2,MYH2)水平均显著增加或降低。该研究结果表明,Egr1能够促进体外小鼠成肌细胞C2C12的分化。展开更多
文摘目的本实验探讨miR-191对人恶性脑膜瘤IOMM-Lee细胞增殖的影响及其可能作用机制。方法采用RealtimePCR法检测恶性脑膜瘤组织、癌旁正常组织和人恶性脑膜瘤细胞系IOMM-Lee及CH157-MN细胞中miR-191的表达。在IOMM-Lee细胞中转染miR-191抑制剂,MTT检测细胞增殖能力。通过生物信息学软件分析miR-191的下游靶基因,用莹光素酶报告基因法进行验证。观察抑制EGR1的表达对细胞增殖能力影响。使用蛋白质相互作用数据库分析可与EGR1作用的蛋白,检测抑制EGR1的表达对TP53蛋白表达的影响,观察抑制miR-191的表达对EGR1和TP53蛋白表达的影响。结果miR-191在恶性脑膜瘤组织中的表达(0.933±0.144),明显高于癌旁正常组织(0.459±0.104,P<0.05)。人恶性脑膜瘤细胞系IOMM-Lee(1.25±0.07)中miR-191的表达明显高于CH157-MN细胞系(0.50±0.14,P<0.05)。抑制miR-191表达后,IOMM-Lee细胞的增殖能力明显降低(0.53±0.02 vs 0.74±0.01,P<0.05)。EGR1是miR-191的靶基因,抑制EGR1表达可促进IOMM-Lee细胞的增殖(0.83±0.02 vs 0.71±0.01,P<0.05)。EGR1可正调控TP53蛋白表达(13758.17±57.22 vs 10239.00±71.30,P<0.001),抑制miR-191后EGR1(14663.00±80.08 vs 11184.33±153.90,P<0.001)及TP53蛋白表达明显下降(15206.17±102.08 vs 11400.17±97.00,P<0.001)。结论沉默miR-191可有效抑制恶性脑膜瘤细胞增殖,其作用机制可能与上调EGR1/TP53信号通路有关。
文摘早期生长反应蛋白1(early growth response protein 1,Egr1)作为转录因子在细胞增殖、分化及凋亡等许多生物学过程中都扮演着重要角色,但是其对小鼠成肌细胞C2C12分化的影响尚不明确。该研究采用Western blot和免疫荧光技术检测Egr1在C2C12细胞分化过程中的表达规律及定位。利用CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas9技术分别激活和抑制Egr1的表达,进而探讨Egr1对C2C12细胞分化的影响。结果显示,随着C2C12细胞分化的进行,Egr1的表达量在分化的第5 d达到峰值,随后呈下降趋势。Egr1表达定位于C2C12的细胞核与细胞质中,随着分化的进行,其在细胞核和细胞质中的表达量均显著升高。分别激活或抑制Egr1后,C2C12细胞肌管融合率以及肌肉分化标志分子肌细胞生成蛋白(myogenin,MYOG)和肌球蛋白重链2(myosin heavy chain 2,MYH2)水平均显著增加或降低。该研究结果表明,Egr1能够促进体外小鼠成肌细胞C2C12的分化。
