目的通过运用FISH和多重PCR技术,对不育和配偶难免流产的男性患者进行细胞染色体检查和Y染色体分子学方面的检测和比较,了解Y染色体异常对生育造成的影响。方法对研究对象分为3组,无精症组16例,少精症组11例;另有7例配偶难免流产的男性...目的通过运用FISH和多重PCR技术,对不育和配偶难免流产的男性患者进行细胞染色体检查和Y染色体分子学方面的检测和比较,了解Y染色体异常对生育造成的影响。方法对研究对象分为3组,无精症组16例,少精症组11例;另有7例配偶难免流产的男性患者,进行外周血细胞培养和染色体G显带、C显带分析,并用荧光原位杂交(fluorescence in situ hyh-dizacion,FISH)和多重PCR检测分子学异常。结果 3组病人中无精症患者组中细胞染色体异常率最高(31.25%,5/16),其中3例为47,XXY及嵌合体;1例46,XX性发育异常,SRY阳性,AZFa,b,c区段完全丢失;1例46,X,del(Y)(q11.2)伴AZFb,c区段丢失;弱精少精症中微缺失检出1例(9.09%,1/11);难免流产组中FISH检出染色体异常1例,为46,XY/47,XXY。结论染色体异常和AZF微缺失是导致男性不育,尤其是无精症的重要原因,常规染色体检查及Y染色体异染色体长度占总Y染色体比率、FISH技术及多重PCR技术对AZF微缺失的系统检测可以男性不育患者明确病因,为临床诊断和遗传咨询提供帮助。展开更多
文摘目的以全血为起始模板直接进行PCR多重扩增，建立一种快速、简便的Y染色体微缺失检测方法。方法用作者自行研制的“HpH-Buffer”，以不经基因组DNA提取的抗凝全血为模板直接进行多重PCR扩增。分别在5管中检测无精症因子（azoospermia factor，AZF）区域的a区、b区和c区共12个序列标签位点（sequence tagged sites，SIS）。为保证方法有效性，加做Y染色体性别决定区（sex-determining region Y，SRY）和X／Y连锁锌指蛋白基因（X-linked or Y-linked zinc fingergene，ZFX／Y）作为内控。同时，为考察方法的准确性，对每例血液样本提取基因组DNA平行实验。结果共检测了156例男性血液样本，每组实验均加做阳性对照（正常已生育男性样本）和阴性对照（正常女性样本），以保证实验有效性。结果表明，156例样本中有144例无缺失，AZFa区缺失1例，AZFb区缺失1例，AZFc区缺失7例，AZFb和AZFc区缺失1例，AZFa、AZFb和AZFc区全缺失2例。以全血为模板和以基因组DNA为模板进行扩增所得到的实验结果完全一致。结论所建立的方法省略了DNA提取这一繁琐的步骤，减少了PCR实验过程中可能出现的污染，缩短了操作时间，节约了实验成本。可在2小时内完成所有检测过程，有效地提高了临床检测效率。“HpH-Buffer”的试剂成本很低，全部检测成本与普通PCR扩增基本相同。
文摘目的通过对无精症患者异常染色体及Y染色体（Yqll．2区段）无精症因子（azoospermic fac—tor，AZF）微缺失的分析，探讨无精症与染色体异常的关系。方法对25例原因不明的无精症患者进行G带染色体核型分析、荧光口显带、荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）和AZF微缺失PCR检测。结果25例原因不明的无精症患者中染色体核型异常7例，异常发生率为28％；对8例无精症患者进行AZF微缺失检测：AZF区微缺失2例，分别为AZFb（SYl27，SYl34）＋AZFc（SY254，SY255）缺失、AZFc（SY243，SYl58）缺失。结论染色体异常及Y染色体AZF微缺失是引起无精症并造成男性不育的重要原因之一，对无精症等不育男性患者在排除睾丸病变、阻塞性无精症、内分泌及免疫系统等临床病理学因素后，包括配偶有不明原因习惯性流产的男性均需做外周血染色体常规GTG-显带、荧光Q-显带检查。Q-带阴性的患者说明其Y染色体长臂缺失的断裂点高于Yql2，在Yqll．2区段，则需要结合FISH和AZF微缺失的PCR检测，以确诊Y染色体的微缺失区段，为患者的临床进一步治疗提供可靠的依据。
文摘目的通过运用FISH和多重PCR技术,对不育和配偶难免流产的男性患者进行细胞染色体检查和Y染色体分子学方面的检测和比较,了解Y染色体异常对生育造成的影响。方法对研究对象分为3组,无精症组16例,少精症组11例;另有7例配偶难免流产的男性患者,进行外周血细胞培养和染色体G显带、C显带分析,并用荧光原位杂交(fluorescence in situ hyh-dizacion,FISH)和多重PCR检测分子学异常。结果 3组病人中无精症患者组中细胞染色体异常率最高(31.25%,5/16),其中3例为47,XXY及嵌合体;1例46,XX性发育异常,SRY阳性,AZFa,b,c区段完全丢失;1例46,X,del(Y)(q11.2)伴AZFb,c区段丢失;弱精少精症中微缺失检出1例(9.09%,1/11);难免流产组中FISH检出染色体异常1例,为46,XY/47,XXY。结论染色体异常和AZF微缺失是导致男性不育,尤其是无精症的重要原因,常规染色体检查及Y染色体异染色体长度占总Y染色体比率、FISH技术及多重PCR技术对AZF微缺失的系统检测可以男性不育患者明确病因,为临床诊断和遗传咨询提供帮助。
